反季节调控对鹅PRL和PRLR基因表达的影响

为研究反季节生产期鹅催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因表达情况,选取经反季节调控处于产蛋期(试验组)和未调控处于正常休产期(对照组)母鹅,采集垂体、下丘脑和卵巢组织,应用实时荧光定量PCR技术研究PRL和PRLR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明:PRL和PRLR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织均有表达,在垂体中表达量最高;PRL基因在试验组鹅垂体中表达量极显著高于对照组,而PRLR基因在试验组鹅垂体中表达量极显著低于对照组;PRL基因在试验组鹅下丘脑中表达量显著高于对照组,而PRLR基因在两组鹅下丘脑中表达元显著差异;PRL基因在两组鹅卵巢中表达量无显著差异,而PRLR基因在试验组鹅卵巢组织中表达量极显著高于对照组。反季节调控可增加鹅垂体和下丘脑中PRL基因表达,抑制垂体PRLR基因表达,增加卵巢中PRLR基因表达。     

笼养模式对黑羽番鸭PRL和PRLR基因表达的影响

为探明不同饲养方式对产蛋期黑羽番鸭催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因表达的影响,应用实时荧光定量PCR技术,对产蛋期(30周龄)笼饲养(试验组)和地面饲养(对照组)的黑羽番鸭垂体和子宫组织进行检测,研究PRL与PRLR基因表达量的变化。结果表明:PRL和PRLR基因在垂体和子宫组织均有表达;试验组黑羽番鸭垂体中PRL基因表达量显著高于对照组,而PRLR基因表达量显著低于对照组;PRL基因在2组黑羽番鸭子宫中表达量无显著差异,而PRLR基因在试验组黑羽番鸭子宫组织中表达量极显著低于对照组。应用笼养技术可增加黑羽番鸭垂体中PRL基因的表达,抑制垂体和卵巢中PRLR基因的表达。     

内蒙古绒山羊下丘脑中MTNR1a基因的表达

本试验从内蒙古绒山羊下丘脑中提取总RNA,根据已发表的相近物种MTNR1a序列设计引物,利用逆转录多聚酶链式反应技术及组织原位杂交技术检测褪黑素受体基因MTNR1a在内蒙古绒山羊下丘脑中的表达及其分布,结果显示:MTNR1a基因在内蒙古绒山羊下丘脑中广泛表达,说明下丘脑是褪黑激素作用的靶器官。结果提示:褪黑激素对绒山羊季节性繁殖的影响有可能与下丘脑分泌的某些激素相互作用而发挥其生物学功能的。     

山羊促甲状腺素β亚基基因(TSHB) cDNA克隆 与组织表达研究

促甲状腺素β亚基基因(TSHB)主要表达于动物垂体腺,其表达受到光照周期调控并且与动物季节性繁殖活动密切相关.本实验以济宁青山羊和辽宁绒山羊为研究对象,运用RT-PCR方法克隆获得山羊TSHB基因部分cDNA序列(GenBank No.:JQ937288),并使用RT-PCR与荧光定量PCR技术检测TSHB基因在济宁青山羊与辽宁绒山羊下丘脑-垂体-卵巢繁殖轴及其他组织的表达分布情况.结果表明,山羊TSHB基因编码区417bp,编码含有138个氨基酸的蛋白质;各哺乳动物间TSHB基因高度保守,山羊与绵羊、牛TSHB基因同源性最高,达99％;另外,两品种山羊TSHB基因均在垂体中高表达,在济宁青山羊下丘脑、卵巢及海马等组织低度表达,而在辽宁绒山羊下丘脑低度表达,两品种其他组织均没有表达.非繁殖季节济宁青山羊垂体TSHB基因表达水平是辽宁绒山羊的1.6倍(P=0.061),其对季节性繁殖的调控功能值得进一步研究.本研究首次对山羊TSHB基因cDNA序列进行了克隆和表达分析,研究结果对山羊繁殖调控具有重要意义.     

光照对兴国灰鹅PRL基因表达的影响

为调节兴国灰鹅繁殖的季节性,选择健康且体重均匀的兴国灰鹅进行短光照处理,分析光照处理对兴国灰鹅的垂体、下丘脑、卵巢和输卵管4个组织催乳素（PRL）基因表达的影响。研究结果表明,PRL基因 mRNA在垂体、下丘脑、输卵管和卵巢的表达依次降低,垂体的表达最高,卵巢最低。与自然光照处理（对照）相比,试验组垂体和输卵管PRL的表达显著低于对照组（P〈0.05）,下丘脑和卵巢PRL的表达在试验组和对照组间无明显差异,表明光照处理的兴国灰鹅在产蛋期PRL基因表达明显减少。     

不同饲养方式对蛋鸭产蛋性能的影响及其机制

旨在探讨单笼饲养、双笼饲养、散养和网上平养四种养殖模式对蛋鸭（Anas platyrhynchos）产蛋性能的影响及其影响机制。191羽优质蛋鸭品种山麻鸭被分成单笼、双笼、网上平养、散养四组,记录其产蛋率和日耗料量,研究不同饲养模式对产蛋性能的影响。同时,应用real-time PCR技术检测在不同养殖模式下山麻鸭下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺等组织中产蛋相关基因的表达,筛选出其中差异表达基因。结果表明,双笼饲养的山麻鸭产蛋性能和饲料转化率最低,单笼饲养的产蛋性能最佳。产蛋相关基因差异表达检测发现,在不同饲养模式下,促肾上腺激素释放激素（corticotropin-releasing hormone, CRH）基因在下丘脑和垂体组织中,阿黑皮素原（proopiomelanocortin, POMC）基因在垂体组织中的表达无显著差异。在双笼饲养模式下,黑素皮质素受体（melanocortin 2 receptor, MC2R）基因在山麻鸭垂体中的表达量最高,催乳素受体（prolactin receptor, PRLR）基因在卵巢中表达量最高,而骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic proteins 4,BMP4）基因在卵巢中表达量最低。结果提示,（1）双笼饲养会导致蛋鸭的产蛋性能下降; （2）双笼饲养的蛋鸭可能长期处于应激状态,诱使垂体中MC2R基因高表达,进而调控HPA轴激素分泌,抑制HPG轴的活性,使得卵巢中的PRLR及BMP4等产蛋相关基因异常表达,两个信号通路交互作用,最终影响了蛋鸭的产蛋性能。     

多浪羊PRLR基因克隆测序及不同组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊催乳素受体基因（PRLR）CDS区序列，并检测不同组织中PRLR基因在初情期前后表达差异，为PRLR基因在初情期启动过程中发挥的主要作用提供参考依据。【方法】利用RT-PCR技术和使用相关的生物学信息软件预测其编码蛋白的结构和功能，通过qPCR检测多浪羊初情期前后各组织中的PRLR基因的表达水平。【结果】获得了多浪羊PRLR基因的CDs区序列长1 746 bp。多浪羊的3个时期5个组织中均有PRLR基因的表达。PRLR基因在初情期前多浪羊垂体组织中的表达量显著高于其他组织（P<0.05）；初情期垂体组织中PRLR基因的表达量仍显著高于其他4个组织（P<0.05），初情期后下丘脑和垂体组织中PRLR基因的表达量显著高于其他3个组织（P<0.05）；初情期垂体和输卵管组织中PRLR基因的表达量升高，初情期后显著高于初情期前和初情期后（P<0.05）。【结论】揭示了PRLR基因可能在多浪羊初情期启动的过程中参与了调控。     

5个基因在小尾寒羊和苏尼特羊性腺轴相关组织中表达分析

【背景】随着人们生活水平不断提高,蛋白含量丰富、胆固醇含量较少的羊肉在日常生活中越来越受青睐,羊肉总体消费需求呈逐年增长趋势。但是近年来以羊肉为主的羊产品短缺,导致羊肉的价格一直居高不下,造成羊肉供需之间的矛盾。在早期对绵羊各项生产性能研究中发现,其繁殖性能高低对羊肉生产有重要影响。因此,提高绵羊繁殖力对改变我国肉羊生产周转慢、效益差的局面有重要意义。产羔数是最重要的繁殖性状,但产羔数是一个低遗传力的数量性状,且受微效多基因的控制,故传统的育种方法难以快速改良产羔数性状。近年来随着分子标记技术的出现,研究人员发现了一些影响绵羊繁殖力的主效基因,比如BMPR1B、BMP15、GDF9等,所以后期人们开始利用常规育种结合这些分子标记进行高繁殖力绵羊品种选育。研究表明除了这些已经发现的主效基因外,仍有一些基因对绵羊的繁殖力具有一定的调控作用。【目的】探究影响绵羊繁殖力的候选基因BMP2、BMP6、BMP7、CAST和CART在小尾寒羊和苏尼特羊性腺轴相关组织(大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管)的表达差异,为阐明绵羊高繁殖力机理提供参考。【方法】以产多羔的小尾寒羊和产单羔的苏尼特羊为对象,利用实时荧光定量PCR检测上述5个基因在两个绵羊品种与性腺轴相关的7种组织中的表达差异。【结果】BMP2在小尾寒羊和苏尼特羊的性腺轴7种组织中均有表达,在小尾寒羊下丘脑中的表达量高于苏尼特羊(P0.05),在小尾寒羊输卵管、卵巢、垂体、小脑的表达量高于苏尼特羊(P0.01),但该基因在2种绵羊的大脑和子宫中表达量差异并不显著(P0.05);BMP6在小尾寒羊垂体和卵巢以及输卵管中表达量高于苏尼特羊(P0.01),虽然该基因在小尾寒羊的下丘脑、子宫中的表达量高于苏尼特羊,但其表达差异并不显著(P0.05);BMP7在小尾寒羊垂体、大脑的表达量高于苏尼特羊(P0.05),在小尾寒羊下丘脑、输卵管、卵巢中的表达量高于苏尼特羊(P0.01),但该基因在小尾寒羊和苏尼特羊的小脑和子宫中表达量差异并不显著(P0.05);CAST在小尾寒羊和苏尼特羊的下丘脑、垂体中呈痕量表达,在其它组织中均有较高表达量,其在小尾寒羊输卵管和子宫中的表达量高于苏尼特羊(P0.01),但在小尾寒羊和苏尼特羊大脑中的表达量几乎相同(P0.05);CART在2种绵羊下丘脑中有较高表达量,在苏尼特羊垂体中的表达量高于小尾寒羊(P0.05),在小尾寒羊大脑中的表达量高于苏尼特羊(P0.01),而该基因在2种绵羊其它组织中的表达量差异并不显著(P0.05)。【结论】暗示这5个基因可能对绵羊繁殖力具有一定的调控作用。     

山羊卵巢富集chi-miR-100f-5p的鉴定与表达分析

【目的】探讨山羊卵巢中富集的miR-100及预测的靶基因与山羊卵巢功能及卵泡发育的潜在关系,为山羊繁殖机理研究提供数据。【方法】 以山羊卵巢组织为材料,通过miRNA的分离、克隆及测序得到山羊卵巢中表达的miR-100,采用RT-qPCR进行表达检测,用生物信息学方法预测miR-100的靶基因及其功能。【结果】① 山羊卵巢的测序结果中,一段成熟体为21nt 的序列与果蝇dan-miR-100高度同源,将其命名为chi-miR-100f-5p,其前体位于基因组负（-）链上,长度为59 bp,定位于山羊CM000899.1:33 997 894—33 997 914序列;② chi-miR-100f-5p 在山羊卵巢、垂体及心脏等组织中均有表达,说明此miRNA不是卵巢组织所特有;心脏和垂体组织中均有较高表达,其次是卵巢,而在肝脏、脾脏、肺及肾脏中表达显著低于卵巢（P ＜0.01）;在单产羔内蒙古绒山羊卵巢中chi-miR-100f-5p的表达极显著高于高繁殖力大足黑山羊卵巢（P＜0.01）;③ chi-miR-100f-5p主要靶作用于整合蛋白β1亚基基因及垂体特异性转录因子1基因,可能参与整合蛋白信号通路,促进垂体内分泌细胞的生长与分化,调节下丘脑-垂体-性腺轴激素分泌。【结论】山羊卵巢中新发现的chi-miR-100f-5p 可能是与繁殖调控有关的重要候选miRNAs 之一。     

泌乳期小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP 和PrRP-R mRNA的表达规律

【目的】探讨泌乳期小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,为PrRP生理功能的确定奠定基础。【方法】选用泌乳6,12,18d小鼠,取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑、垂体、卵巢中PrRP、PrRP-R mRNA的表达水平;同时利用放射免疫法(RIA)测定血浆的孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,通过双侧相关分析,探究血浆P、E2、PRL水平与下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP、PrRP-R mRNA表达量的相关关系。【结果】泌乳期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中均有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢的PrRP mRNA表达水平最高。泌乳期小鼠血浆E2水平与卵巢PrRP mRNA的表达水平呈显著负相关,而卵巢的PrRP mRNA表达水平与垂体的PrRP-R mRNA表达水平呈显著正相关。【结论】泌乳期小鼠卵巢PrRP可能通过垂体间接抑制E2的分泌,进而调节相关泌乳活动。     

3种绒山羊羊绒超微结构的研究

比较了西藏绒山羊,辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊的羊绒超微结构,发现西藏绒山羊与辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊在羊绒鳞片高度和鳞片密度具有明显判别,羊绒正皮质细胞和副皮质细胞呈双边结构,西藏绒山羊,内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊羊绒的正皮质细胞比列分别为５４．９８％和５６．９６％、６４．３９％。     

中国绒山羊蛋白质和氨基酸营养研究新进展

对中国高产绒山羊绒毛纤维生长对营养反应的研究进行了综述。中国的高产绒山羊品种与国外低产品种对日粮蛋白质水平反应的差异,除与其遗传基础有关以外,主要的原因可能与日粮蛋白质的品质和氨基酸组成有关。甄玉国采用灌注营养技术、慢性血插管技术和稳定性同位素示踪技术等手段和方法,对内蒙古白绒山羊的氨基酸吸收和利用及蛋白质周转规律进行了系统研究。结果表明：在一定日粮条件下,中国高产绒山羊(内蒙古白绒山羊)小肠可吸收氨基酸中存在一种相对平衡的有利于绒毛纤维生长的理想模式。改善小肠可吸收氨基酸模式,提高小肠可吸收氨基酸水平,可提高绒山羊的生产性能,从而进一步证明了绒山羊氨基酸代谢和需要的特殊性。     

内蒙古绒山羊CRABP I基因的克隆及表达

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ（cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ）基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp（JN936490）,其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABP Ⅰ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位点和O糖基化位点;蛋白二级结构主要由α 螺旋、β折叠和少量的转角及无规则卷曲构成。胎儿皮肤中CRABPⅠ基因在 90 d 的表达量明显高于100、120和130 d（P<0.05）。【结论】绒山羊的CRABPⅠ基因cDNA中的开放阅读框（open reading frame,ORF）在不同物种间较为保守,但种属特异性集中表现在第33和123氨基酸残基处,该基因在胎儿期的90 d表达量最大。     

内蒙古白绒山羊褪黑激素受体基因SNP与产绒性状的关联

【目的】研究绒山羊褪黑激素受体（melatonin receptor,MTNR）基因的SNP与绒山羊产绒性状的关系,寻找可用于辅助选择的分子标记。【方法】以内蒙古阿尔巴斯型白绒山羊为研究对象,选择绒山羊褪黑激素受体（MTNR1a和MTNR1b）基因部分序列作为候选基因,采用PCR-SSCP分子标记技术和DNA测序技术研究其多态性,然后运用最小二乘方差分析方法,对各基因型间生产性状指标进行差异显著性检验。【结果】① 在绒山羊MTNR1a基因外显子1和2,以及MTNR1b基因外显子1没有检测到SSCP多态,而在绒山羊MTR1b基因外显子2中存在SSCP多态,首次检测到了3个SNP;② P4引物位点存在NM_001206907:g.648 bp处C-G突变,该突变没有导致氨基酸的改变;以及NM_001206907:g.665 bp处的G-A突变,该突变导致第223个密码子CGC变成CAC,从而使精氨酸变成组氨酸（Arg-His）;方差分析表明,该位点多态对绒山羊产绒量有显著影响（P＜0.05）;③AA基因型具有较高的产绒量,比AB、BB基因型产绒量分别高98.78和148.23 g,同时该多态位点基因型与年龄互作效应对绒山羊绒厚度有显著影响（P＜0.05）;④ P5引物位点存在NM_001206907:g.1 015 bp处的G-A突变,该突变导致第339个密码子GGC变成AGC,从而使甘氨酸变成丝氨酸（Gly-Ser）,分析表明该多态位点基因型与年龄互作效应对绒山羊绒细度存在边际显著影响（P＜0.1）;⑤ 这两个位点多态对绒山羊产羔数量、羔羊初生体重等繁殖性状均无显著影响（P＞0.05）。【结论】P4-AA基因型可以作为内蒙古阿尔巴斯型白绒山羊产绒量性状辅助选择的标记基因型。     

海门山羊GATA-4转录因子的表达

本试验选用2个山羊品种(海门山羊和安徽白山羊),采用实时定量PCR技术,检测了GATA-4转录因子在2个山羊品种下丘脑、肌肉、心脏、垂体、卵巢、肝、子宫、脾、肾和脑组织中的表达情况。结果显示:GATA-4转录因子在海门山羊各组织中都有表达,且在海门山羊下丘脑和垂体组织中GATA-4转录因子的表达量高于安徽白山羊。表明GATA-4在海门山羊下丘脑和垂体组织中的表达水平可能影响海门山羊的繁殖能力。     

内蒙古绒山羊4个群体遗传多样性分析

选用30个微卫星座位,对内蒙古绒山羊4个种群(阿尔巴斯、二狼山、乌珠穆沁、阿拉善)的176份样本进行遗传多样性检测,结果表明,内蒙古绒山羊4个群体均具有丰富的遗传多态性.4个种群的期望杂合度(He)、平均多态信息含量(PIC)和平均有效等位基因数(Ne)分别为0.735 4～0.783 2、0.623 6～0.639 1、2.57～4.92;阿尔巴斯绒山羊与二狼山绒山羊遗传距离较近;阿拉善绒山羊与乌珠穆沁绒山羊遗传距离则较近.此研究为开展内蒙古绒山羊种质特性研究及资源保护和利用提供了科学依据.     

绒山羊随机扩增多态DNA研究

利用RAPD技术对西藏绒山羊、内蒙绒山羊、辽宁绒山羊的遗传变异进行了分析比较 ,用 37个随机引物和 5 5个两两组合的随机引物组合进行筛选 ,筛选出了 5个多态性较为丰富的随机引物 (组合 )。用其对 3个品种 ,每个品种 2 8个个体进行扩增。由RAPD指纹图计算出西藏绒山羊同内蒙绒山羊的遗传距离为 0 0 876 ,西藏绒山羊同辽宁绒山羊的遗传距离为 0 16 0 1,内蒙绒山羊同辽宁绒山羊的遗传距离为 0 0 80 3,西藏绒山羊、内蒙绒山羊、辽宁绒山羊的遗传变异分别为 0 32 6 6 ,0 2 6 2 2 ,0 2 4 75。     

山羊高繁殖力候选基因BMP15的RFLP分析

以控制R om ney Inverdale绵羊和R om ney H anna绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15(BM P 15)基因为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测BM P 15基因在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)以及低繁殖力山羊品种(内蒙古绒山羊、安哥拉山羊、波尔山羊)中的多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:BM P 15基因在济宁青山羊、内蒙古绒山羊、安哥拉山羊和波尔山羊中既未发生与Inverdale绵羊相同的V 31D突变,也未发生与H anna绵羊相同的Q 23T er突变。这表明BM P 15基因这2个突变位点对济宁青山羊的高繁殖力没有显著影响。