雏鸭人工接种鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY后组织结构动态变化的比较研究

对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究.结果显示:雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常.接毒12 h脾脏白髓、法氏囊滤泡中淋巴细胞减少,72 h脾、24 h法氏囊中淋巴细胞有所增多.心脏、肺、脑组织在接毒各期皆有轻度的充血、出血.鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY与标准毒导致的多组织变性、坏死相比,其变性轻而可逆;与疫苗HY所致的组织变化相似,但结构恢复时间早.结果表明:鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭,虽可造成雏鸭肝、肾等实质器官轻微的组织病变,但损伤的组织结构可在短期内修复,并恢复至正常;脾脏、法氏囊中的淋巴细胞在接毒后,也由减少到增多.本研究为鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY用作鸭肝炎疫苗株的安全性从病理组织学角度提供了依据.     

雏鸭接种Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY后血清生化指标的动态变化

用Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株人工接种4日龄雏鸭,于接种后第6、12、24、48、72、96、144、168、192h及14d采集接种鸭的血液,分离血清,进行生化指标测定,并与同期接种的弱毒疫苗HY、标准毒及对照组的血清生化指标进行比对。与对照组比较：MY组和HY组的白蛋白在接种后24h明显降低,48h差异极显著;血清谷丙转氨酶于24h、144h时段明显升高,且MY组持续至192h。标毒组则表现为接毒后,血清葡萄糖于24～96h降低,甘油三酯于72h、192h显著升高;血清总蛋白72h、96h、144h,白蛋白24—144h,球蛋白72～96h,144h明显降低;谷丙转氨酶于24～192h,血清谷草转氨酶在24～72h显著升高;尿酸72h呈一过性升高。结果表明,感染Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株与弱毒疫苗HY的血清生化变化规律相似。     

鸭甲肝病毒鸡胚化弱毒MY株Vp1重组蛋白的免疫保护效果试验

将鸭甲肝病毒鸡胚化弱毒MY株Vp1基因原核表达工程菌(pET32a+Vp1,BL21(DE3)PlysS)对基因Yp1进行大量表达和纯化,得到鸭甲肝弱毒MY株Vp1重组蛋白作为抗原制备亚单位疫苗,免疫雏鸭,用间接ELISA检测方法对免疫后抗体生成水平进行监测,并通过动物攻毒试验评价免疫保护效果.结果显示:Vp1重组蛋白免疫家兔后血清检测琼扩效价≥1∶64,细胞中和试验效价为1/45;雏鸭免疫后抗体生成水平呈明显上升趋势,对攻毒起到了保护作用.首次揭示了DHAV-1结构蛋白Vp1刺激机体产生抗体使雏鸭获得保护的能力.     

新型鸭肝炎病毒感染雏鸭血液生化指标的动态变化

用新型鸭肝炎病毒人工感染9日龄健康樱桃谷雏鸭。对感染雏鸭的临床症状、病理变化进行观察。并测定了感染雏鸭在接种后12、24、48、96、168h和14d时血糖、谷草转氨酶、谷丙转氨酶等13项血液生化指标。结果表明：血清葡萄糖含量（Glu）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）均降低。仅总蛋白在接毒后24h有一过性升高；血清谷草转氨酶（AST／GOT）、谷丙转氨酶（ALT／GPT）的活性升高；胆碱酯酶（CHE）仅在接毒后12h明显升高。碱性磷酸酶（ALP）在接毒后12、24和96h表现出明显变化，其中接毒后12h和96h呈降低状态。接毒后24h升高。血清尿酸（UA）的浓度在接毒后168h降至最低值。以后便恢复正常。血清肌酐（CRE）的含量在接毒后12h降低。随后在24h升高。其他时间无变化。血清钙（Ca）、磷（P）变化无明显规律。血清α-淀粉酶（α-Amylase）活性在整个试验期间无明显变化。说明新型鸭肝炎病毒感染雏鸭血清葡萄糖、总蛋白、白蛋白含量和谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性的变化规律与患1型鸭肝炎雏鸭的变化规律相一致。     

雏鸭人工感染鸭肝炎病毒后血液生化指标的测定

用Ⅰ型鸭肝炎病毒人工感染3日龄健康金定鸭,对接种后48 h后血清中血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等9项血液生化指标进行测定。结果显示,谷丙转氨酶含量较对照组极显著升高(P＜0.01);尿素氮含量显著升高(P＜0.05);葡萄糖、IgG含量与对照组相比有一定量的下降,但差异不显著(P＞0.05);谷草转氨酶、甘油三酯、尿酸、IgA和IgM含量在发病时略微升高(P＞0.05)。上述结果提示,雏鸭感染鸭病毒性肝炎后,肝脏和肾脏受到不同程度的损伤。     

NO、TNF和IL-2与新型鸭肝炎病毒感染雏鸭肝脑组织损伤的关系

用新型鸭肝炎病毒人工感染9日龄健康樱桃谷雏鸭，对感染后12、24、48、96、168h和14d雏鸭血液、肝和脑组织中一氧化氮（NO）含量，血液中肿瘤坏死因子（TNF）和白细胞介素2（IL-2）含量进行了测定，同时对感染雏鸭的组织病理学变化进行了观察。结果表明．血清中NO含量在接种后48h开始升高，一直持续到接种后96h，接种后7d恢复正常；肝脏组织中NO含量仅在接种后24h与对照组比较显著升高，在其他时间未表现有差异；脑组织中NO含量在整个试验期间没有变化。血清中的TNF和IL-2含量在接种后24h均表现升高，接种后96h降低，其他时间无改变。感染雏鸭的肝组织在接种后24h表现出血性坏死性肝炎变化，接种后48～96h呈增生性病变，而接种后各时期脑组织均呈非化脓性脑炎变化。由此表明，新型鸭肝炎病毒感染可导致雏鸭体内NO、TNF和IL-2发生变化，并且与肝组织损伤、疾病的发生发展有关。     

雏鸭胰脏组织损伤在新型鸭肝炎病毒感染过程中的变化特点

对新型鸭肝炎病毒人工感染9日龄樱桃谷雏鸭的胰脏损伤特点进行了研究。对感染雏鸭在接毒后12、24、48、72、96、168h以及14d时胰脏病理组织学变化的观察结果表明：感染雏鸭的胰脏组织在接毒后24h出现胰腺细胞的局灶性坏死及嗜酸性小体，且在接毒后48h分布广泛而严重；接毒后72～168h期间，胰脏组织中出现炎性细胞浸润并且逐渐增多，而胰腺的局灶性坏死及嗜酸性小体逐渐减少；接毒后14d，仅见到组织炎性细胞的浸润。应用透射电镜对接毒后48h胰脏的超微结构观察结果显示，胰腺细胞发生坏死．同时出现凋亡细胞的形态特征。本试验结果表明，在新型鸭肝炎病毒感染雏鸭时，胰脏的局灶性坏死是典型病理变化之一，胰腺细胞在发生坏死的同时，可能也发生凋亡，二者同时出现在同一胰脏组织内。     

鸭肠炎病毒强毒参考株在感染鸭体内的动态分布研究

为了研究鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）强毒株在感染鸭体内的动态分布规律,根据DEV的gD基因序列设计检测引物RT-gDF和RT-gDR,建立了特异性强、敏感性高、重复性好的检测DEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用已建立的方法,对DEV强毒参考株感染鸭的组织脏器进行了定量检测。结果显示,接种后6 h即可在所有受检组织中检测到DEV DNA,随着病程发展,DNA拷贝数持续升高,直至接种5 d后感染鸭全部死亡。其中结肠病毒DNA拷贝数为最高,达到1013.26 copies,法氏囊、肝脏和盲肠次之,约1012 copies。本研究证实了DEV强毒对感染鸭的免疫器官、神经组织和消化系统均具有广泛的嗜性。     

雏鸭感染鸭肝炎病毒后血液中一氧化氮和一氧化氮合酶的变化

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭，测定雏鸭血浆一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的含量，研究NO在鸭病毒性肝炎发病过程中的作用。结果表明：雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后第1天血浆一氧化氮和一氧化氮合酶含量就开始上升，第3天显著或极显著高于对照组，并持续至实验结束。揭示一氧化氮同雏鸭病毒性肝炎的发生发展过程有关。     

雏鸭感染鸭肝炎病毒后血液中GSH—Px活性的变化

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭,测定雏鸭血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明,雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后,血浆中GSH-Px的活性下降,其中弱毒株组在感染后5d的GSH-Px活性(53.44±2.30)显著低于对照组(60.70±2.00)(P<0.05)。     

DHV对雏鸭肝组织中SOD和GSH-Px活性的影响

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭 ,分别于 1、3、5、7天测定雏鸭肝组织中超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH_Px)的活性 ,研究SOD和GSH_Px在鸭病毒性肝炎 (DVH)发病过程中的作用。结果表明 ,雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后 1天 ,肝组织匀浆中的SOD和GSH_Px活性均下隆 ;3天时弱毒株组 ( 1 78.1 9± 1 7.5 9) ,和中毒株组 ( 1 65 .73± 1 7.2 1 )肝组织中SOD活性都显著低于对照组 ( 1 98.0 2± 8.64) ,强毒株组 ( 1 5 5 .1 1± 1 4.3 4)则极显著低于对照组 ;5天时实验组肝组织中SOD和GSH_Px活性均显著或极显著低于对照组。