鸡小肠上皮细胞的分离培养与鉴定

选择组织块法分离培养鸡小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC),采用机械刮除法和相差消化－相差贴壁法纯化细胞,0.05%的Trypsin-EDTA对获得的IEC进行消化传代,免疫细胞化学法鉴定IEC。结果表明,组织块培养法可分离出活性较强的IEC,并获得纯化的上皮细胞;形态学和免疫细胞化学法检测显示获得的细胞表面抗原呈阳性,鉴定为IEC;纯化的IEC可在体外稳定传代。     

鸡小肠上皮细胞分离培养及NLRP3在该细胞中的表达

为了探明NLRP3在鸡小肠上皮细胞中表达情况,为鸡的NLRP3基因在小肠细胞中的功能研究奠定基础。采用18胚龄的鸡胚,分离培养鸡的小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC);采用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)和反转录PCR(RT-PCR)方法,检测NLRP3基因在鸡小肠上皮细胞中的表达。结果表明:分离培养出活性较强的IEC;ICC检测显示获得的小肠上皮细胞表面NLRP3抗原阳性,RT-PCR法可扩增出520 bp的目的片段。表明成功分离培养出鸡小肠上皮细胞,并证明鸡NLRP3在鸡小肠上皮细胞中表达。     

鸡小肠上皮细胞的分离及体外培养研究进展

小肠是食物消化吸收的主要场所,而小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)在营养物质的消化吸收及转运、消化酶分泌及肠道免疫方面发挥着重要作用。利用体外培养方法分离培养IEC为研究其分化增殖、凋亡等生物学功能提供了重要手段。作者综述了培养组织样的选择、分离IEC的常用方法、影响IEC培养的因素及IEC的鉴定方法等鸡IEC体外分离培养过程中的相关研究进展。     

鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定

为研究鸡E.tenella的宿主细胞--盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量,筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法,并进行了纯化和培养,对培养细胞进行了鉴定.结果表明:嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法;分离纯化的细胞接种后分别于第3-5天、第10-11天进入对数生长期,可存活14 d以上;经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞,所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%.用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞.     

肠上皮细胞体外培养技术的研究进展

肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)在一定条件下可进行体外分离和培养。体外细胞培养为研究肠上皮细胞增殖、分化和凋亡提供了简单、快速和准确的手段,广泛用于药物和营养素吸收机制的研究。近年来IEC体外培养研究概况,探讨IEC培养中应注意的问题,并对IEC培养的发展方向做出展望。     

鸡原代输卵管上皮细胞体外分离培养与鉴定

为了探讨鸡原代输卵管上皮细胞分离培养方法,本研究分别对消化酶、消化时间、取材部位和表面包被物等条件进行比较和优化,筛选出鸡原代输卵管上皮细胞分离和纯化的最佳方法,并对培养细胞进行鉴定与传代。结果显示,取鸡输卵管漏斗部,0.25%胰酶+0.02%EDTA联合消化15min、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,在20%FBS包被的细胞培养瓶中可获得满意的输卵管上皮细胞分离效果,细胞贴壁性良好。培养的细胞在24h时成团贴壁,48~60h明显增殖,呈圆形或多角形"铺路石样"的单层细胞生长,72h后细胞增殖速度减慢,可以维持至10d以上,且传代后细胞贴壁生长良好,经姬姆萨染色和透射电镜观察鉴定为鸡输卵管上皮细胞。本研究建立的鸡原代输卵管上皮细胞分离培养方法可获得纯度较高的目的细胞,为研究鸭源鸡杆菌对鸡输卵管细胞的侵袭特性提供了良好的体外研究模型。     

鸡胚小肠上皮细胞体外培养与纯化

为了优化鸡胚小肠上皮细胞体外培养、纯化方法,本研究利用胶原酶对鸡胚小肠进行体外消化处理,利用酶消化法和细胞反复贴壁法对所培养细胞进行纯化,并绘制了纯化细胞的生长曲线.结果显示:利用1 mg/mL V型胶原酶对16胚龄的鸡胚小肠上皮组织进行体外消化,将获得的分离细胞培养在DM EM(Dulbecco's modified...     

组织块法培养鸡胚肠黏膜上皮细胞

本试验采用组织块方法原代培养鸡胚肠黏膜上皮细胞，倒置显微镜下细胞呈圆形，透明状，成功培养原代鸡胚肠黏膜上皮细胞。试验表明，组织块法可用于鸡胚肠黏膜上皮细胞的原代培养，具有简便易行、培养周期短、纯度高等优点，是肠道疾病良好的体外研究模型。     

几种酶分离山羊小肠上皮细胞方法的比较

用不同酶消化分离山羊小肠上皮细胞,从而找到最佳的分离方法,为进一步研究IEC提供合适的细胞模型.本研究分别用胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶、胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ消化分离刚出生未进奶的山羊小肠上皮细胞,通过观察IEC生长状态、形态特征、抗原鉴定比较哪种分离效果最佳.结果表明,联合用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ 1h可分离出大量健全绒毛隐窝单位,进一步培养获得的小肠粘膜上皮(IEC),上皮细胞膜抗原均呈阳性,用胶原酶Ⅰ和嗜热菌蛋白酶分离得到的大部分是成纤维细胞.选用用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ作为分离IEC的消化酶,可获得较纯的IEC.     

肠上皮细胞营养调控研究进展

<正>小肠是动物的主要消化吸收器官,其通过小肠粘膜上皮细胞吸收营养物质。作为体内更新最快的一类细胞,肠上皮细胞(IEC)是肠道内外环境的媒介,又是机体免疫屏障的重要组成部分,具有消化、吸收、分泌等生物学功能。目前,体外分离培养IEC对于研究肠道生物学功能、营养物质吸收机制及其调控具有重要