马传贫弱毒继代细胞疫苗的研究——Ⅰ.马传贫弱毒对三株继代细胞的感染、增殖和免疫试验

将马传贫弱毒在LP、LL和LX继代细胞上培养传代,获得三株传代毒——LPV、LLV和LXV。传代毒对继代细胞能有规律地引起细胞病变;在电镜下,可见大量的典型马传贫病毒粒子以出芽方式成熟;经用补体结合(CF)反应、免疫扩散(ID)反应、免疫荧光(IF)抗体及ELISA等方法检测,传代毒随传代次数的增加,其对细胞的感染性也规律的增强;第5代和第10代传代毒对驴白细胞的TCID_(60)分别为5.5和6.5。将LPV、LLV和LXV传代毒接种健康马,临床观察293天,未见异常;接种后21天,感染马100％出现CF和ID抗体;攻击马传贫强毒后,分别保护4/4、3/4和2/4。     

鸡马立克氏病血清2型毒株Z_4的纯净性检验

将马立克病病毒(MDV)Z_4毒种感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)悬液(7×10~5PFU/ml)接种到支原体培养基中作盲传培养,连传3代,未见有支原体生长。经鸡胚接种试验,细胞培养试验和血清学试验证明,Z_4毒种没有受到所试12种外源病毒的污染。利用电镜技术检查Z_4感染的CEF超薄切片,除在细胞核中见到较多典型MDV病毒粒子外,在细胞核、细胞浆及细胞间隙均未发现有支原体和其它非目的病毒粒子。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒全基因核苷酸序列测定

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法,分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因,并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

马传贫云南强毒及其攻击弱毒苗接种马的形态学观察

本试验观察了4匹马传贫云南强毒接种马和13匹用云南强毒攻击的弱毒苗接种马的形态学改变。4匹强毒马均出现急性型马传贫病理变化,但免疫器官中免疫活性细胞的坏死程度远不及我国辽毒急性型传贫马那样严重。甚至较美同Wyoming株毒也差。13匹接种弱毒苗的攻毒马形态学有三种类型变化。第一类型具有铁逆转,组织球,淋巴样细胞反应和网内系增生等较典型的马传贫病理变化,免疫活性细胞少,且变性,坏死。第二种类型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化,增殖。但肝铁反应增强,脾铁反应明显增生。第三种类型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化,增殖。依此衡量,10~(-3)lml攻毒试验马中出现Ⅰ型变化的占4/7,显然弱毒苗保护效果不够理想。10~(-4)2ml攻毒马Ⅰ、Ⅱ型变化的占5/6,表明我国研制的弱毒苗对云南毒有预防作用,可用于云南马传贫防制工作。但其中Ⅱ型变化的占3/5,Ⅲ型变化在各弱毒接种马中仅占1/3,比辽毒和Wyoming株毒攻击的弱毒接种马出现Ⅲ型反应的比数均低,结果很不一致。显然云南分离到的马传贫强毒接种马的病理变化及再攻毒马形态学改变与辽寝和Wyoming株毒有差异。本试验对这种差异进行了讨论,认为云南马传贫毒可能是又一个毒株。     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

绵羊进行性肺炎病对山羊的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）感染山羊可生产琼扩抗体，用ＯＰＰ抗体阳性山羊的肺脏、肝脏分离物在绵羊胎肺细胞上连续培养传代。可出现以多核巨细胞为特征为细胞病变。用其培养物制备的琼扩抗原与抗ＯＰＰＶ标准阳性血清呈阳性反应，与抗马传贫病毒、牛白血病病毒标准阳性血清无交叉反应，电镜观察，病毒粒子大多散在细胞外及胞浆空胞中，以出芽方式增殖，病毒呈球多，直径８０～１２０ｎｍ，用ＯＰＰＶ感染山羊的肝脏分离培养物     

绵羊进行性肺炎病毒对山羊的感染试验

绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）感染山羊后可生产琼扩抗体．用ＯＰＰ抗体阳性山羊的肺脏、肝脏分离物在绵羊胎肺细胞上连续培养传代，可出现以多核巨细胞为特征的细胞病变．用其培养物制备的琼扩抗原与抗ＯＰＰＶ标准阳性血清呈阳性反应，与抗马传贫病毒、牛白血病病毒标准阳性血清无交叉反应．电镜观察。病毒粒子大多散在细胞外及胞浆空胞中，以出芽方式增殖，病毒呈球多，直径８０～１２０ｎｍ．用ＯＰＰＶ感染山羊的肝脏分离培养物复归山羊，２个月后４只山羊琼扩抗体全部阳转．     

贵州犬瘟热病毒的分离鉴定

对流行病学调查、临床症状检查和ELISA检测为犬瘟热阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法接种于犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离,并对分离株进行了形态学特征、血凝特性、动物感染及RT-PCR鉴定。结果表明:病料接种MDCK细胞产生明显的细胞病变(CPE),电镜负染观察接毒细胞培养物见有典型的犬瘟热病毒粒子。分离株不凝集鸡及人“O”型红细胞,接种犬出现明显的临床症状和病理变化。用RT-PCR技术检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长为760 bp,与预期设计的长度相同,由此确证分离株为犬瘟热病毒,命名为CDV-GZ2株。     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击３个月后迫杀，经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变；第Ｉ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性，坏死，第Ⅱ种类型无马传贫规律病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖，据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ｉ种类型形态学改变，３个月     

猪细小病毒S—1毒株的分离和鉴定(二)

S一1毒株在猪肾原代细胞第1～10代之间共进行36次传代,培养物的平均HA价>384,第6代以后对细胞的最小感染量稳定在10~(-6)～10~(-7)之间,第5代PK细胞传代毒在-25℃～-30℃保存180天毒价保持10~(-5)不变,死产胎猪组织(S—1毒株分离猪)在用同样温度保存300天能重复分离到病毒,S—1毒株PK传代毒能适应于胎猪睾丸细胞株(ST)增殖,毒价达1O~(-7),以比利时荧光抗体柒色ST细胞培养物和用比利时PPV阳性血清对ST细胞传代毒作HI测定,进一步证实分离物的特异性。用PK细胞传代毒感染HI抗体阴性怀孕头胎母猪能产生明显的抗体反应。3头感染母猪中,1头(用口服途径攻毒)在感染后2～4天间出现排毒现象;从另一头母猪(用肌肉注射途径攻毒)的胎儿中分离到病毒,证实经胎盘感染的发生。     

目前对马传贫的认识

马传贫已逐渐趋向于隐性感染。本文主要叙述马传贫病毒(EIAV)及其自然媒介传播、马传贫的发病机理、临床表现和马传贫传播的防制等内容。病毒由于EIAV在体外细胞培养上的增殖明显受限(马白细胞培养例外),所以难以在实验室开展EIAV工作。病毒增殖技术的困难迫使应用马匹进行马传贫琼脂扩散(AGID)试验抗元的生产和为了验证马传贫感染进行的马匹接种试验。近年来,通过在马成纤维细胞培养上的持续增     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒基因核苷酸序列测定

本项研究马传贫驴白细胞弱毒疫苗病毒感染后总ＤＮＡ和驴强毒感染驴中血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法,分段扩增马传贫弱毒疫苗病毒和驴毒各基因,并将各基因克隆后进行测序列,根据与国外马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

病毒粒子计数公式的推导及其在马传贫病毒收毒期试验中的应用

根据立体计量学原理，对病毒粒子在细胞内的计数公式进行了推导和计算，并且在马传贫病毒收毒期试验中做了应用。结果表明：该公式在理论上成立，实践中可行。使应用电镜技术对病毒的形态定性观察，步入定量分析，为揭示病毒粒子在细胞培养物中的消长规律提供了新的手段。     

猪伪狂犬病病毒（PRV-JL 株）的分离与鉴定

从吉林某猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中分离出1株病毒,感染猪以后病理变化明显,经幼仓鼠肾传代细胞系（BHK-21）接种、毒价测定、病毒形态观察、PCR扩增及相关动物试验证实为猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒,并命名为PRV-JL。经BHK-21接种,病毒生长良好;毒价稳定,可达10-7.59/0.2 mL;电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110-150 nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150-180 nm;PCR鉴定该毒株为强毒,其gE序列与Genbank登录的PRV gE序列同源性为99%-100%;本研究构建了小鼠的感染模型,并进行了病毒载量检测,结果用不同剂量病毒培养物接种Balb/C小鼠,小鼠死亡明显,最初在其脑组织中检测到PRV病原,随后在肾、肺、心逐步检出,试验初步证实了PRV的脑组织嗜性。试验表明, PRV-JL是1株强毒,对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定基础。     

病毒粒子计数公式的推导及其在马传贫病毒收毒期试验中的应用

根据立体计量学原理,对病毒粒子在细胞内的计数公式进行了推导和计算,并且在马传贫病毒收毒期试验中做了应用。结果表明:该公式在理论上成立,实践中可行。使应用电镜技术对病毒的形态定性观察,步入到定量分析,为揭示病毒粒子在细胞培养物中的消长规律提供了新的手段。     

牛白血病的研究——病毒分离、鉴定

我们用病牛的病料进行了牛白血病病毒的分离,对直接白细胞培养的第一代的培养物及单层细胞培养物第二代及第四代的培养物,作电子显微镜下的观察,均见到了C型病毒粒子,其形态与结构典型,与国外报道的牛白血病C型病毒粒子完全一致。 使用我们分离的牛白血病病毒试制的抗原,进行抗原测定,与美国、日本抗原的结果一致。 使用分离病毒的同一病料接种的绵羊,抗体检查14/16呈阳性反应,6/10的试验羊的白细胞培养物见到了C型病毒粒子,试验羊大部发病死亡,呈典型的牛白血病病变。 上述试验结果说明我们成功地分离到牛白血病病毒。     

马传贫病毒白细胞弱毒疫苗毒株反转录酶基因克隆及序列？…

本从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗病毒粒子并抽提病毒ＲＮＡ后,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶工一长１６６８ｂｐ,编码５５６个氨基酸。通过与已发表其它马传贫病毒反转录酶基因序列比较,发现在氨基酸和核苷酸水平差异率分别为１４．０％和１６．６％。变异氨基酸随机分布于整个基因上,无明显规律。在反转录病毒高度保守的酶基因上发现这样大的差异     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击，３个月后迫杀。经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变：第Ⅰ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性、坏死；第Ⅱ种类型无马传贫规律性病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖。据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ⅰ种类型形态学改变，３个月攻毒马８０％以上呈现Ⅱ、Ⅲ类型反应，与疫苗皮下注苗６个月再攻毒效果相仿，表明穴位注苗具有缩短免疫发生时间的效果。但穴位注射６个月攻毒的马出现Ⅰ型，变化例数较多（３３％），病理变化较明显，免疫反应有下降趋势，本文对这种异常现象进行了初步讨论。     

致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系（PK-15）分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达10^8.5 TCID50／mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110nm～150nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150nm～180nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7％～100％。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24h～72h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒的电子显微镜观察

本文描述了用电子显微镜观察感染了ILT病毒的鸡胚肾组织培养细胞核内的未成熟病毒粒子和胞浆中带囊膜的成熟病毒粒子的形态特征.文中还着重描述了在感染细胞的核内见到的一种与末成熟病毒粒子密切相关的微管结构.从这种结构的形态上看,它似乎与病毒粒子的生成有某种内在的关系.