新疆部分焉耆马场马梨形虫病病原学检测及序列分析

为了解新疆地区焉耆马场马梨形虫病病原感染情况,促进当地马梨形虫病的综合防控和马产业的健康发展,选取5个焉耆马场作为试验点,随机采集156匹焉耆马全血进行马梨形虫病病原DNA检测,并使用SPSS Statistics 17.0、Megalign与MEGA 11.0软件分析不同采样点、不同年龄、不同性别马匹的感染情况差异,同时进行病原核酸的同源性比较和系统进化树构建。结果显示：156匹焉耆马全血样品中,检出马梨形虫病病原核酸阳性82份,其中马泰勒虫、马驽巴贝斯虫和两者混合感染阳性率分别为33.3%(52/156)、26.9%(42/156)和7.7%(12/156)。不同采样点、不同年龄、不同性别焉耆马的马梨形虫病病原阳性率均无显著差异（P> 0.05）。通过Megalign与MEGA11.0软件分析发现：测序得到的马泰勒虫18S rRNA基因序列与选取的参考虫株同源性为95.5%～100%,马驽巴贝斯虫BC-18S rRNA基因序列与选取的参考虫株同源性为98.6%～99.6%。马泰勒虫18S rRNA基因与马泰勒虫伊犁株（OL589505.1）位于同一分支上,进化关系较近,与其他...     

马梨形虫病及其诊断方法概述

本文概述了马梨形虫病的流行特点及其诊断方法,并分析了各种诊断方法的优缺点。病原学诊断可快速诊断病例,但大量检测时操作较为困难;ELISA 技术已经十分成熟,是世界动物卫生组织推荐的标准诊断方法;CFT可准确诊断早期（急性）感染,但无法识别经过药物已产生抗补体反应的个体;PCR方法可直接检测病原体核酸,敏感性较高,但操作较为复杂;real-time PCR特异性强、灵敏度高、稳定性强,但所需仪器昂贵;LAMP技术敏感、简便、快速,但常出现假阳性结果。除病原学检测外,以上方法大多不适于田间检测。因此,需要建立一种操作简便、诊断准确、成本低廉的田间检测方法,未来研究方向将主要侧重于免疫学和分子生物学。     

巴贝斯虫及其传播媒介—蜱的研究概况

巴贝斯虫是属于原生动物亚界(Protozoa)、顶器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、真球虫目(Eucoccidiorida)、梨形虫亚目(Piroplasma)、巴贝斯虫科(Babesiidae)、巴贝斯虫属(Babesia)的一类单细胞虫体。巴贝斯虫属共有99种虫体,它们分别寄生于各种家畜、野生动物和各种鸟休内。其中多数虫体具有严格的宿主特异性。只有少数虫体,如田鼠巴贝斯虫(B.microti)、既可在鼠体内寄生,有时又可侵袭人体 自然条件下,多数巴贝斯虫必须经硬蜱(lxodid)才能在哺乳动物宿主间传播。在哺乳动物宿主体内,巴贝斯虫主要寄生于红细胞内,分裂繁     

一种牛源扇头蜱及其携带梨形虫种类鉴定

为了鉴定从汉中市牛体表采集到的蜱种类及其携带病原梨形虫(Piroplasma)的种类,在形态学初步观察的基础上,用PCR技术基于线粒体16SrDNA对蜱种类进行了分子鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因分别检测蜱体内携带巴贝斯虫属(Babesia)、泰勒虫属(Theileria)等病原情况.结果显示,所采集到的67只...     

马梨形虫病在新疆昭苏地区流行相关因素的调查与分析

为了解新疆昭苏县马匹体表蜱虫和周围游离蜱虫携带马梨形虫情况及其之间流行关系,于2016年4-7月份,分别采集马匹血液、相应马体表携带埤虫和周围牧场的蜱虫,经PCR检测总携带梨形虫率分别为93.9％(31/33),15.8％(6/38),3.4％(6/175);对所采集的蜱虫进行形态学鉴定,结果分别为草原革蜱、森林革蜱和...     

云南部分地区牛羊寄生蜱媒梨形虫的流行病学研究

为了了解云南省玉溪市、昆明市、楚雄市和普洱市牛羊寄生蜱媒梨形虫的流行情况,试验从上述4个地区牛羊体表共采集455份蜱样本,基于形态学和cox1基因序列对寄生蜱进行物种鉴定,通过扩增梨形虫18S rDNA基因及序列分析对寄生蜱媒梨形虫进行鉴定,并统计不同地区、不同宿主寄生蜱媒梨形虫的阳性率,分析寄生蜱感染巴贝斯虫和泰勒虫的风险因素(所在地区、宿主种类)。结果表明：采集的蜱均为微小扇头蜱。在455份蜱样本中,共鉴定到5株巴贝斯虫,其中4株为双芽巴贝斯虫,1株未定种;共鉴定到60株泰勒虫,其中54株为东方泰勒虫,6株未定种。选取2株双芽巴贝斯虫和4株东方泰勒虫构建遗传进化树,其中双芽巴贝斯虫CX-370和CX-369与双芽巴贝斯虫参考株(GenBank登录号为KY805825.1、AY603402.1)和巴贝斯虫参考株(GenBank登录号为KP410277.1)位于的同一分支,未定种的巴贝斯虫CH-367为独立分支且与上述虫株汇聚为一支,东方泰勒虫PE-423、CJ-374、KM-106和PE-394与东方泰勒虫参考株(GenBank登录号为MH208640.1、MH208639.1、MH...     

马驽巴贝斯虫ddPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫(Babesia caballi)病是马属动物的一种血液原虫病,被农业农村部列为二类动物疫病.本研究旨在建立一种针对马驽巴贝斯虫病的ddPCR检测技术.利用马驽巴贝斯虫特异性引物及探针对反应体系进行优化,测试了方法的特异性、稳定性及灵敏性,对30份可疑样品进行了初步检测.结果显示,该方法具有较好的稳定性,最...     

新疆部分地区马驽巴贝斯虫病感染PCR检测调查

为了解新疆部分地区马匹感染马驽巴贝斯虫病的流行情况,通过PCR方法对不同地区所采集的样品进行检测,并对不同地区和不同年龄段马驽巴贝斯虫感染情况进行单因素方差分析。结果显示,所检测的504份马血样中,54份血样为阳性,阳性率为10.71%。其中北疆昭苏种马场、阿勒泰、吐鲁番托克逊马驽巴贝斯虫阳性率分别为20.61%、5.17%、0;巴音布鲁克牧场、和静地区马驽巴贝斯虫阳性率分别为0和8.59%。从阳性样品中都检测到了驽巴贝斯虫BC48基因片段,与已知序列的同源性为99%。X≤3,3X≤6,6X≤9,X9四个年龄段马驽巴贝斯虫感染率分别为9.76%、10.53%、11.21%和11.65%。单因素方差分析结果表明,昭苏种马场与阿勒泰、巴音布克牧场分别存在极显著性差异(P0.01);巴音布鲁克牧场与和静也存在极显著性差异(P0.01);昭苏种马场与吐鲁番托克逊存在显著性差异(P0.05),其余各地方差异不显著。各个年龄段马驽巴贝斯虫感染无显著性差异。本试验的研究数据可为研究新疆马驽巴贝斯虫分布特点提供数据支撑。     

一例马混合感染驽巴贝斯虫与马巴贝斯虫病及并发症的诊治

从外地新购的马，混合感染驽巴贝斯虫、马巴贝斯虫，由于早体代谢产物的刺激与渐进性贫血，而引发一系列并发症：心衰、肺水肿、出血性素质致肠驰缓。经实验室检查确诊后，用黄色素、贝尼尔驱杀致病体并采用补液、止血、通便、强心等一系列对症治疗措施及中兽医辩证治疗后，该病例救治成功。     

新疆边境地区蜱携带梨形虫种类的分子鉴定

为了调查新疆边境地区梨形虫在当地蜱中的携带情况,对采集于2019年4月份和5月份的新疆边境地区共25个县(市)的蜱进行形态学鉴定,提取DNA,利用梨形虫套式引物进行扩增并测序,并采用IQ-Tree软件的ML法构建不同地理株的进化关系.结果显示,采集到的1 516只蜱包括4个属9个种,分别为森林革蜱(Dermacento...     

Equine piroplasmosis: An updated review

Equine piroplasmosis (EP) is a tick‐borne protozoal disease. The causative agents are Babesia caballi and Theileria equi. Horses infected with T. equi remain carriers for life. Iatrogenic means can also be factors for transmission. Typical clinical signs of acute EP can include fever, anorexia, anaemia, icterus, congested mucous membranes, tachypnoea and tachycardia, sweating, and limb and supraorbital oedema. In severe cases, haemoglobinuria and bilirubinuria are present as well as a variety of atypical presentations due to organ damage and dysfunction. Because clinical pathology is not specific of EP, accurate diagnosis requires specific diagnostic tests. The value and the pertinence of blood smears, polymerase chain reaction and serological tests are presented. Imidocarb propionate is considered as the drug of choice against EP. However, treatment strategies differ greatly between endemic and nonendemic regions. In endemic regions the goal is to reduce clinical disease because premunition plays an important role in the protection of horses, while in nonendemic regions the goal of treatment is to eliminate the risk of transmission with sterilising treatment protocols. As there is no effective vaccine available to date, prevention relies mainly on drug therapy, restriction in the movement of infected horses, and control of tick vectors.     

Prokaryotic Expression of the Cysteine Proteinase Gene of Xinjiang Strain of Theileria equi/Babesia caballi and Its Bioinformatics Analysis

This study aimed to clone and express cysteine proteinase (CP) gene of Theileria equi and Babesia caballi. The CP proteins were analyzed using bioinformatics tools and online databases. The total DNA of T. equi and B. caballi as the template sequence for PCR. The CP genes were cloned, expressed using the cloning technique and prokaryotic expression system, respectively. Then the recombinant CP (rCP) proteins were purified by Urea dialysis. Finally the specific reaction of polyclonal horse anti-CP serum with rCPs was analyzed through Dot blot method. The CPs were predicted and analyzed by the software MAGA, Prot Param, TMHMM, SignalP-5.0, Antibody Epitope Prediction, SYFPEITHⅡ, ProPred and EzMol^2.1 respectively. The CP genes were successfully amplified from DNA of T. equi and B. caballi and expressed in the inclusion body fractions, Dot blot assay indicated that the recombinant protein could react with polyclonal horse anti - CP serum. Compared with T. equi-CP and B. caballi-CP, different protozoon CP genes were highly conserved in evolution, and phylogenetic analysis results were consistent with their protozoon taxonomy. The bioinformatics analysis revealed that two CPs are the hydrophilic protein instead of a transmembrane one, no transmembrane domain, no Th cell epitope was found, and more localized in the cytoplasm, mitochondria and nuclei. The relative molecular weight (MW) of T. equi-CP was 29 948.60, the theoretical isoelectric point (pI) was 5.53, stability coefficient was 22.50; B. caballi-CP’MW was 14 603.62, the theoretical pI was 8.54, stability coefficient was 47.69, but signal peptide was contained. The CPs have good reactionogenicity, as the hydrophilic extracellular proteins with no Th cell epitope, and more localized in the cytoplasm, mitochondria and nuclei, which helped T. equi and B. caballi avoid host immune response outside the cell membrane and the CPs involved in proliferation, differentiation and programmed cell death. In conclusion, a theoretical basis was provided for the study on CP’s functions and the pathogenesis of T. equi and B. caballi.     

马泰勒虫和驽巴贝斯虫半胱氨酸蛋白酶截短基因的克隆表达及其生物信息学分析

旨在克隆、表达马泰勒虫（Theileria equi）和驽巴贝斯虫（Babesia caballi）半胱氨酸蛋白酶（cystein protease,CP）基因,并对其进行生物信息学预测和分析。提取马泰勒虫和驽巴贝斯虫的DNA,以此为模板扩增目的基因。利用克隆技术和原核表达系统克隆表达CP,用尿素透析法进行纯化。通过Dot blot验证其与相应阳性血清特异性反应。应用MAGA软件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEITHⅡ、ProPred及EzMol^2.1等在线分析软件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列。成功构建了重组质粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP,经SDS-PAGE试验结果显示该基因表达的蛋白以包涵体形式高效表达,并能与相应阳性血清特异性反应。对T.equi-CP和B.caballi-CP基因编码蛋白进行系统发育分析发现,与其他原虫物种相比,系统发育分析结果与其原生动物学分类结果一致。经生物信息学分析预测显示,两个CP蛋白为亲水性蛋白,无跨膜区,不属于跨膜蛋白,无Th细胞表位,在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多。其中T.equi-CP蛋白的相对分子质量为29 948.60,等电点为5.53,稳定系数为22.50。B.caballi-CP蛋白的相对分子质量为14 603.62,等电点为8.54,稳定系数为47.69,有信号肽区域。T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白具有良好的反应原性,作为亲水性膜外蛋白,无Th细胞表位,在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多等,可能说明CP在马梨形虫逃避宿主免疫反应,参与增殖、分化及程序性细胞死亡等发挥作用。本研究为T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的功能研究与马梨形虫的致病机制研究提供了理论依据。     

新疆小海子垦区媒介蜱及其携带梨形虫种类鉴定

为探究新疆小海子垦区及周边地区媒介蜱及所携带梨形虫种类,2020年5月～7月通过形态学采集到524枚硬蜱;用梨形虫18S rRNA特异性引物对硬蜱样本进行PCR检测,并对阳性样本18S rRNA基因进行遗传进化分析.结果表明,采集的硬蜱包括小亚璃眼蜱(Hyalomma anatoricum)293只、亚洲璃眼蜱(H.a...     

青海省乌兰县马小巴贝西亚原虫病的ELISA诊断

用重组的截短的马焦虫(Babesia equi)裂殖子表面抗原2(GST-EMA-2t),作为ELISA诊断抗原,对来自青海省乌兰县的116份马血清进行抗B.equi抗体的检测,共检出15份抗B.equi阳性血清,阳性率为12.93%。结果初步说明我省乌兰县的马群中存在B.equi的感染。     

四川省汶川县两种牛梨形虫的分离鉴定

自四川省汶川县黄牛体表采集长角血蜱的饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛.血液涂片检查发现,感染后第10 d,病牛血液中出现一种大型巴贝虫,感染后第24 d,出现一种小杆形的泰勒虫.形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们分别为卵形巴贝虫与瑟氏泰勒虫.     

Comparative efficacy of diminazene diaceturate and diminazene aceturate for the treatment of babesiosis in horses

The present work was conducted to study the comparative efficacy of two anti-protozoan (babesicidal) drugs on the recovery and health of horses. A total of 80 horses, showing typical clinical symptoms of the disease, were selected for this study; the presence of babesiosis was confirmed through blood smear examination. These animals were divided into two groups i.e. A and B. Horses of Group A, were treated with diminazene diaceturate, while horses of Group B were treated with diminazene aceturate. Efficacy of the drugs was determined by the reversal of clinical signs and a negative blood smear examination. The efficacy of diminazene diaceturate was demonstrated to be 80% while diminazene aceturate was found to have 90% efficacy against babesiosis.     

新疆昭苏地区马梨形虫病病原及抗体检测

马梨形虫病是由马驽巴贝斯虫和马泰勒虫寄生于马属动物的红细胞内所引起的一类血液原虫病,呈全球性分布,尤其在新疆发病率更高,处于逐年上升趋势,对区域性马产业的发展影响极大。为了解2018年新疆昭苏养马区域马梨形虫的感染情况,随机采集昭苏县18个乡镇的马全血及血清各858份,采用PCR和间接ELISA分别进行检测,对两种方法检测的18个地区、不同年龄阶段的马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染情况进行统计学分析。结果显示,PCR检测马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的阳性率分别为12.12%、13.87%和2.80%;间接ELISA检测马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的抗体阳性率分别为15.50%、10.14%和2.56%;不同年龄阶段筛查结果显示,在6岁以下的马匹感染马驽巴贝斯虫、马泰勒虫及混合感染的阳性率较高,并且不同地区的不同年龄阶段马匹的马梨形虫感染率存在不同程度的差异。此次获得的昭苏县马梨形虫感染情况的一线数据,可为当地养马区域马梨形虫病的综合防控提供技术支撑。