基于卡那霉素浸种萌发的转基因棉花后代的快速筛选

为了对转基因棉花后代进行快速有效的筛选,本研究利用Kan溶液在培养皿上对转基因棉花后代种子进行浸种萌发以及幼苗培养后的鉴定研究。结果表明,经过80 mg/L的Kan溶液浸种萌发及幼苗培养后,与非转基因棉花种子相比阳性转基因棉花种子萌发后下胚轴伸长较快、幼苗子叶无黄色斑块,并且根系正常生长。该形态筛选结果与PCR鉴定基本一致,因此利用Kan溶液浸种萌发法能够简便、快速、大量地筛选出阳性转基因棉花植株。     

卡那霉素浸种筛选转基因棉花的初步研究

转基因技术已经被广泛应用于作物的抗虫、抗病及高品质等的改良育种 ,而且转基因植株的鉴定方法也有多种 ,其中带有NPTⅡ标记基因的转基因后代材料的大田筛选 ,主要是在苗期 ,利用卡那霉素溶液 (Kanamycin)点涂植株幼叶 ,以幼叶的变黄与否来确定。为防止漏点漏涂 ,出现假阳性植株 ,须在花铃期以前对材料点涂 2～ 3次 ,因此从大量的转基因材料中筛选转基因植株 ,工作量相当大。本研究的目的是试图筛选出适当的卡那霉素浓度 ,通过浸种以快速地鉴定出转基因植株。1　材料和方法1.1　供试材料转基因抗虫棉新棉 33B、非抗虫棉豫棉 11号和转基因…     

转基因棉花的田间筛选技术研究

利用不同浓度的卡那霉素对棉花叶片进行处理,较为系统地研究了棉花不同品种、不同叶位、不同生育时期内叶片对卡那霉素处理的反应。在此基础上建立了一种在田间对转基因棉花进行筛选的简便方法。研究表明,在棉花花铃期以前,利用5000～7500mg,L-1卡那霉素对转基因棉花新展开的倒1叶和倒2叶进行检测,能够有效筛选出带有卡那霉素标记基因的转基因后代,这对于转基因棉花材料的选育有较大的利用价值。     

中国棉花转基因研究与应用

近十年来 ,植物基因工程取得了辉煌的成就 ,尤其是许多大田作物 (如水稻、玉米、烟草、番茄等 )的转基因产品已进入商品化生产阶段。本文就中国棉花基因工程方面的研究作一简要综述 ,主要包括抗虫性改良、抗除草剂性状改良、抗病性改良、抗逆性改良和品质性状改良等方面     

含NPTⅡ标记基因的转基因抗虫棉室内快速鉴定方法

通过试验研究,提出了3种室内快速筛选和鉴定含NPTⅡ标记基因的转基因抗虫棉的方法.一是待检测棉子去种皮,在含卡那霉素培养基培养,根据幼苗子叶颜色和棉苗状态来辨别是否是转基因材料,卡那霉素最适浓度为0.75 g·L-1;二是去皮种子培养在无卡那霉素的萌苗培养基上,在棉苗子叶上涂抹卡那霉素溶液进行鉴定,最适浓度为4.0 g·L-1;三是在待测棉苗子叶上打孔、滴加一定浓度的卡那霉素,根据打孔并滴加卡那霉素部位的叶片颜色变化,鉴别并统计转基因植株,其最适浓度为2.0 g·L-1.3种方法均可在卡那霉素处理后4～7 d内快速鉴定出转基因植株.同时,对转基因阳性植株进行PCR鉴定,结果表明3种卡那霉素方法鉴定的准确率均在90%以上.     

转基因抗虫棉纯度的幼苗鉴定方法研究

根据卡那霉素标记基因与Bt抗虫基因紧密连锁的关系．试验研究了利用卡那霉素溶液快速鉴定携带转Bt基因抗虫棉纯度的4种方法．其方法具有简便、快捷、有效的特点，可在转基因抗虫棉杂交后代选择和繁种保纯中应用，同时也为种子企业抗虫棉纯度检验提供了一种新方法。     

转基因技术在棉花育种上的应用

综述了转基因技术在棉花遗传改良中的应用,包括棉花抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆以及品质改良等方面的最新进展,并对棉花转基因研究中存在的主要问题和今后的研究与应用前景进行分析和展望.     

棉花种子耐盐碱能力快速筛选研究

土壤盐碱化抑制棉种萌发是影响新疆棉花生产的关键障碍因子之一。棉种耐盐碱能力无损分级筛选,是实现盐碱地高产高效植棉最经济、有效的措施。以新疆大面积推广的41份棉花品种为材料,对棉种形态指标、贮藏物质含水量与发芽率进行测定分析。41份棉花品种被划分为3类：第Ⅰ类为高耐盐碱品种新陆中82号和新陆中68号,第Ⅱ类为耐盐碱品种冀杂708、源棉11号、新陆中67号、新陆中55号、富全668,其余品种分为第Ⅲ类,为敏盐碱品种。利用聚类分析、主成分分析和逐步回归等方法综合评价陆地棉萌发期耐盐碱能力,可为将来陆地棉品种种子耐盐碱能力的鉴定提供技术标准。     

全球转基因棉花商业化进程

分析了全球转基因棉花商业化种植进程,结果显示:1996年美国、澳大利亚、墨西哥3国率先商业化种植转基因棉花以来,此后迅速发展,至2010年已有13个国家种植转基因棉花,种植面积达2100万hm2,占全球棉花总面积的64%;2011年转基因棉花的普及率更是高达82%,并首次超过大豆成为转基因品种普及率最高的作物,揭示了转基因棉花的普及已成为必然趋势。我国于1998年开始规模化种植转基因棉花,到2011年普及率仅71.5%。普及速度比任何一个种植转基因品种的主要植棉国都慢,而且我国的转基因棉花研究与美国也有很大的差距,抗除草剂的转基因棉花尚未面世,双抗(既抗虫又抗除草剂)和转其他基因的棉花可能需要更长的时间才能研发出来。     

抗除草剂草丁膦转基因玉米后代筛选方法的研究

Bar基因作为除草剂筛选标记基因具有高效、快速、简便等优点。为高效筛选转基因玉米阳性植株,加快转基因玉米纯合速度和回交转育速度,本试验以郑58自交系及其转基因后代种子为材料,优化了筛选抗草丁膦转基因玉米的方法。研究结果表明,当草丁膦浓度为30mg/L时,利用浇灌的方法可以高效地淘汰大量非转基因植株和Bar基因表达量低的株系或个体。此方法具有筛选效率高、不受环境因素影响等优点,目前已运用此方法,成功地对大量玉米转基因后代进行了筛选。     

利用卡那霉素间接鉴定法进行大规模的棉花转基因育种技术

:( 1 )将脱脂棉撕成小条沾取 0 .0 5%的卡那霉素溶液 ,粘附于棉花植株倒 2新生叶上。 5d后所有沾有卡那霉素溶液的感虫棉株的叶片均出现明显的黄色斑块 ,而转 Bt基因抗虫棉的叶片仍为正常绿色 ,无任何症状。 ( 2 )转 Bt基因抗虫棉种子接种于加有 1 0 0 0 mg· l- 1卡那霉素的 MS培养基中。四天后 ,抗虫棉子叶均表现为正常绿色 ,而常规品种子叶全为黄色 ,表明卡那霉素间接鉴定法是鉴定转 Bt基因抗虫棉的简便而又准确的方法     

卡那霉素对棉花下胚轴愈伤组织生长的影响

以三个具有不同特点的棉花新品系为试材的研究表明，卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显的抑制作用，随其浓度的增加，愈伤组织形成的频率降低，增殖的倍数减少；当浓度增加到１００ｍｇ·Ｌ－１时，愈伤组织严重褐化，其正常生长受到完全抑制；下胚轴形态学上端切段较下端切段更易受卡那霉素的影响     

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织生长发育的影响

卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的增殖、胚胎发生及发育均有一定的抑制作用,但不同浓度的卡那霉素对棉花胚性愈伤组织的生长发育作用程度不同,低浓度较弱,高浓度较强;胚性愈伤与体细胞胚生长发育的不同阶段对卡那霉素的敏感性有所不同。在棉花遗传转化过程中,卡那霉素浓度不能低于５０ｍｇ·Ｌ－１,胚性愈伤的继代培养时间应控制在３０ｄ左右。     

葡萄糖氧化酶基因转化棉花和抗性愈伤组织的获得

用葡萄糖氧化酶基因转化棉花 ,研究了影响转化和抗性愈伤组织获得的因素。结果表明 ,基因型和培养基构成是影响葡萄糖氧化酶基因转化棉花获得抗性愈伤组织的最关键因素 ,在本试验所采用的 8个基因型中 ,中棉所 1 3中 940 9(中棉所3 5)和中棉所 1 9较易诱导获得抗性愈伤组织 ,而珂字 2 0 1、中棉所 2 7等则较难 ;用于棉花遗传转化的感染时间以 7～ 1 0 min为宜 ,共培养时间以48h为宜 ;下胚轴比子叶易诱导获得抗性愈伤组织。在诱导愈伤组织的继代培养中 ,加入高浓度的卡那霉素是获得转化细胞的关键 ;用液体培养比用固体培养易筛选获得抗性转化愈伤组织     

生长前期转Bt基因棉对棉铃虫(Helicoverpa armigera Hübner)的抗性研究

生长前期转 Bt基因棉对低龄棉铃虫幼虫具较强的抗性 ,子叶期抗性最强 ,真叶后下降 ,随后逐渐上升 ,至 1 0叶期达顶点 ,之后又开始下降 ;沿江棉区一代棉铃虫幼虫发生期 ,正处于 Bt基因棉的生长前期 ,转 Bt基因棉对 1龄和 2龄幼虫在较短的时间内即表现出较强的抗虫效果 ,对 3龄和4龄幼虫抗虫效果明显下降 ,但连续取食后全部不能存活 ,对 5龄幼虫抗虫效果较差 ,连续取食后可部分化蛹但化蛹率明显低于对照。同时测定了降雨对生长前期转 Bt基因棉抗性表达的影响     

转Bt基因抗虫棉室内鉴定技术研究

转Bt基因抗虫棉在沙培试验中对卡那霉素不同浓度的反应进行了检测。结果表明,浓度为4000mg/L的卡那霉素液对非抗虫棉最为敏感,反应率为100%,而转Bt基因抗虫棉均无反应。说明棉花室内抗卡那霉素反应能够准确检测转Bt基因抗虫棉纯度,可以作为一种快速、准确、简便的室内检测转Bt基因抗虫棉的方法。同时,不同浓度的卡那霉素液对棉苗胚轴、鲜重均有一定的影响。     

转基因棉花早代材料细胞学变异研究

农杆菌介导转基因棉花早代 ( T0 )材料 ,花粉母细胞的染色体构型变异很大 ,只有部分二价体 ( 7～ 1 6个 ) ,多数是单价体 ,没有更高的价体。二价体位于赤道面 ,但多形成染色体桥。单价体多散布在两极。减数分裂后形成 1～ 8个分体的多分体 ,其中四分体虽然比例很高 ,多为畸形。染色体数目的减少、PMC染色体构型变异等 ,是这类材料高度败育的直接原因