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相似文献
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1.
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是对经济有重大影响的猪病。有许多疫苗用于控制该病.但是目前还没有特别成功的疫苗。急需研发一个细胞系,用于大量生产PRRSV疫苗。为了研究Nsp2在MARC-145细胞中对高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP—PRRSV)复制的影响,基于RNA干扰理论,构建Nsp2基因的短发夹结构RNA.构建了细胞系表达HP—PRRSV的Nsp2基因。  相似文献   

2.
袁惠君  马清  未丽  胡静  王沛  王锁民 《草业科学》2015,32(6):902-907
以霸王(Zygophyllum xanthoxylum)野生型植株(WT)、液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(Zx NHX)的RNA干扰(Zx NHX-RNAi)株系L2和L7为材料,分析了Zx NHX沉默后霸王叶下表皮气孔特征的变化情况。结果表明,50 mmol·L-1Na Cl处理下,Zx NHX-RNAi株系叶下表皮气孔开度达到峰值的时间比WT延迟了4 h;渗透胁迫下,L7气孔开度的峰值比WT显著下降12%。对照条件下,L7气孔大小显著低于WT,达到峰值的时间比WT延迟6h。无论是对照条件还是盐处理或渗透胁迫下,Zx NHX-RNAi株系叶组织含水量均显著低于WT,尤其是盐处理下,L7比WT低40%。可见,Zx NHX通过调控霸王叶的水分状况,进而影响气孔运动。  相似文献   

3.
试验旨在研究饲粮中添加白藜芦醇(Res)对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化能力和相关基因表达的影响。360只60周龄健康京粉1号蛋鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复含有12只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂在基础日粮水平上添加0.05%、0.10%、0.20%、0.40%白芦藜醇的试验饲粮。预试期为1周,试验期为8周。结果表明:随着白藜芦醇水平的升高,肝脏中总抗氧化能力、总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性均会上升,肝脏Mn-SOD和Cu/Zn-SOD的mRNA表达量也会增加。由此可见,白藜芦醇提高抗氧化酶活力和上调抗氧化酶基因表达,可能是通过调节抗氧化酶基因的表达从而发挥抗氧化作用。  相似文献   

4.
CBL蛋白是一种E3泛素连接酶,在免疫调控、信号传导调节和对多种刺激的反应中起重要作用。本研究的主要目的是探讨真核表达的CBL蛋白对H9N2禽流感病毒增殖及感染细胞的凋亡情况的影响。荧光显微镜下观察真核表达重组载体EGFP-CBL在MDCK细胞内正常表达,qPCR结果证实禽流感病毒H9N2亚型感染的转染EGFP-CBL重组载体的MDCK细胞内病毒滴度明显少;Western blot结果证实禽流感病毒H9N2亚型感染的转染EGFP-CBL重组载体的MDCK细胞36 h,其凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值较大;流式分析结果显示转染EGFP-CBL重组载体的MDCK的早期凋亡细胞的比例少,暗示CBL蛋白能够一定程度上抑制MDCK细胞的凋亡。该结果表明CBL蛋白能在一定程度上抑制H9N2禽流感病毒在MDCK细胞的扩增,并且抑制细胞的凋亡,为深入研究CBL蛋白抗病毒细胞机制提供了重要的试验依据。  相似文献   

5.
旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体,将M2基因克隆至pET28a原核表达载体,成功构建了pcold1-NA和pET28a-M2重组质粒,并成功表达出相应的融合蛋白。然后对表达的融合蛋白进行纯化,并采用免疫印迹验证其免疫反应性。本试验为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒致病机制及检测技术奠定了基础。  相似文献   

6.
本试验通过建立过氧化氢(H_2O_2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究L-茶氨酸对H_2O_2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,培养于含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基中,待细胞密度达到60%~70%时,随机分为5组,分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800μmol/L H_2O_2的Ⅰ组、添加800μmol/L H_2O_2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800μmol/L H_2O_2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800μmol/L H_2O_2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组,每组3个重复。作用12 h后,应用流式细胞术(FCM)检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸-8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)和凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达量进行检测。结果显示:1)通过膜联蛋白-V(annexin V)/碘化丙啶(PI)联合染色结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)细胞晚期凋亡比率显著降低(P0.05),且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2)通过RT-q PCR检测结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低(P0.05)。由此得出,L-茶氨酸对H_2O_2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用,该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。  相似文献   

7.
RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的;RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征;RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。  相似文献   

8.
将200羽1日龄Cobb商品代肉鸡随机分为4组,各组日粮中铜含量分别为:对照组(Ⅰ组)11 mg/kg、试验Ⅱ组110 mg/kg、试验Ⅲ组330 mg/kg、试验Ⅳ组550 mg/kg。饲养至10、30、50 d时每组各取5只鸡用于采集肝脏样品,提取肝脏总RNA用RT-PCR法测定Trx2基因m RNA在肝脏中的表达量,用蛋白质印迹法检测Trx2蛋白表达量。结果显示:日粮铜含量为11 mg/kg、110 mg/kg和330 mg/kg时,随着试验时间的延长,肝脏Trx2基因表达升高,但差异不显著(P0.05),而铜含量为550 mg/kg时,Trx2基因表达量降低且50 d时差异显著(P0.05);随着试验时间的延长,各试验组的Trx2蛋白表达量均升高,且330 mg/kg和550 mg/kg组在50 d时差异显著(P0.05)。试验表明,饲喂高铜日粮可导致线粒体型硫氧还蛋白2(Trx2)mRNA在肝脏中的表达量先升高后降低,蛋白表达量升高。  相似文献   

9.
以前期研究获得的马铃薯栽培品种“甘农薯2号”ADP核糖基化因子(ARF)基因干扰表达转化植株为材料,用qRT-PCR法对转基因植株的ARF基因表达量进行了测定,结果表明,不同发育阶段转基因叶片中ARF基因的相对表达量先降低,生长后期略有增加,表明ARF基因干扰表达量随马铃薯生长发育发生改变。ARF基因干扰表达影响马铃薯叶片中酶活性,不同发育阶段转基因叶片与对照相比,多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)活性升高11.61%~27.84%,硝酸还原酶(nitrate reductase, NR)活性提高21.10%~41.32%,磷脂酶D(phospholipase D, PLD)活性降低2.88%~57.64%,蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase, SPS)活性提高29.00%~39.57%;不同温度(4℃和室温)贮藏的块茎中ARF基因的相对表达量变化趋势一致:均先降低,再升高,但前者较后者ARF基因相对表达量显著降低。室温较4℃贮藏的转基因块茎PPO活性升高30.44%~56.28%,NR活性提高17.41%~40.92%,PLD活性降低24.39%~85.11%,SPS活性提高30.89%~45.78%。室温较4℃贮藏的非转基因块茎PPO活性升高25.11%~70.66%,NR活性提高36.07%~89.62%,PLD活性降低11.35%~72.64%,SPS活性提高27.31%~61.33%。本研究通过探讨ARF基因干扰表达对马铃薯生理生化特性的影响,为进一步研究ARF基因在马铃薯生长发育调控中的作用提供一定的理论基础。  相似文献   

10.
表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV—VP2),用于重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并为犬细小病毒病的诊断奠定基础。采用PCR方法对CPVVP2基因进行扩增,将CPVVP2基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZAA中,构建真核重组表达载体pPICZAA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)X-33中,甲醇诱导表达CPVVP2,SDs_PAGE和Westernblotting鉴定表达蛋白。结果,成功扩增了CPV—VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZAA—VP2,在毕赤酵母菌中表达出约68000蛋白。Western—blotting鉴定表明,表达蛋白为目的蛋白VP2。表达菌株扩大表达体系于培养基中培养,上清液用70%过硫酸铵4℃沉淀浓缩,采用His选择镍-亲和层析柱分离纯化获得重组的酵母表达的带组氨酸标签的VP2蛋白,表达量约3mg/L。结果表明,在毕赤酵母中成功地表达了CPV—VP2蛋白,且能被犬细小病毒VP2单克隆抗体特异识别。  相似文献   

11.
将产下后48h的家蚕滞育卵和即时浸酸卵进行低温(5℃)冷藏处理30d以上,滞育卵孵化率显著上升,而即时浸酸卵孵化率显著下降。为了探讨低温处理对滞育卵和即时浸酸卵的孵化产生不同影响的分子机制,测定了冷藏期间2种卵中的H2O2含量、过氧化氢酶(CAT)基因mRNA转录水平和CAT活性变化。结果表明:2种卵在冷藏期间随着卵中的H2O2含量显著增加,CAT基因mRNA转录水平也上调;虽然冷藏后的10~70d,2种卵中的H2O2含量、CAT基因mRNA转录水平及CAT活性都显著上升,但滞育卵的H2O2含量仍显著高于即时浸酸卵,而CAT基因mRNA转录水平和CAT活性则显著低于即时浸酸卵。即时浸酸卵在冷藏过程中H2O2含量显著增加,可能造成了对胚胎的氧化伤害,从而降低其孵化率。然而,滞育卵在冷藏过程中的CAT基因mRNA转录水平及CAT活性相对较低,H2O2相对较高,胚胎却未受到氧化伤害,推测低温处理可能诱导了滞育卵中其它抗氧化反应。  相似文献   

12.
高娅楠  韩烈保  许立新 《草地学报》2021,29(10):2200-2213
为探究喷施乙烯利提高植物抗氧化酶活性进而提高植物抗旱性在基因层面的调控、作用机制,以草地早熟禾(Poa pratensis)为试验材料,以前期获得的草地早熟禾高通量转录组测序数据为研究对象,分析并筛选出抗氧化酶编码基因,研究不同处理下抗氧化酶编码基因表达量的差异情况,从基因水平探讨乙烯利对干旱胁迫下抗氧化酶编码基因响应乙烯利调控的表达模式。结果表明,干旱胁迫下各亚细胞区室响应乙烯利处理的抗氧化酶编码基因数量和表达情况均不同;喷施乙烯利处理,显著改变了干旱胁迫下11个基因的表达量,Chl Cu-Zn SOD2,Chl SOD copper chaperone1,Chl MR3,Cyt APX2,Nuc MR的表达量显著提高,Chl GPX2,Cyt CAT3,Cyt GPX1,Per CAT isozyme,Cu-Zn SOD1,MR2表达量显著降低;干旱胁迫下,响应乙烯利调控基因数目最多的亚细胞区室依次为叶绿体、细胞质。本结果为研究乙烯利提高植物抗旱性机制提供理论依据。  相似文献   

13.
本研究旨在探讨不同来源日粮铜水平对肉鸡肝线粒体H_2O_2生成变化的影响.选用硫酸铜、蛋氨酸铜作为源铜,每种源铜均设4个浓度梯度.288只1日龄科宝商品代肉鸡随机分为8组,每组36只,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg·kg~(-1),Ⅰ组)和高铜日粮(Cu 110 mg·kg~(-1),Ⅱ组;Cu 220 mg·kg~(-1),Ⅲ组;Cu 330 mg·kg~(-1),Ⅳ组)60 d,并于12、36和60日龄取样,观察肉鸡肝线粒体H_2O_2生成速率变化.结果:与对照组相比,2种来源的高铜Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组肉鸡肝线粒体H_2O_2生成速率显著加快(P<0.05或P<0.01);试验第36和60天时,蛋氨酸铜各组肉鸡肝线粒体过氧化氢生成速率均高于相应的硫酸铜各组(P<0.05或P<0.01),并且,高铜日粮饲喂的肉鸡肝线粒体H_2O_2生成部位主要集中在线粒体呼吸链复合体Ⅳ.结果表明:高铜日粮可诱导肝脏的氧化应激损伤;同剂量的有机铜螯合物比无机铜更易加快肝脏线粒体H_2O_2生成速率,并可推测,线粒体呼吸链复合体Ⅳ是机体在高铜刺激下攻击的靶部位之一.  相似文献   

14.
研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。  相似文献   

15.
试验旨在探究肉碱对冻融猪精子质量、抗氧化、抗凋亡及精卵结合能力的影响。试验分鲜精组和冻融组,冻融组的肉碱浓度分别为0、0.025、0.05、0.075 mg/mL,对冻融后的精子质量、总抗氧化能力、抗氧化酶相关基因及凋亡相关基因mRNA表达、精卵结合能力进行检测。结果显示,在冻融组中,经过肉碱处理的精子存活率、质膜完整率和顶体膜完整率均显著高于0 mg/mL处理组(P < 0.05),其中肉碱浓度为0.05 mg/mL时改善效果最好;经过冻融处理的精子中丙二醛(MDA)浓度与鲜精组相比显著升高(P < 0.05),其中肉碱浓度为0.05 mg/mL时显著低于其他肉碱处理组(P < 0.05);与鲜精组相比,各冻融组精子总抗氧化能力均显著降低(P < 0.05),肉碱浓度为0.05 mg/mL时总抗氧化能力最高。此外,与鲜精组相比,0 mg/mL肉碱处理组中凋亡相关基因Caspase-3与Bax的相对表达量显著升高(P < 0.05),抗凋亡基因Bcl-2的相对表达量显著降低(P < 0.05),抗氧化酶相关基因SOD2、CATGPx的相对表达量显著降低(P < 0.05);冻融组精卵结合能力均下降,但肉碱浓度为0.05 mg/mL时可得到显著改善(P < 0.05)。结果表明,添加肉碱可以改善冻融猪精子的质量、抗氧化能力、抗凋亡能力及精卵结合能力。  相似文献   

16.
Hemagglutinin protein plays an important role in disease prevention and treatment of the swine influenza virus (SIV).In order to clone and express subtype H3N2 SIV A/swine/Henan/1/2010 (H3N2) HA1 and HA2 genes with chicken embryo allantoic fluid containing the H3N2 SIV after extraction of RNA.The HA1 gene and HA2 gene were amplified from the total RNA using RT-PCR and they were inserted into prokaryotic expression vector pET-28a (+) to construct recombinant expression vector.Then the vector was transformed and expressed in E.coli BL21 (DE3) pLyS.Then the bacteria were induced by IPTG and their lysates were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting,respectively.The monoclonal antibody 1C10,which was specific to HA protein,was used as primary antibody in Western blotting analysis.It was found that the expressed recombinant HA1 protein was 34.8 ku and recombinant HA2 protein was 23.2 ku analyzed by SDS-PAGE.As demonstrated by Western blotting,this HA1 expressed products showed the capacity of reacting with monoclonal antibody 1C10.All the results suggested that the expressed HA1 and HA2 proteins of H3N2 influenza virus would be very helpful in the development of rapid diagnosis method and vaccine development,which would facilitate further study on the function of HA at the same time.  相似文献   

17.
血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的一个重要蛋白,在疾病预防和治疗中具有重要作用。本试验旨在克隆和表达H3N2亚型猪流感病毒A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的HA1和HA2基因。用含有H3N2亚型SIV的鸡胚尿囊液提取RNA,RT-PCR扩增后将目的基因定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将其转入宿主菌BL21(DE3)pLyS进行表达,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测并用该病毒重组HA蛋白制备的特异性单克隆抗体1C10作为一抗对两种蛋白进行Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,得到HA1和HA2大小分别为34.8、23.2 ku的重组蛋白,Western blotting结果表明,HA1蛋白与1C10单克隆抗体具有良好的反应原性,且1C10单克隆抗体表位在HA1蛋白上。本试验结果为进一步研究血凝素蛋白的结构和功能,以及建立快速诊断方法和基因工程疫苗提供材料。  相似文献   

18.
本试验旨在研究饲粮中添加德氏乳杆菌制剂对育肥猪血脂指标、肝脏胆固醇代谢和脂肪沉积相关酶活性、组织胆固醇代谢和脂肪沉积相关基因mRNA表达和皮下脂肪组织形态的影响。试验选用120头平均体重为(65.34±3.64)kg的健康"杜×(长×大)"育肥猪,随机分为2组,每组6个重复(栏),每个重复10头(公母各占1/2)。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中添加0.10%德氏乳杆菌制剂的饲粮,预试期7d,试验期42d。结果显示:1)与对照组相比,试验组育肥猪的血清甘油三酯(TG)(P=0.08)和总胆固醇(TC)(P=0.06)含量均有降低趋势,血清总胆汁酸(TBA)含量显著降低(P0.05)。2)与对照组相比,试验组育肥猪的肝脏羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)活性有降低趋势(P=0.07),胆固醇7α-羟化酶活性(CYP7A1)显著增加(P0.05),脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)活性极显著降低(P0.01)。3)与对照组相比,试验组育肥猪的回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP)的mRNA相对表达量有降低趋势(P=0.07),皮下脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA相对表达量显著增加(P0.05);皮下脂肪细胞直径有降低趋势(P=0.09)。结果提示,德氏乳杆菌可通过干扰育肥猪回肠对胆汁酸的吸收来调控肝脏胆固醇和脂肪代谢。  相似文献   

19.
This study was amied to learn the toxic effects of ricin on human peripheral blood B lymphocytes(IM-9)and the expression of related genes.The extracted ricin of different concentrations were added to culture cells for 6 and 12 h to make sure the median inhibitory concentration,then culture cells at the median inhibitory concentration for 2,6,10 and 12 h,at each time point detect the expression of immune related genes CD40,IL-1β,TNF-α and apoptosis related genes Bcl-2,Bax,Caspase-3.The results showed that the inhibitory effect of ricin on IM-9 cells was increased with the increase of concentration and time.The expression of TNF-α and CD40 genes increased significantly in experimental group than control group at 6 h(P<0.05).10 and 12 h reached extremely significant level(P<0.01);There was no significance of IL-1β gene expression between experimental and control groups(P>0.05).About apoptosis gene,the Bax gene expression decreased extremely significantly in experimental group at 10 h(P<0.05)and decreased significantly at 12 h(P<0.05);Bcl-2 gene had reached significant levels of four time periods(P<0.05), and 2,12 h were extremely significant(P<0.01);The expression of Caspase-3 reduced at 6 h,the other time points increased significantly(P<0.05),at 2 h reached extremely significant level(P<0.01).It showed that the gene expression of IM-9 cells could be significantly affected by ricin,TNF-α and CD40 genes were two potential genes to evaluate the toxicity by IM-9 cells.  相似文献   

20.
试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞(IM-9)毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12 h,研究剂量-时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12 h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20 ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12 h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6 h试验组表达量与对照组相比显著升高(P<0.05),10、12 h达到极显著水平(P<0.01);IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著(P>0.05)。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10 h极显著降低(P<0.01),12 h显著降低(P<0.05);Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平(P<0.05),2、12 h达到极显著水平(P<0.01);Caspase-3基因除6 h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高(P<0.05),2 h为极显著水平(P<0.01)。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。  相似文献   

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