植物HSP70反义基因工程雄性不育表达载体的构建及鉴定(英文)

[Objective]In order to study the relation between the HSP70 gene and male sterility of plant further.[Method]s]Anther specific expression promoter Osg6B of rice was coloned by PCR then connected with HSP70 antisense fragment to construct HSP70 antisense expression vector.The expression vector was identified by PCR experiment and enzyme digestion.[Result]The sequence of coloned Osg6B promoter had 97% homology to the published sequence,and the cis-regulatory element in promoter area was integrated.HSP70 antisense expression vector driven by the promoter Osg6B was confired by colony PCR and enzyme digestion.[Conclusion]The construction of expression vector would lay solid foundation for utilization of genetic engineering male sterility of plant.     

Construction and Identification of HSP70 Antisense RNA Expression Vector for Genetic Engineering Male Sterility in Plant

[Objective] In order to study the relation between the HSP70 gene and male sterility of plant further. [Methods] Anther specific expression promoter Osg6B of rice was coloned by PCR then connected with HStrlO antisense fragment to construct HSP70 antisense expression vector. The expression vector was identified by PCR experiment and enzyme digestion. [Result]The sequence of coloned Osg6B promoter had 97% homology to the published se-quence, and the cis-regulatory element in promoter area was integrated. HSIrlO antisense expression vector driven by the promoter Osg6B was confired by colony PCR and enzyme digestion. [Conclusion]The construction of expressio~a vector would lay solid foundation for utilization of genetic,engineering male sterility of plant.     

植物HSP70反义基因工程雄性不育表达载体的构建及鉴定

构建由水稻花药特异性启动子Osg6B驱动的植物HSP70反义表达载体,为进一步通过基因工程创制植物雄性不育奠定基础。     

植物HSP70反义基因工程雄性不育表达载体的构建及鉴定

[目的]为更好地研究HSP70热激蛋白基因与植物雄性不育的关系。用PCR方法克隆了水稻花药特异表达启动子Osg6B,将其与设计合成的HSP70反义片段连接,构建了由水稻花药特异表达启动子Osg6B驱动的HSP70反义表达载体,并进行了PCR和酶切鉴定。[结果]克隆的Osg6B启动子序列与所发表的序列同源性高达97%,启动子区域的顺式调控元件完整;构建的由水稻花药特异表达启动子Osg6B驱动的HPS70反义表达载体通过了菌落PCR验证和表达载体值粒的酶切鉴定,载体构建成功。[结论]该表达载体的构建将为植物基因工程雄性不育的利用奠定基础。     

利用HSP70反义基因片段创造植物雄性不育系

该文将HSP70反义基因片段与TA29花药特异性启动子连接构建成植物表达载体,应用农杆菌介导法将其导入到烟草细胞得到转基因植株.通过分子杂交检测和GUS基因表达检测及育性分析证明HSP70反义基因片段已整合进烟草基因组中,并导致转基因烟草出现雄性不育.花药和花粉的显微观察结果表明,转基因烟草的雌蕊正常、但花药和花粉出现败育,而对照植株的雌蕊和雄蕊都正常.通过线粒体HSP70蛋白的提取和测定,发现热激前后对照株的HSP70蛋白含量之比是1.39倍,转基因烟草不育株的HSP70蛋白含量之比为1.01倍,从而证明HSP70反义基因能够有效抑制HSP70蛋白表达而导致植物出现雄性不育.这一研究结果为利用基因工程技术创造植物雄性不育系提供了一种新的策略和途径.     

利用基因工程创造植物雄性不育的策略

利用基因工程创造植物雄性不育系是近年来发展的新技术。根据花粉败育的原理,利用花药细胞绒毡层、绒毡层线粒体、胼胝质壁、细胞减数分裂过程等花粉形成过程中的不同环节,采取外源细胞毒素基因、分子伴侣、反义RNA技术、提早降解胼胝质、扰乱线粒体与细胞核之间的信息交流和细菌影响花粉小孢子发育等策略,使花粉不能正常形成,从而产生不育花粉,达到产生雄性不育的目的。并提出了基因工程创造植物雄性不育系可能存在的问题及其应用前景。     

小麦核不育的遗传研究和雄性不育遗传模式的建立

综述了多年对小麦雄性不育研究的进展。太谷核不育小麦是显性雄性不育材料,它的显性不育基因Ms2位于4D染色体短臂上,距离着丝点31.16cM。以矮变1号小麦为标记性状供体,经大群体筛选和细胞学研究,研制出具有矮秆基因标记的显性核不育材料—矮败小麦。在矮败小麦中,矮秆基因Rht10与雄性不育基因Ms2在4D染色体短臂上连锁十分紧密,交换率仅为0.18%。该两基因的连锁片段已转移到中国春小麦ph1b突变体和八倍体小黑麦中。发现一套基因控制的雌雄性都不育的小麦遗传种质和双隐性基因控制的小麦核不育材料。综合分析已发现的核不育材料,提出植物基因互作型显性核不育材料起源假说;经遗传分析和数学推导,建立植物隐性核不育材料姊妹交后代育性遗传模式。     

细胞异常程序性死亡与植物雄性不育

针对绒毡层、减数分裂与雄性不育发生过程的关系作了简要的综述,并从细胞学与分子生物学水平阐述了细胞程序性死亡与雄性不育之间的关系,探讨了利用基因工程创造雄性不育的策略,并对今后的应用前景进行了展望。     

植物雄性不育类型及其遗传机制的研究进展

对植物雄性不育分类方法和类型进行了概述 ;对细胞质雄性不育的经典遗传及其分子遗传机制、细胞核雄性不育的遗传及不育基因的定位等研究进展进行了综述     

Inhibition of HSP70 Gene Expression by Modified Antisense and Its Effects on Embryonic Sensitivity to Heat Shock

Experiments were performed to evaluate the efficiency of inhibition of HSP70 gene expression by antisense oligonucleotides complementary to the mRNA of HSP70 and to test the effects of inhibition of HSP70 gene expression on subsequent embryonic sensitivity to heat shock. The results showed that transfection of pre-implantation embryos at 4-cell stage with 5 μM antisense oligo had no effect on in vitro blastocyst development. However, transfection with 10 to 40 μM antisense oligo had reduced in vitro blastocyst development to 15, 10% and 0; For the embryos which exposed to 40 μM As arrested at the 16-cell stage, there was no blastocyst formation within the heat shock groups. In contrast, transfection had no effect on embryonic sensitivity to heat shock, above 25% of embryos developed to blastocyst stage in control groups.     

绵羊肺炎支原体的分离鉴定及其HSP70基因遗传多样性

为探明新疆地区绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)流行株是否存在遗传多样性,用KM2培养基对塔城地区7个羊场疑似MO感染的肺脏病料进行病原分离,并进行菌落形态、生化试验和分子生物学鉴定。结果表明:15株分离均为MO,菌落呈乳头状,菌体呈多形性;能水解葡萄糖但不能水解精氨酸、尿素,可使美兰牛乳褪色、吸附并引起红细胞溶血;16Sr RNA序列大小为361bp。其中,5株MO HSP70基因的核苷酸同源性为94.1%,氨基酸同源性为93.2%,与MO标准毒株Y98相比,分离株在593位点均插入Gln(谷氨酰胺)。MO新疆分离株已发生遗传变异,存在遗传多样性。     

花绒寄甲HSP7O基因的特征与表达

为阐明热休克蛋白70(HSP70)在花绒寄甲(Dastarcus helophoroides)发育及雌雄成虫抵抗环境胁迫中的作用,利用实时荧光定量PCR技术分析了其在发育阶段和环境胁迫时的表达情况.从花绒寄甲转录组中获得3条HSP70基因,分别命名为D.hHSP69.09、D.hHSP70.11和D.hHSP7 1.88.发育阶段定量结果显示,3条HSP70在所有发育阶段均有表达,D.hHSP69.09在1龄幼虫期表达量最高;D.hHSP70.11和D.hHSP71.88在雄虫中表达量最高.在检测的成虫组织中,D.hHSP69.09和D.hHSP70.11在卵巢表达量最高;D.hHSP71.88在脂肪体中表达量最高.HSP70基因随温度升高(23℃升至44 ℃)、41℃下处理时间(0～ 270 min)延长、氧化剂浓度(0～ 70 mmol·L-1)的升高表达量先增加后减少,雌雄表达量差异较大.饥饿试验显示,雌雄虫表达模式不同;随饥饿时间延长,雄虫HSP70基因表达量有所降低,雌虫一定时间内有所上升.因此,花绒寄甲HSP70可能与不同发育期的转换、幼虫的蜕皮行为相关;HSP70对温度、氧化和饥饿胁迫的应激敏感程度和表达水平不同,能够有效应对高温、氧化、饥饿等环境胁迫.     

荷斯坦牛HSP70-1基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系分析

利用PCR-SSCP和PCR-RFLP相结合的方法检测HSP70-1基因在253头中国荷斯坦牛中的多态性,并分析其多态性与体细胞评分(SCS)的相关性.结果表明,HSP70-1基因扩增片断的1 623 bp处产生G-A的突变,1 623bp处产生G-A-C的突变.两位点都是沉默突变,未引起氨基酸序列的改变.HSP70-1基因分别经EcoRⅡ、BglⅠ、FokⅠ消化后表现多态性.经χ2 适合性检验,中国荷斯坦牛在该位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态.同时,群体基因座不同基因型与SCS相关分析的结果表明,2 409位点基因型与SCS相关性不显著,1623位点与SCS相关性显著,CC型SCS指标显著低于AG、GG型(P＜0.05),CC基因型可作为乳腺炎抗性的有利基因型,可将HSP70-1基因作为奶牛乳腺炎候选基因,将应用于分子标记辅助选择育种,为乳腺炎抗性牛群的选育奠定一定的理论基础.     

鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

[目的]研究HSP70是否可作为鲤鱼养殖中的应激监测指标。[方法]根据鲤鱼HSP70序列（AY120894）设计并合成1对引物,提取鲤鱼肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法克隆得到鲤鱼HSP70部分cDNA片段,然后检测其在鲤鱼心脏、肠、粘液、性腺、鳔、鳃、鳍等不同组织中的表达差异。[结果]RT-PCR扩增获得鲤鱼HSP70基因cDNA部分序列为480 bp。将测序后推测的氨基酸序列与其他种类的鱼进行同源性比较,结果发现与鲤鱼、斑马鱼、虹鳟、牙鲆、剑尾鱼、鲋鱼的同源性依次为96%、98%、98%、96%、96%、96%。HSP70在鲤鱼8个组织中均检测到表达,其中在心脏中表达最高,其次是鳔、鳍,二者之间无显著差异（P〉0.05）,在肠、粘液与脂肪3个组织中的表达无显著差异（P〉0.05）,但显著高于在性腺与鳃中的表达水平（P〈0.05）。[结论]HSP70作为鲤鱼养殖中应激程度、应激能力、健康状况检测的分子标记物是可行的。     

鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

1材料与方法 1．1材料 供试鲤鱼购自成都市洗面桥市场。主要试剂：TR—Iaol总RNA提取试剂盒购自Invitrogen公司,反转录试剂盒、pMD-18T载体、D12000DNA和如DNA聚合酶购自大连宝生物工程有限公司;琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自Axygen公司;DEPC原液（Sigma分装）、JM-109感受态细胞购自大连宝生物工程有限公司,其他试剂均为国产分析纯。     

雄性不育在棉花杂种优势上的研究与利用

本文综述了雄性不育的有关理论、棉花雄性不育的研究以及在棉花杂种优势上的利用等方面所取得的进展，并就雄性不育的理论研究及其在棉花杂种优势利用中存在的问题与前景作了分析和预测。     

反义技术及其在植物基因工程中的应用

概述了反义技术的作用机制及其在现代植物研究中的应用。反义技术在调控植物淀粉的合成与果实成熟、改良作物品质、改变植物花色、增强植物抗病性和研究未知基因的功能等方面具有重要作用,并对反义基因技术的应用进行了展望。     

反义技术及其在植物基因工程中的应用

反义技术是根据核酸杂交原理设计反义核酸来人为控制基因表达的方法,现已成为基因工程中的常用技术。文中就反义技术的作用机制、在植物基因工程中的应用及其前景作简要综述。     

水稻雄性不育遗传及分子生物学研究进展

综述了水稻雄性不育的遗传和分子生物学研究进展.光温敏核不育受1～2对隐性核基因控制,育性表达受基因和环境共同作用,光敏核不育基因被不同研究者分别定位在不同染色体上;核质互作型的雄性不育因细胞质类型不同,控制育性的基因不同;野败型和BT型的主要恢复基因均被定位于第10染色体的长臂上,BT型和滇型的恢复基因具有等位效应;细胞质中线粒体DNA于雄性不育密切相关,而关于叶绿体DNA与育性的关系还存在争议.