山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定

从福建省不同羊场的山羊颈肩部淋巴结脓肿处分离到5株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血清的琼脂培养基上,可生长成直径1-2 mm、干燥、中央凸起、不透明、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。根据其形态学、培养特性、生化特性及致病性试验和动物回归试验结果,判定所分离的5株菌为山羊伪结核棒状杆菌。     

波尔山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定

我省某波尔山羊养殖场从上海某种羊场引入一批波尔山羊，引入几个月就发现一只大公羊体表淋巴结主要是肩前淋巴结和股前淋巴结发生脓肿，此后，同舍内的母羊也相继受到感染。由于该羊群是放养，羊舍墙壁为土墙，发生脓疱的羊在墙上磨擦，脓疱破溃，污染羊舍和草地，所以很快波及全群。大羊发生率高，小羊发生率低。     

一株奶山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

为获得陕西某羊场病羊脓包中的病原菌,以无菌采集的病羊颈部脓汁为材料,进行细菌分离培养,鉴定分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性,挑取分离菌株进行协同溶血试验(cAMP)和16SrRNA基因的PCR扩增,并对序列进行分析,NJ法构建系统发育树;用分离菌株分别接种Balb/c小鼠和奶山羊;药敏试验鉴定分离株的耐药性。结果显示,分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性与伯杰细菌鉴定手册所述伪结核棒状杆菌特性一致;测序显示分离菌株与GenBank中已收录伪结核棒状杆菌相似性达97%以上;Balb/c小鼠致病性试验和奶山羊动物回归试验表明分离株有强致病性;药敏试验表明分离菌株对红霉素、环丙沙星、克拉霉素、强力霉素、四环素、头孢唑啉、新霉素、氧氟沙星等多种抗生素敏感,对复方新诺明耐药。     

山羊源伪结核棒状杆菌的分离鉴定及其毒力评价

为了确定齐齐哈尔市某山羊养殖场疑似患有伪结核病病羊的病原及其毒力,试验从不同病羊的皮下脓包中采集脓汁病料3份,通过细菌的分离与纯化、生化鉴定、16S rDNA基因的PCR扩增与序列分析确定病原,并通过致病性试验对分离株的毒力进行评价。结果表明：共得到3株分离株,其菌落形态和生化特性菌与伪结核棒状杆菌相符,分别命名为CP045、CP073、CP969;分离株CP045、CP073、CP969的16S rDNA基因序列与伪结核棒状杆菌参考株的相似性分别高达98.8%、100%、99.8%,进一步确定3株分离株均为伪结核棒状杆菌。注射分离株CP073的3只小鼠中有2只于注射后36～48 h陆续死亡,1只精神极度沉郁、食欲不振;注射分离株CP045、CP969的3只小鼠于注射后5 d内均未见死亡,但状态不佳。注射分离株CP045、CP073、CP969的小鼠肝脏均不同程度出血、肿大,脾脏轻微出血;注射分离株CP073的小鼠皮肤表面有黄色脓汁渗出,皮下有黄白色玉米粒大小的结核样脓肿;注射分离株CP045和CP969的小鼠皮下未见明显脓肿。说明该山羊养殖场疑似患有伪结核病的病羊感染了伪结核棒状杆菌...     

波尔山羊伪结核棒状杆菌在我省的首次分离鉴定

我省某波尔山羊养殖场发生了几乎波及全群的体表淋巴结脓肿，通过流行病学调查、临床症状、病理变化以及实验室诊断，确诊该病病原为伪结核棒状杆菌。     

羊伪结核棒状杆菌的药敏试验

用纸片法测试了９株羊伪结核棒状杆菌对利福平、异菸肼、对氨基水扬酸钠及黄连等４０种中草药的敏感性。结果，供试菌均对利福平和黄连高度敏感；对黄芩和黄柏中度敏感；而对其余的３７种中草药及异菸肼和对氨基水扬酸钠均不敏感。     

伪结核棒状杆菌的药物敏感性试验

山羊皮下、淋巴脓肿病可由多种病原菌引起,经采集病料分离鉴定,其主要病原主要是伪结核棒状杆菌,该病是一种人畜共患的慢性传染病,也是世界上公认难以防治的传染病之一。该病主要引起患病羊发生一处或多处脓肿,消瘦、生产性能低下,严重者发生死亡,该病一旦侵入羊群则很难彻底消除。近年来,随着养羊业的发展,大量从省内外引进种羊,加之商品羊的频繁流动,我省山羊群发生皮下、淋巴脓肿病较普遍,给养羊业发展造成了较大的危害。本试验在本省分离鉴定的伪结核棒状杆菌中,选取不同地区、不同品种山羊病料分离的5株伪结核棒状杆菌,采用圆滤纸片法,…     

贵州山羊伪结核棒状杆菌的生化鉴定

伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)是引起人和多种动物共患的慢性传染病的重要病原之一,主要引起羊干酪性淋巴结炎、骆驼脓肿、马溃疡性淋巴管炎和人化脓性淋巴管炎。动物多由皮肤破伤感染,有的可因摄食污染的饲料而感染。羊的发病率较高,常在8%~30%以上。该病的发病特征是受害羊的淋巴结肿大,呈脓性干酪性坏死;有的还可能在肺、肝、脾和子宫角发生大小不等的结节,内含淡黄白色干酪样物质。病羊消瘦,生产性能下降,严重者死亡。由于该病发病缓慢,致死率低,所以常被人们忽视,但它却又是世界公认的难以防治的传染病之一,一…     

骆驼伪结核棒状杆菌病的诊断

发病情况 农七师一二四团一养殖户，所有骆驼的饲养方式是常年放养在荒漠戈壁草场，共计饲养42峰，从2003年3月20日至4月10日发病5峰，发病率为11．90％，全部死亡，病死率为100％。发病年龄从2月龄至10岁均有发病。此病的发生无明显的年龄界限和性别之分，也无明显的季节性，但以春季发病较为多见。     

双峰骆驼伪结核棒状杆菌病的诊断及防治

伪结核棒状菌具有很多种形状,像杆状、球状等等,广泛存在于患畜的皮肤、肠道内,也可存在于肥料、土壤中。如果骆驼感染伪结核棒状菌,其粪便中也有病菌存在,进而感染其他的骆驼。如果骆驼体内含有伪结核棒状菌病病毒,其淋巴结、肺脏等处会出现大大小小的脓肿,而且一旦其体表的脓肿有破溃发生,其中的白色粘稠脓汁就会流出来,进而污染周围的环境,发病率是很高的。所以需要对其进行研究和探讨,寻找最好的解决方案。本文通过伪结核棒状杆菌病的来历以及症状,阐述双峰骆驼伪结核棒状杆菌病的诊断及防治方法。     

羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及ELISA检测方法的建立

从疑似山羊干酪性淋巴结炎羊的肩前淋巴结脓肿内分离到2株菌,经鉴定均为羊伪结核棒状杆菌。利用羊伪结核棒状杆菌标准菌株(ATCC19410株)制成外毒素作为检测抗原,通过酶标抗体、阳性血清、外毒素抗原最适浓度的选择试验,确定适当的抗原、抗体和酶标抗体稀释浓度,建立了间接ELISA方法用于检测抗体。用建立的ELISA方法检测100份待检羊血清,其中阳性血清4份,阳性检出率为4％。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及自家灭活苗的研制

从病猪体内分离细菌,对分离菌株从形态、染色、培养特性、生化特性等方面进行鉴定;用纸片扩散法筛选敏感药物,实验室合成氢氧化铝胶佐剂,制备自家苗对其进行防制。试验结果表明,该分离菌为副猪嗜血杆菌,病猪确诊为副猪嗜血杆菌病,分离菌对头孢噻肟、丁胺卡那霉素、庆大霉素、头孢菌素高度敏感,用自家苗防制该病安全有效。结果提示,副猪嗜血杆菌病只有通过实验室分离鉴定才可确诊,临床应筛选敏感药物进行治疗,制备自家苗对预防该病有较好效果。     

牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定与灭活疫苗免疫效果研究

由2例疑似牛传染性鼻气管炎（IBR）病例的荷斯坦奶牛分离到一株病毒,命名为IBRV—C1株。该病毒可被IBR标准阳性血清完全中和;接种MDBK细胞可出现IBR病毒典型细胞病变效应;选取IBR病毒gB蛋白基因序列设计引物进行PCR检测和基因测序,结果可扩增出特异性目的片段;动物回归试验显示,3头牛均可见体温升高、鼻流粘液、呼吸困难等典型的IBR临床症状。在此基础上制备了三批牛传染性鼻气管炎灭活疫苗,并进行了疫苗安全性和效力试验,结果表明三批疫苗对靶动物安全,免疫效果较好,免疫牛中和抗体效价几何平均值可达1：41以上,攻毒保护率达5／5。     

牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定

一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。     

新型佐剂狂犬病灭活疫苗的研制

利用反向遗传操作系统拯救出狂犬病毒的携带双G基因的HEP-dG株,选用新型佐剂制成狂犬病灭活疫苗,进行小鼠免疫试验、比格犬最小免疫剂量试验、免疫持续期试验。试验表明,携带双G基因的HEP-dG株具有良好的免疫原性,该新型佐剂狂犬病灭活疫苗免疫效果较好,具有完全的保护力和较长的免疫保护持续期。     

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID₅₀,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×10^8.0 TCID₅₀/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。     

Identification of Corynebacterium pseudotuberculosis isolated from muscular abscesses in two horses: First report in Mexico

Two Quarter Horse stallions from the same region in Mexico presented with pectoral abscesses and lameness. Exudate samples were taken from drained muscular abscesses and Corynebacterium pseudotuberculosis, identified by bacteriological techniques and multiplex polymerase chain reaction, was obtained in a pure isolation culture from both samples. The sequences of a hypervariable region of the rpoB gene showed 100% and 99% identity to C. pseudotuberculosis 316 biovar equi (CP003077.1) isolated from a horse. Both strains' sequences were located in the same phylogenetic cluster as other biovar equi strain sequences obtained from GenBank. Both horses responded satisfactorily to treatment, which included surgical procedures and wound management. These study cases proved the infection of Mexican horses with C. pseudotuberculosis; however, the prevalence of this pathogen remains unknown.     

猪水肿病的病原分离鉴定与灭活菌苗试制

从患病仔猪体内分离出病原菌,据其病原菌形态、培养特性和生化特性,鉴定为大肠埃希菌.药敏试验结果表明,该菌对丁胺卡那、头孢哌酮、头孢他定、头孢唑啉高度敏感,对呋喃妥因、阿莫西林中度敏感,对四环素、庆大霉素低度敏感,该菌致死小鼠.利用分离培养的细菌进行增殖培养,制备了生理盐水菌液和营养肉汤菌液两种灭活疫苗.结果表明菌种在普通琼脂斜面上生长旺盛,两种疫苗接种小鼠全部健活,生理盐水和营养肉汤菌液组免疫保护率分别达到75%和87.5%,说明疫苗安全有效.     

Isolation and Identification of a Variant Porcine Epidemic Diarrhea Virus and the Immune Efficacy of Its Inactivated Vaccine

This study was aimed to isolate a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus and prepare a PEDV inactivated vaccine with high valence by suspension culture process for immunizing against PEDV effectively in China.200 small intestines and theirs contents of diarrhea piglets died of diarrhea,collected from many large-scale pig farms in China,were detected by RT-PCR and sequenced,a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus was selected and put on the suspension-cultured Vero cells in a 2 L reactor for virus isolation and continuous cell culture,the harvested virus suspension,which was identified and determined TCID₅₀,was inactivated by formaldehyde and mixed with aluminum hydroxide gel adjuvant to prepare PEDV inactivated vaccine.After its physical behavior,stability viscosity,sterility test were checked out,the safety and immune efficacy were studied by immunizing the pregnant pigs and theirs piglets.The results were as follows:86 samples were detected positive in 200 samples,cytopathy occurred after the mutant strain samples screened were passaged to 5th generation,the virus suspension was harvested in 10th generation and identified as a mutant strain of PEDV,named PEDV-GF10 strain.The virus titer of harvested virus suspension was measured up to 1×10^8.0 TCID₅₀/mL after concentrated.After the vaccine was checked out,the sows,40 and 25 days before delivery in experimental groups,were injected into Xuehai acupoint with 4 mL vaccine and the pigs in blank group were free of immunifications.The results showed that there were no obvious differences in the production status of the sows in experimental groups and blank group and the temperature of theirs 3-day-old healthy piglets injected different doses of vaccine,and the vaccine was safe to the sows and piglets.Forty 3-day-old piglets producted by pregnant sows in experimental groups and blank group were randomly selected and taken 4 mL 1×10^8.0TCID₅₀/mL F10 virus culture.The PEDV morbidity of piglets in blank group was 100% after injection and the antibodies were negative;10% piglets in blank group had mild diarrhea symptoms,the protection rate was up to 90%,antibody of passive immunity in piglets lasted for more than 35 days.Virus titer of mutant strain of PEDV-GF10 improved a lot by suspension cell culture,the PEDV-GF10 inactivated vaccine was safe,and could effectively prevent and control the variation strain of PEDV in China.     

鸭疫里默氏菌铝胶佐剂与铝胶复合佐剂4价灭活疫苗的比较

以血清 1、2、4、5型鸭疫里默氏菌 (Riemerella anatipestifer,RA)制备 4价铝胶佐剂和铝胶复合佐剂 2种灭活苗 ,经过无菌及安全检查合格后 ,对 3日龄樱桃谷鸭颈背部皮下注射 0 .5 m L/只。(1 )免疫后 1 0、1 3、1 6 d对同源 RA的攻击 ,铝胶佐剂苗表现出 5 %～ 2 0 %、75 %～ 90 %、1 0 0 %免疫保护 ,2 3～ 30 d免疫保护力开始下降 ;铝胶复合佐剂苗表现出1 0 %～ 35 %、80 %～ 1 0 0 %、1 0 0 %免疫保护 ,5 1～ 6 5 d免疫保护力开始下降。(2 ) 2种疫苗 1次免疫后 2 3d抗体水平均达高峰 ,至 93日龄时仍能检出抗体的存在 ,1 0日龄进行第 2次免疫后可产生更高的抗体水平 ,到 6 5 d时仍能保持较高抗体水平 ;其中 1 6～ 6 5 d进行 2次免疫的铝胶复合佐剂苗产生的抗体水平显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1 )地高于铝胶佐剂苗。 (3) 2种疫苗免疫雏鸭后能够显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1 )地增强 T细胞的免疫力 ,时间达 2周。对攻毒保护试验、抗体消长规律和细胞免疫测定结果综合分析表明 ,RA4价铝胶佐剂和铝胶复合佐剂 2种灭活苗免疫雏鸭后 ,免疫保护的形成是体液免疫与细胞免疫协同作用的结果。经实验室攻毒保护试验、EL ISA抗体消长规律测定、T细胞免疫水平测定和田间试验表明 ,研制的 2种疫苗均具有