野生大豆CDPK基因保守区的克隆及序列分析

CDPK(Ca2+-dependent,calmodulinindependentproteinkinase)是植物钙信号传导过程中关键的蛋白激酶,在逆境胁迫信号传导过程中起到重要作用。研究基于同源序列候选基因的策略,根据已经公布的多个CDPK序列的比对结果,在保守性较高的区域,设计两对巢式简并引物,结合降落PCR和巢式PCR在野生大豆中克隆。对获得的序列片段进行序列分析,发现该序列具有激酶活性的功能区域和CDPK特有的EF手性结构区,并且与VrCDPK(U08140)序列达到94%的相似性,可以确定该片段是CDPK基因的保守序列。结果证明,野生大豆中也存在CDPK基因,并为通过RACE等方法获得野生大豆全长CDPK基因奠定了基础。     

白刺盐碱胁迫相关基因片段的克隆与分析

采用mRNA差异技术分离白刺盐碱胁迫相关基因片段,得到27个与白刺盐碱胁迫相关的基因片段,并且对它们的同源性进行了研究与分析。结果表明：有6个片段(A1013b,G388,G1013c,G1013c,C391a,C391a)分别与多种植物盐相关基因存在一定的同源性。基因片段C391a与多种植物如香树、烟草等叶绿体光系统亚基A(PsaA)有较高的同源性(86％～94％)。     

马铃薯PGA1基因的克隆及序列分析

糖苷生物碱是马铃薯块茎中普遍存在的一种有苦味的毒性甾类生物碱,其毒性可使人、动物变畸形或死亡,PGA1基因是催化糖苷生物碱合成的关键酶基因。通过同源克隆的方法,采用RT-PCR技术对马铃薯大西洋品种的PGA1基因进行克隆,获得了PGA1基因的c DNA序列;并对马铃薯PGA1基因进行生物信息学分析。结果表明,PGA1基因的CDS全长为1 497 bp,编码498个氨基酸,所编码蛋白的分子质量为57.087 ku,理论等电点为9.29,为不稳定蛋白;该蛋白的二级结构包括α螺旋(52.41%)、β转角(6.02%)、延伸链(12.85%)和无规则卷曲(28.71%),其中,α螺旋和无规则卷曲为主要元件,与预测的蛋白质三级结构一致。研究结果可为进一步深入了解PGA1基因的功能和调控机制,利用基因工程技术调控马铃薯中糖苷生物碱含量提供理论依据。     

植物对盐碱胁迫响应机制的研究进展

土壤盐碱化是限制植物生长发育和阻碍农业生产力的重要非生物胁迫之一.本文从离子毒害、渗透胁迫、活性氧胁迫和高pH胁迫4个方面综述了盐碱胁迫对植物的危害.为了应对盐碱胁迫,植物进化出一系列的调控机制以缓解胁迫危害.从渗透调节物质的合成、离子的吸收转运调节、活性氧清除机制和外源物质调节方面梳理了植物耐盐碱的生理机制;从植物盐...     

苍耳对盐碱胁迫的生理响应

采用不同浓度的NaCl、NaHCO_3溶液对苍耳幼苗进行胁迫处理,分析胁迫处理对苍耳幼苗的生长、光合指标、无机离子、有机溶质及渗透调节剂的渗透调节贡献率的影响,重点研究苍耳对碱胁迫的生理适应机制。结果表明:盐碱胁迫显著抑制了苍耳的生长和光合。随胁迫强度的增加,叶内Na~+质量摩尔浓度、Na~+质量摩尔浓度与K~+质量摩尔浓度的比增加,碱胁迫下增加幅度更大。盐胁迫下,在根部和叶内,Na~+、K~+和游离脯氨酸均是主要的渗透调节物质;3者渗透调节中的平均贡献率的总,在根部为73.89%、在叶内为61.96%。碱胁迫下,根部和叶片显示出不同的渗透调节机制:在根部,Na~+和游离脯氨酸是主要的渗透调节物质,平均贡献率分别为58.44%和16.25%,K~+的渗透调节作用很小;在叶内,Na~+、K~+、游离脯氨酸均起到重要的渗透调节作用。与盐胁迫相比,碱胁迫对植物的伤害作用更大。苍耳通过Na~+、K~+、游离脯氨酸等渗透剂对根部和叶内渗透调节的积极参与,对碱胁迫具有一定的适应能力。     

沙枣响应盐碱胁迫机制研究进展

土壤盐碱化是严重的环境问题.盐碱胁迫会抑制植物正常生长发育.沙枣(Elaeagnus angustifo-lia)是胡颓子科(Elaeagnaceae)胡颓子属(Elaeagnus)落叶小乔木,具有较高的经济价值,同时具有一定的耐旱耐盐碱能力及改良盐碱土的功效.我们对国内外有关盐碱胁迫对沙枣影响的研究进行归纳,主要包括...     

胡枝子对盐碱胁迫的生理响应

试验采用不同浓度的Na2 CO3、NaHCO3及盐碱混合(n(Na2CO3)∶n(NaHCO3)=1∶1)溶液对胡枝子幼苗进行胁迫处理,比较分析盐碱胁迫对胡枝子幼苗的生长及其叶片质膜透性、游离脯氨酸及可溶性糖的影响,初步探讨胡枝子的抗盐碱能力.结果显示:在3种盐碱胁迫下,胡枝子叶片电导率、脯氨酸质量分数、可溶性糖质量分数均随胁迫强度的增加、时间的延长而增加.低、中浓度胁迫对植株造成的伤害相对较弱,高浓度胁迫下胡枝子表现出较严重的盐害症状,生理指标的分析结果与实际生长状态基本一致.到胁迫后期第55天时,Na2CO3浓度为150 mmol·L-1、NaHCO3浓度为150 mmol·L-1、Na2CO3和NaHCO3的混合溶液浓度为150 mmol·L-1处理下电导率分别达到对照的2.24、1.84、1.72倍,脯氨酸质量分数分别为对照的7.32、5.76、5.37倍,可溶性糖质量分数较对照分别增加了67.37％、56.65％、52.50％.脯氨酸、可溶性糖的增加都可以看作是植物适应盐渍环境及增加自身抗盐能力的表现,说明胡枝子对碳酸盐具有一定的适应能力.3种胁迫对胡枝子的伤害程度不同,Na2 CO3造成的伤害最大,NaHCO3次之,混合盐碱对胡枝子造成的伤害程度最弱.     

湖北白猪IGF-1基因的克隆及序列分析

[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子（IGF-1）基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2（5＇-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3＇）引物合成IGF-1基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1（5＇-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3＇）和P2为上下游引物扩增到大小约为607bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-1基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1～145位是5＇端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子,539～607位是3＇端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-1基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-1基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-1基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。     

猪Mx1基因cDNA的克隆及序列分析

 为获得云南本地猪Mx1基因cDNA序列,根据GenBank中猪Mx1基因的参考序列,设计合成3对引物。以云南本地猪外周淋巴细胞为样本,采用RT-PCR方法进行分段扩增,对扩增片段进行克隆,测序分析及序列拼接。结果表明,扩增的云南本地猪Mx1基因cDNA全长2546bp,开放阅读框1992bp,编码663个氨基酸,与GenBank中他猪种Mx1基因序列对比,核苷酸序列的同源性为99.4%～99.8%,氨基酸序列的同源性为98.8%～99.5%。成功获得云南本地猪Mx1基因的cDNA序列,为研究云南本地猪Mx1蛋白的抗病毒活性及作用机制奠定了基础。     

碱胁迫应答GsGASA1及GsGASA2基因表达特性研究

野生大豆具有很强的抗逆性和适应能力,是利用基因工程手段进行作物抗逆分子育种的重要基因来源供体材料.为了获得具有自主知识产权、在植物渗透胁反应中起关键作用的功能基因,利用前期构建的野生大豆碱胁迫基因芯片表达谱,从中选取两个碱胁迫处理下显著上调表达,经分析预测属于GASA基因家族的基因(probesets分别为Gma.15...     

逆境诱导基因GsSNARE1的耐逆功能分析

【目的】分离GsSNARE1,并分析其耐逆功能,为深入研究GsSNARE1功能及分子机制奠定基础。【方法】以耐盐野生大豆G50109为材料,利用酵母双杂交验证GsSNARE1与GsCBRLK的互作关系,通过real-time PCR分析干旱和盐处理后GsSNARE1的表达特性,对GsSNARE1进行原核表达,分析GsSNARE1抗盐旱功能。【结果】获得与GsCBRLK互作的GsSNARE1,同源克隆其全长CDS,并在酵母体内验证了二者的相互作用;Real-time PCR分析表明GsSNARE1受盐、干旱胁迫诱导,经PLACE分析,发现其启动子中含有多个逆境胁迫相关的顺式作用元件;GsSNARE1在植物不同组织中均表达;GsSNARE1的表达降低了重组菌对盐、干旱胁迫的耐性。【结论】验证了GsSNARE1与GsCBRLK的互作关系,GsSNARE1在不同组织中均表达,且受盐、干旱胁迫诱导,GsSNARE1的表达降低了重组菌耐盐、耐旱能力。     

混合盐碱胁迫对白三叶种子萌发的影响

用不同浓度的NaCl、Na2SO4、NaHCO3和Na2CO3混合液对白三叶种子进行种子萌发试验,观察、测定不同浓度盐碱胁迫下种子的发芽率、发芽势和发芽指数、活力指数。结果表明,低浓度混合盐碱溶液对白三叶种子的萌发具有促进作用,发芽率、发芽势和发芽指数升高;高浓度混合盐碱溶液处理则抑制白三叶种子萌发,各项指标均下降。盐胁迫和碱胁迫同时存在时,两者共同影响种子萌发,且有交互作用。     

白鹭源禽I型副粘病毒L基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT—PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒（W13株）L基因的IJA（1121bp）、LB（1481bp）、LC（1439bp）、LD（1476bp）、LE（1608bp）5个片段,用DNAStar软件比较分析后进行拼接,获得长约6760bp包含有L基因全长的核苷酸序列,而W13株L基因的mRNA全长为6704bp、开放阅读框（ORF）为6615个碱基、编码2204个氨基酸。氨基酸同源性分析表明：W13株I基因与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过97．0％;而核苷酸同源性分析表明：W13株L基因与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过93．0％。可见,W13株与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的亲缘关系较近。     

Constitutive Overexpression of Myo-inositol-1-Phosphate Synthase Gene (GsMIPS2) fromGlycine soja Confers Enhanced Salt Tolerance at Various Growth Stages inArabidopsis

The enzymemyo-inositol-1-phosphate synthase (MIPS EC 5.5.1.4) catalyzes the first step ofmyo-inositol biosynthesis, a product that plays crucial roles in plants as an osmoprotectant, transduction molecule, cell wall constituent and production of stress related molecule. Previous reports highlighted an important role of MIPS family genes in abiotic stresses particularly under salt stress tolerance in several plant species; however, little is known about the cellular and physiological functions ofMIPS2 genes under abiotic conditions. In this study, a novel salt stress responsive gene designatedGsMIPS2 from wild soybean Glycine soja07256 was functionally characterized contained an open reading frame (ORF) of 1 533 bp coding a peptide sequence of 510 amino acids along with mass of 56 445 ku. Multiple sequence alignment analysis revealed its 92%-99% similarity with other MIPS family members in legume proteins. Quantitative real-time PCR results demonstrated thatGsMIPS2 was induced by salt stress and expressed in roots of soybean. The positive function ofGsMIPS2 under salt response at different growth stages of transgenicArabidopsis was also elucidated. The results showed thatGsMIPS2 transgenic lines displayed increased tolerance as compared to WT andatmips2 mutant lines under salt stress. Furthermore, the expression levels of some salt stress responsive marker genes, including KIN1,RD29A, RD29B,P5CsandCOR47 were significantly up-regulated inGsMIPS2 overexpression lines than wild type andatmips2 mutant. Collectively, these results suggested thatGsMIPS2 gene was a positive regulator of plant tolerance to salt stress. This was the first report to demonstrate that overexpression ofGsMIPS2 gene from wild soybean improved salt tolerance in transgenicArabidopsis.     

油葵对沼液灌溉引起的盐碱胁迫响应

为解决养殖业废弃物沼液长期灌溉引起农田盐渍化风险问题,本研究选择油葵作为沼液消纳作物研究其耐盐碱性并进行大田验证.通过室内模拟沼液中盐分主要的胁迫类型,配制不同浓度盐、碱离子进行油葵种子发芽胁迫实验,明确油葵发芽期对沼液中盐、碱胁迫的耐受阈值,同时大田实验设置不同沼液灌溉量灌溉油葵,观测生长状况和农艺性状,综合分析油葵对盐、碱胁迫的响应机制.结果 表明,油葵发芽对中性盐耐受阈值在180～240 mmol?L-1之间,对碱性盐离子耐受阈值在60～120 mmol?L-1之间.发芽过程中,碱性盐离子浓度为60 mmol?L-1时,细胞膜相对透性为24％,与中性盐(22％)相近,但相对盐害率为32.36％,显著高于中性盐处理(1.45％),K+/Na+下降91.11％～92.81％,中性盐处理下K+/Na+下降79.90％～87.33％.大田试验利用Na+浓度约为35 mmol?L-1沼液长期灌溉油葵,在低灌溉量(150 m3?hm-2)下,油葵各农艺性状变化不大,且K+/Na+差异不显著,但在高灌溉量(600 m3?hm-2)下,油葵生长各农艺指标受到抑制,各组织K+/Na+下降57％～88％.研究表明,碱性盐产生的高pH危害高于盐离子渗透胁迫,且碱性盐会更大程度破坏油葵离子稳态,影响油葵发芽与生长.利用养殖业废弃物中沼液作为再生水资源灌溉农田,应控制其HCO-3、CO2-3的含量,调控废水pH,以降低对农作物的伤害.     

鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定及VP1基因序列分析

应用无母源抗体的鸭胚从疑似病毒性鸭肝炎的病麻鸭肝脏中分离到1株病毒。该分离毒能致死鸡胚、番鸭胚和麻鸭胚,死胚尿囊液均无血凝性;病毒能被鸭病毒性肝炎高免血清特异性中和;病毒人工感染3日龄麻鸭发病率和死亡率均达50%,并从病死鸭肝脏中回收到分离毒;RT-PCR扩增结果表明分离毒为I型DHV阳性,同时将此扩增的1 052 bp目的片段克隆到pMD18-T载体,对重组阳性质粒进行序列测定和分析表明分离毒的VP1基因与台湾省分离株DHV-03D的亲缘关系最近,同源率为95.7%,对VP1氨基酸潜在位点分析发现该分离毒具有野毒的分子特征。上述结果表明该分离毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒,命名为DHV-NA株。     

沙冬青A20／ANl锌指蛋白基因序列及表达分析

A20/AN1锌指蛋白普遍存在于真核生物中,在胁迫响应引起的信号传导过程中发挥着重要作用。本文利用生物信息学和RT-PCR方法从低温干旱胁迫的沙冬青叶片组织中分离锌指蛋白基因AmSTZF,该基因编码一条含172个氨基酸残基的多肽,含A20和AN1两个锌指蛋白保守结构域,属A20/AN1锌指蛋白。生物信息学分析显示该蛋白定位于细胞质中,具有磷酸化位点,参与细胞转录调控。RT PCR分析表明:低温和干旱胁迫处理的沙冬青叶片中,AmSTZF的表达增强,初步推测该基因与沙冬青低温、干旱胁迫响应相关。      

沙冬青GATA型锌指蛋白基因序列及表达分析

根据沙冬青低温干旱诱导cDNA文库表达序列标签中锌指蛋白基因序列设计特异引物,采用PCR技术扩增锌指蛋白基因AmZFPG的cDNA全长.序列分析表明,cDNA全长669 bp,推测编码223个氨基酸残基、分子量约25 kD的蛋白质.氨基酸保守性分析及同类锌指结构比对表明AmZFPG属于GATA结合蛋白家族,且具有高度的...