不同温湿度条件下绿僵菌LA菌株对东亚飞蝗的致病力

本文于室内研究了不同温湿度条件下,绿僵菌Metarhizium anisopliae对东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis致病力的影响。结果表明：在30℃、3种不同相对湿度（RH30%、60%和90%）条件下,3龄、4龄和5龄蝗蝻均在RH90%时,死亡率最高,LT50最短;其次为RH60%和RH30%。在不同温度条件下,30℃时绿僵菌对5龄蝗蝻的致死率最高,LT50最短（3.366d）;其次为33℃和27℃;36℃条件下,蝗蝻的死亡率最低,LT50最长（6.424d）。     

感染星天牛幼虫高致病力金龟子绿僵菌菌株的筛选

室内测定了6株金龟子绿僵菌菌株的菌落生长速率、产孢量及其对星天牛幼虫的致病力。结果表明：不同菌株生长速率和产孢量存在显著差异,在PPDA培养基上,菌株MaYTTR04和MaZPTR01的菌落生长较快,培养15 d后,菌落直径分别为6.3 cm和5.9 cm;产孢量以菌株MaYTTR04最大,MaZPTR01其次,分别为2.0×10^8孢子·cm^-2和1.1×10^8孢子·cm^-2,显著高于其他菌株。生物测定结果表明,不同绿僵菌菌株对星天牛幼虫的致病力差异显著,接种20 d后,星天牛幼虫累积死亡率在40%～96.7%之间;菌株MaZPTR01和MaYTTR04对星天牛幼虫致死率分别达到96.7%和93.3%;僵虫率也高,分别达到86.7%和80%;致死中时（LT50）短,分别为5.71 d和5.80 d。研究结果表明,菌株MaZPTR01和MaYTTR04对星天牛幼虫致病力较强,同时具备良好的生产性能,故可作为优良菌株用于星天牛的防治。     

绿僵菌菌株对蔗根土天牛幼虫的毒力

近年来,蔗根土天牛Dorysthenes granulosus在广西蔗区暴发成灾,采用绿僵菌Metarhizium防治该害虫是一种安全有效的生物防治方法。本文采用三级筛选法对不同来源的18株绿僵菌进行筛选,拟获得对蔗根土天牛幼虫具有高致病力且抗逆性强的菌株。结果表明:菌株JC001J、C002和TR010均表现出较好的毒力。其中菌株JC002毒力更强,高剂量(1.0×107孢子/ml)处理15d的累计死亡率达94.74%;低剂量(1.0×104孢子/ml)处理15d的累计死亡率为64.29%,LT50为11.0557d;温度为22~31℃时,菌株JC002生长速率和产孢量均显著高于其他2株菌。菌株JC002在防治蔗根土天牛上具有较大应用潜力。     

绿僵菌对暗黑金龟蛴螬的室内致病力测定

从黄褐金龟虫尸分离的绿僵菌菌株（ＲＡＷ８），经室内试验，结果对暗黑金龟幼龄蛴螬致病力强，在每克含孢量２０×１０６～２．５×１０６的土中饲养，致病率均达１００％，孢子浓度降低，致病时间延长，死亡率也减少     

不同菌株绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾幼虫致病力及林间防治试验

刚竹毒蛾(Pantana phyllostachysae Chao)是福建省毛竹林的一种主要害虫,本研究应用5种金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株和1种白僵菌(Beauveria bassiana)菌株,对3龄初幼虫进行感染力测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株。结果表明:应用1.45×10 7孢子/mL孢悬液感染12 d后,3龄初幼虫的校正死亡率均达到63.16%以上;其中MaFzzL-01和Ma1291-2两个绿僵菌株对该幼虫的致病力分别为90.93%和84.21%,其LT50值分别为5.97 d和6.67 d,LC50值分别为1.727×10 4孢子/mL和2.029×10 4孢子/mL。结果说明:绿僵菌MaFzzL-01和Ma1291-2两个菌株对该幼虫的致病力强,且致死速度快。应用1.45×10 8孢子/mL孢悬液进行林间防治可以取得良好效果。     

莱氏绿僵菌Mr006鉴定及对草地贪夜蛾致病力

收集草地贪夜蛾致病性莱氏绿僵菌,丰富昆虫病原真菌资源,为草地贪夜蛾绿色防控生防制剂开发提供依据。采用形态学和ITS-r DNA序列分析相结合的方法对菌株Mr006进行了鉴定,以浸渍法生物测定了该菌株对草地贪夜蛾幼虫和蛹的致病力,并进行了田间应用效果评价。结果表明,分离的Mr006菌株鉴定为莱氏绿僵菌;该菌株对草地贪夜蛾幼虫、蛹均有致病力,用孢子浓度为1×10⁷孢子/mL接种后,1～5龄幼虫的校正死亡率分别为91.16%、88.38%、70.71%、53.03%和22.73%,蛹的校正死亡率为76.26%;对草地贪夜蛾1～5龄幼虫和蛹的LC₅₀分别为3.55×10⁴、8.23×10⁴、3.63×10⁶、4.16×10⁷、4.23×10⁸和2.57×10⁵孢子/mL;用孢子浓度为1×10⁸孢子/mL接种后,1～5龄幼虫和蛹的LT₅₀值分别缩短至3.47、3.94、4.90、...     

新疆白星花金龟绿僵菌分离鉴定及致病力测定

从新疆吐鲁番地区和乌鲁木齐市安宁渠镇白星花金龟幼虫体中分离得到的2个新疆本土绿僵菌菌株TLF和ANQ。通过形态学初步鉴定菌株ANQ和TLF为金龟子绿僵菌。利用ITS1/ITS4和ITS4/ITS86引物分别测定了菌株TLF和ANQ的rDNA-ITS序列,2个菌株与金龟子绿僵菌相似性达99.1%~99.6%。室内毒力测定结果显示,菌株TLF和ANQ对白星花金龟各龄幼虫均具有高的致病力,死亡率分别达到90%~100%和73.3%~100%。2个菌株对白星花金龟1龄和2龄幼虫的致病力显著高于3龄幼虫,表现出随着白星花金龟幼虫龄期的增大致病力均呈降低的趋势。在相同处理时间内菌株TLF较ANQ致病力强。     

绿僵菌的生物学特征及其致病机理研究进展

综述了绿僵菌的生物学特性及其在昆虫表皮上的附着、入侵并在体内发生一系列生理生化反应的研究情况。     

绿僵菌对云南松切梢小蠹的致病性

利用3个绿僵菌菌株2060-d、X-m、2014分生孢子分别制成液剂、油剂和粉剂通过室内和林间试验,3个绿僵菌菌株对云南松切梢小蠹成虫都具有较高的致病力。室内校正死亡率77.1%~97.9%,死虫僵虫率达100%;用2060-d菌株分生孢子制成不同的剂型在林间防治切梢小蠹成虫,试验结果,成虫死亡率依次为油剂(73.3%)>液剂(70.0%)>粉剂(20.0%),死虫僵虫率分别为67.0%、65.0%和20.0%。上述结果表明,绿僵菌对云南松切梢小蠹有一定的致病力,可以将绿僵菌分生孢子制成油剂进行低量喷雾防治。     

不同温度下绿僵菌对东亚飞蝗3龄蝗蝻的致病力影响

采用体表接菌法测定了商品生物农药金龟子绿僵菌油悬浮剂PD20080671在15、20、25、30、35和40℃等6个不同温度条件下对东亚飞蝗3龄蝗蝻的致病力的影响。结果表明：东亚飞蝗3龄蝗蝻的累积死亡率在接菌后19 d内均随天数的增加而升高。35℃的累积死亡率最高（82.50%）,显著高于其他处理;40℃的累积死亡率最低,为55.00%。死亡个体的湿度培养结果显示绿僵菌在高温条件下萌发的时间较短,40℃为4.26 d,15℃为19.36 d。结果表明环境温度低于15℃或高于35℃都不利于绿僵菌杀死蝗虫。因此,在田间施用金龟子绿僵菌防治东亚飞蝗时应尽量避免高温天气,建议在上午低温时进行防治。     

光肩星天牛幼虫感染绿僵菌后血淋巴中游离氨基酸含量的变化

采用高效液相色谱法测定了感染绿僵菌Metarhizium anisopliae后光肩星天牛Anoplophora glabripennis幼虫血淋巴中游离氨基酸的含量。结果表明,光肩星天牛幼虫血淋巴中共检测出 17种游离氨基酸,感染绿僵菌后不同时段,游离氨基酸总量呈现先下降后上升的变化趋势。感染24 ~72 h时,幼虫血淋巴中游离氨基酸总量与对照组相比均呈小幅下降趋势,各时间点氨基酸总量互有高低,但相差不大;感染72 h后至120 h时,游离氨基酸总量明显下降,120 h时降到最低值1 042.33 mg/100 mL;之后急剧上升,144和168 h时分别为120 h时的1.44和1.51倍。赖氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、组氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、蛋氨酸含量的变化与游离氨基酸总量的变化趋势大体一致;而脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸的含量呈波动变化。     

分离自红棕象甲虫尸上的绿僵菌菌株鉴定及其对红脉穗螟的致病力

红脉穗螟是海南省椰子、槟榔等作物的重要害虫,已引起了严重为害,造成了一定的经济损失.自死亡的红棕象甲虫分离得到一株绿僵菌菌株Red-3,通过形态特征和分子生物学方法对其进行了鉴定,并测试了其对红脉穗螟的致病力.通过DNA提取、ITS序列扩增得到的片段长度为555 bp,经比对后发现该菌株与绿僵菌相似度达99％.实验室测...     

绿僵菌研究的新进展

绿僵菌研究的新进展高松（中国农科院生物防治研究所，北京１０００８１）ＣＵＲＲＥＮＴＳＴＡＴＵＳＯＦＳＴＵＤＩＥＳＯＮＭＥＴＡＲＨＩＺＩＵＭＳＰＰ．ＧＡＯＳｏｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏ...     

一株平沙绿僵菌的鉴定及生防应用潜力评价

利用大蜡螟诱集法,从黑龙江地区不同类型土样中筛选分离到一株虫生真菌FZZ菌株,经形态学及18SrDNA ITS序列分析鉴定为平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense(KY419576)。通过对平沙绿僵菌FZZ菌株的生物学特性、其对小菜蛾Plutella xylostella 2龄幼虫的致病性及对7种植物病原菌的抑菌活性的研究结果表明,FZZ菌株菌丝生长的最适温度为25℃,产孢的最适温度范围为20~25℃,30℃孢子萌发率最高,但48h也仅为48%。浓度为1.0×109个/mL的孢子悬浮液处理小菜蛾2龄幼虫,5d后校正累计侵染率为78.33%。FZZ菌株对7株植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,对水稻稻瘟病菌Magnaporthe oryzae菌丝抑制率最高,达45.45%,对大豆根腐病菌Fusarium oxysporum的抑制率最低,为36.31%。FZZ菌株发酵滤液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea有较强抑菌活性,抑菌带宽直径达2.93cm,对其余6种病原菌未表现出抑制效果。此结果对筛选高效平沙绿僵菌及扩大其生防范围具有重要意义。     

金龟子绿僵菌KMa0107菌株对三种玛绢金龟幼虫的致病力

室内测定了金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株KMa0107对玛绢金龟属3种金龟子幼虫的致病力。结果表明,KMa0107菌株对玛绢金龟Maladerasp.、阔胫玛绢金龟M.verticalis和小阔胫玛绢金龟M.ovatula幼虫均具有较强的毒力。接种后,玛绢金龟、阔胫玛绢金龟、小阔胫玛绢金龟3种幼虫的毒力方程分别为Y=0.39X＋2.93（R2=0.97）、Y=0.41X＋2.33（R2=0.85）和Y=0.46X＋2.56（R2=0.97）。接种后3-9d,KMa0107菌株对玛绢金龟、阔胫玛绢金龟、小阔胫玛绢金龟幼虫的致死剂量对数值分别为9.09±0.3~5.26±0.18、9.04±0.29~4.67±0.21和7.35±0.18~4.7±0.17。在菌株KMa0107孢子悬浮液1.65×108~1.65×105孢子/ml浓度下,玛绢金龟、阔胫玛绢金龟和小阔胫码绢金龟幼虫LT50的估计值范围为3.4-6.2d、3.3-5.6d和2.7-4.7d。3种玛绢金龟幼虫接种绿僵菌孢子悬浮液后,随着病原菌的侵染,虫体血淋巴中蛋白质含量也随之发生变化。接种后4d,3种玛绢金龟幼虫血淋巴中蛋白质含量均明显下降。接种后2-6d,3种金龟幼虫血淋巴蛋白质含量减退率间差异显著,其中小阔胫玛绢金龟和阔胫玛绢金龟血淋巴蛋白质含量减退率明显高于玛绢金龟。     

绿僵菌侵染对黏虫免疫反应的影响

为揭示黏虫被病原菌侵染后的免疫应答机制,本试验分析比较了黏虫幼虫被金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae侵染后不同时间其血淋巴蛋白含量、免疫关键酶系(酚氧化酶PO,溶菌酶)活性、抗菌活力以及血细胞数量等免疫相关指标的变化。结果表明:受绿僵菌侵染后,黏虫6龄幼虫血淋巴蛋白含量在侵染初期(6 h和24 h)显著高于对照,侵染48、72和96 h后幼虫血淋巴蛋白质含量显著低于对照。且侵染后幼虫血淋巴PO活性也呈现先升高后降低的趋势,侵染初期(6 h和24 h)显著高于对照,侵染后期除72 h外与对照组无显著差异。侵染初期(24 h)溶菌酶活性也显著升高,随后出现下降,并于48 h显著低于对照,但在化蛹时(96 h)再次上升。绿僵菌侵染后期,黏虫的抗菌活性下降,于侵染后72 h抗菌活性显著低于对照,而侵染初期抗菌活性与对照无显著差异。另外,绿僵菌侵染对幼虫血细胞数量以及浆血胞比率也有显著的影响,表现为:侵染后6 h和24 h血细胞总数、浆血胞比率均显著高于对照,随后与对照并无显著差异。综上,绿僵菌侵染黏虫幼虫初期会显著诱导其免疫反应的启动,体现在主要免疫指标升高,而后随着免疫系统的破坏与能量的消耗,其免疫反应能力降低,生理活动受到干扰。     

虫尸表面罗伯茨绿僵菌产孢、致病力及其相关基因的表达特征

为明确绿僵菌在其致死害虫表面生长发育和致病力等相关分子机制,通过显微观察大蜡螟Galleria mellonella虫尸表面罗伯茨绿僵菌Metarhizium robertsii生长和产孢特性,并测定其致病力,分别对虫尸表面和PDA培养基上罗伯茨绿僵菌的菌丝生长阶段和大量产孢阶段进行高通量测序,对虫尸表面罗伯茨绿僵菌产孢及致病力通路相关基因进行系统分析,并采用荧光定量PCR技术对高通量测序结果进行验证。结果表明,PDA培养基上培养5 d后,罗伯茨绿僵菌开始大量产孢,培养14 d时产孢量最高,为4.6×10~7个/cm~2,大蜡螟幼虫注射罗伯茨绿僵菌4 d后,其体表出现菌丝,5.5 d后虫尸表面罗伯茨绿僵菌大量产孢,9 d后产孢量最高,为2.6×10~8个/cm~2。与PDA培养基上罗伯茨绿僵菌对大蜡螟幼虫的半致死时间(7.09 d和4.66 d)相比,体壁侵染法和显微注射法侵染的虫尸表面罗伯茨绿僵菌对大蜡螟幼虫的半致死时间(6.33 d和4.49 d)分别显著缩短和无显著变化。高通量测序结果显示,在菌丝生长阶段和大量产孢时期,虫尸表面罗伯茨绿僵菌中共有810个基因上调表达,452个基因...     

温湿度及土壤类型对土壤中绿僵菌孢子萌发的影响

平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense是一种潜力巨大的生防真菌,绿僵菌能否在土壤环境下快速定殖是有效控制地下害虫的重要条件,而孢子萌发是定殖的第一步。本文研究了土壤温、湿度及竹林土、河滩土和农田土等3种土壤类型对绿僵菌孢子萌发的影响,并利用土壤平板法观察了孢子在土壤中的生活周期。结果表明,土壤温度和湿度对孢子萌发影响显著,土壤类型对孢子萌发影响较小。在供试3个土样中,在最适温、湿度条件下,孢子萌发率均可达到80.0%以上。土壤类型不同,适宜孢子萌发所需的温、湿度不同,竹林土最适温度为25℃,随湿度增加孢子萌发率增加,湿度24%时孢子萌发率最高为80.8%;农田土最适温度为25℃,随湿度增加孢子萌发率降低,湿度6%时孢子萌发率最高为86.5%;河滩土最适温度为30℃,随湿度增加孢子萌发率降低,湿度6%时孢子萌发率最高为80.0%。土壤类型与土壤温、湿度的互作对孢子萌发有显著影响,绿僵菌孢子在25℃、土壤湿度12%条件下,12 h开始萌发产生芽管,24~96 h为营养生长期,120~144 h为生殖生长期,之后开始产孢,168 h即可观察到链状分生孢子。     

油类和糖类对绿僵菌孢子萌发的影响

在２３－２４℃及保湿条件下培养２４小时，绿僵菌分生孢子在７种植物油油滴上的萌发率在９６％以上。在４种矿物油中，石蜡油、煤油、柴油萌发率达８６％－９９％，但在润滑油中不能发芽。对１５种碳源上观察结果，赤癣糖、麦芽糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖有促进孢子萌发的作用。