ST悬浮细胞系的驯化与猪细小病毒的培养

将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少,胞体大小基本一致,生长速度正常,最大细胞密度可以达到每毫升4.5×10~6个细胞。说明经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的ST细胞株,为大规模工业化生产ST细胞提供技术支持。     

ST悬浮细胞系的驯化与猪细小病毒的培养

将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少,胞体大小基本一致,生长速度正常,最大细胞密度可以达到每毫升4.5×10~6个细胞。说明经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的ST细胞株,为大规模工业化生产ST细胞提供技术支持。     

MDCK单细胞悬浮生长的驯化筛选及其在AIV增殖上的初步应用

采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无血清营养条件并呈单细胞悬浮生长状态,细胞生长旺盛,平均比生长速率达到0.556 d-1,最大活细胞密度达到2.42×106cells·m L-1,并可检测出其细胞膜表面具有正常丰度的唾液酸-α-2,3-半乳糖糖链受体。在MOI为0.05,TPCK处理的胰蛋白酶作用浓度为1μg·m L-1的条件下,AIV-H9亚型病毒JS03株可在MDCK-Sus细胞中获得较好的增殖HA效价,达到8log2·25μL-1。     

BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究

[目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果]细胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ml,牛血清的最佳含量为5%,BHK21细胞培养液理想pH为7.0~7.2,采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论]为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。     

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织,通过继代培养,最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２,４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后,转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养,由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞,细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度,从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．     

玉米细胞悬浮系的建立与单细胞培养效果

以330、辽7352和丹340共3个玉米自交系的雄幼穗为外植体获取愈伤组织,建立悬浮细胞系,在改良MS、改良B5、改良1/2B5 培养基中进行细胞悬浮培养。试验中发现 ,基因型和培养基对细胞悬浮系有很大影响,其中供试材料330表现最好,圆形细胞率平均达16.5%,改良1/2B5 培养基有利于细胞悬浮培养,500mg·L-1的水解酪蛋白对悬浮细胞生长有促进作用。2,4 -D的浓度影响悬浮细胞的生长和细胞成活率,浓度为1.0～2.0mg·L-1时比较适宜。细胞悬浮培养5～7d继代1次。在悬浮培养1个月后 ,经400目镍网过滤筛选,获得单细胞。单细胞培养中,激素水平和培养方式影响单细胞的分裂率,其中2,4-D的浓度为0.5～1.0mg·L-1时比较适宜。浅层培养和看护培养有利于单细胞的生长。在单细胞培养过程中试验获得了愈伤组织。     

高产单细胞蛋白酵母的诱变育种及培养条件优化

从啤酒废酵母泥中分离纯化出5株酿酒酵母,以其中单细胞蛋白(SCP)含量较高的SY-5为出发菌株,通过紫外诱变分生孢子,经过初筛和复筛,得到1株高产SCP的诱变菌株SY-5-7,比出发菌株高7.84%,达到48.67%。通过单因素试验对诱变菌株SY-5-7培养条件进行优化,结果表明,最适培养条件为培养基起始pH值5.0、培养温度26℃、接种量2%、发酵周期为70h,碳源为50g/L蔗糖、氮源为10g/L酵母膏。在此基础上进行培养,SY-5-7的生物量比初始条件提高了约35%。     

山东丹参细胞悬浮培养体系及生长模型的建立

【目的】建立和了解山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长规律。【方法】以叶片为外植体研究疏松愈伤组织诱导增重以及细胞悬浮培养体系,并对疏松愈伤组织和悬浮细胞进行生长模型的拟合。【结果】疏松愈伤组织最佳诱导和增殖培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+酸水解酪蛋白1g/L,细胞悬浮培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.5mg/L+6-BA 3.0mg/L+NAA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+酸水解酪蛋白1g/L。【结论】山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线为"S"型,Richards方程模型能够很好地描述疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线变化。     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

草莓细胞悬浮培养条件优化及植株再生的研究

以不同基因型草莓花药为试材,建立草莓细胞悬浮系,研究结果表明:悬浮培养初期的褐化程度和褐化恢复的快慢可作为判别建成稳定悬浮细胞系的一个重要指标,并采用分步培养法获得了明旭的植株再生。     

药用植物青天葵的悬浮培养条件优化

以悬浮细胞干重增加率、酶活力为考察指标,研究不同培养基、光照条件、蔗糖浓度、培养基pH值对药用植物青天葵细胞生长的影响,对青天葵悬浮细胞培养方法进行条件优化。结果表明,1/4MS和1/2MS培养物外观形态最佳,1/2MS组培养物干重增加率最大,MDA含量最低,POD含量最高;暗培养条件有利于愈伤组织干重的增加;蔗糖浓度为1%时愈伤组织干重增加率显著高于其他处理组,pH6.0为青天葵悬浮培养的合适pH值,培养基中添加MES可明显提高干重增加率。     

铁皮石斛无菌悬浮培养育苗工艺开发

为降低铁皮石斛育苗成本,压缩生产周期,提高种苗市场竞争力,借助发酵罐液体悬浮培养各参数的实时可控特性,应用于铁皮石斛无菌育苗生产,并延伸开发与之配套的种源无菌处理、光照调控、液态播种入瓶等工艺,实现铁皮石斛种胚球茎阶段在悬浮培养状态下的快速高倍数扩增,提升种苗规格一致性,提高商品苗质量.同时通过中试规模生产实践验证,降...     

台湾金线莲细胞悬浮培养及其培养条件优化的研究

[目的]研究台湾金线莲细胞悬浮培养B5培养基的配方.[方法]以新鲜叶片为材料,经过初代培养、固体培养和继代培养,建立悬浮细胞培养体系,正交设计试验优化培养基配方.[结果]B5培养基中,影响悬浮培养因素的大小依次为大量元素浓度、6-BA、2,4-D、蔗糖、IAA.[结论]选用2％蔗糖、0.5 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA、0.6 mg/L 2,4-D、1/2浓度大量元素的B5培养基培养悬浮细胞,15 d后吸光度达4.425.     

水曲柳松散型愈伤组织诱导及悬浮培养体系的优化

以水曲柳组培苗的叶片和叶柄为研究材料诱导愈伤组织,通过生长量、接种量、pH值,培养基中碳、氮、磷等因素优化悬浮细胞培养体系。结果表明:以WPM为基本培养基,添加6 mg/L TDZ+5 mg/L 6-BA时,对水曲柳叶柄的愈伤组织诱导率最高,达到90.91%;在只添加6 mg/L TDZ时,叶片的愈伤组织诱导率最高为87.5%。在WPM+0.3 mg/L TDZ+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA的培养基中,可以诱导出松散型的愈伤组织,悬浮培养时细胞的生长周期为18 d。在3%的蔗糖浓度下,细胞增长量最高,一个生长周期内鲜质量增加了400%。氮磷浓度超过正常水平不利于细胞的生长。最终获得了能够长期继代培养水曲柳单细胞和小细胞团的悬浮培养体系。     

小麦单细胞培养的研究

在单细胞植株再生基础上建立起体细胞无性系变异体系。本文是在前文研究基础上，以２５个单细胞无性系为试验材料，进一步对无性系后代穗部产量构成性状进行分析。结果表明，穗部产量性状变异范围较广，有利的变异类型在第４代稳定遗传，并已繁殖到第８代。１９９４年和１９９５年优良稳定株系进行田间品种比较试验，初步筛选出有希望直接应用于生产的株系，表明单细胞培养诱导和筛选体细胞无性系变异是小麦品种产量性状改良的一种手     

红豆杉细胞悬浮培养系统激素优化的研究

采用均匀设计安排预试验以确定进一步优化研究的范围,在此基础上采用响应面一阶模型的设计方法,获得关于悬浮培养的红豆杉细胞生长与激素浓度之间的回归方程,表明ＮＡＡ、６－ＢＡ是影响细胞生长的关键因素,２,４－Ｄ、ＮＡＡ、６－ＢＡ以０．２３：１：０．６２比例在现有配方基础上递增有利于接近最优目标。     

接种量及蔗糖浓度对悬浮培养玫瑰茄细胞生长的影响

以悬浮培养玫瑰茄细胞为研究对象,探讨了不同初始接种量以及蔗糖浓度对玫瑰茄细胞生长的影响。结果表明随着接种量增大,细胞生长启动加快,但细胞比生长速率却逐渐降低,这表明细胞的分裂启动存在着密度依赖现象,而细胞的生长却存在密度抑制现象;在ρ（蔗糖）为２０～５－ｇ／Ｌ范围内,当ρ（蔗糖）为４０ｇ／Ｌ时,蔗糖是作为限制性基质而存在,而当ρ（蔗糖）超过４０ｇ／Ｌ时,蔗糖表现出基质抑制效应,这明显体现在玫瑰茄细     

Marc-145细胞微载体悬浮培养及PRRSV增殖工艺的建立

采用分批式培养方法研究了Marc-145细胞微载体悬浮培养及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖工艺。结果表明,在3 g/L的微载体用量下,采用1 ml 3×105个细胞的初始接种密度及培养至第3 d进行换液操作工艺可以获得最佳的Marc-145细胞生长效能。采用感染复数为0.05的接毒比例及接毒后48 h收获毒液可获得最高的PRRSV增殖效价。在5 L反应器中重复验证上述工艺,获得较为稳定的试验结果,最大细胞密度均可高于1 ml 2×106个细胞,PRRSV的增殖效价均高于108.0TCID50/ml。为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

蝴蝶兰组培苗定植后培养不同时间驯化对生长的影响

目的:探究蝴蝶兰组培苗定植后培养时间对种苗生长的影响。方法:将蝴蝶兰组培种苗由母瓶转接到子瓶后于驯化室中培养,检测不同温度下种苗的生长情况。结果:种苗在20d后大部分开始生根,所以20-30d开始进入温室驯化是蝴蝶兰种苗驯化的最佳时间。结论:由于培养室内温度恒定且较高,所以蝴蝶兰的生长较温室内较为快速,30天以内开始温室驯化都是是比较理想的。