华支睾吸虫的临床症状及治疗

华支睾吸虫又称肝吸虫,其寄生在人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内造成肝胆的一系列疾病,是一种重要的人畜共患寄生虫病。人体感染是因为食入含有华支睾吸虫活囊蚴的鱼或虾所致。寄生在肝胆管内虫体运动的机械性刺激和虫体代谢产物的作用,致胆管上皮损伤,胆管阻塞,从而引起华支睾吸虫病,可表现为胆管胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍等,重者可发生肝硬化。华支睾吸虫病是我国流行最严重的食源性寄生虫病,被卫生部列为我国重点防治寄生虫病之一。     

华支睾吸虫吉林分离株的鉴定

为了研究吉林省内华支幸吸虫自然分离株的种类及基因变异情况,将镜检含有疑似华支睾吸虫囊蚴的麦穗鱼,经胃蛋白酶消化后获得该寄生虫囊蚴,用比重沉降法去除杂质,同时利用形态学和PCR方法进行种类鉴定.镜检结果表明分离株具有典型的华支睾吸虫囊蚴特征,并且经过PcR方法扩增出了华支睾吸虫的种特异性基因片段,碱基序列与GenBank...     

华支睾吸虫囊蚴标本制作新法

华支睾吸虫囊蚴标本制作新法许正敏（湖北囊凡市卫校）作者在华支睾吸虫囊蚴检查过程中，发现本地区该虫在鱼皮分布最多［１］。华支睾吸虫囊蚴标本传统制作方法是先用人工胃液消化分离出囊蚴──脱水──甘油透明──封片或染色封片［２，３］，此法繁杂染色及分色观察不...     

华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP栽体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区(镇赉县)家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与栽体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库.文库容量为1.5×106pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4～2.0 kb之阀,扩增文库的滴度为1.5×1010pfu/mL.然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0×105个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因.本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据.     

汪清县复兴镇犬华支睾吸虫感染情况的初步调查

华支睾吸虫病又称肝吸虫病,是一种人兽共患病,目前是我国较为严重的寄生虫病之一,患上该疾病不仅会危害到人体的健康,也会对畜牧业造成极大的影响.到目前为止,我国多数研究仍针对于人类华支睾吸虫病进行研究,有关动物尤其犬类华支睾吸虫病流行病学方面的报道较少.为此,对汪清地区进行犬华支睾吸虫感染调查及流行病学分析,为制定本地区华...     

华支睾吸虫病的防控

华支睾吸虫病是由华支睾吸虫寄生于人、犬、猫、猪及其他野生动物的肝脏胆管和胆囊内,可使肝脏肿大并导致其他肝病变,是一种重要的人兽共患吸虫病。对华支睾吸虫的生活史以及该病的流行病学、致病机理及病理变化、诊断方法、防治措施进行介绍,以期为有效防控华支睾吸虫病提供参考。     

华支睾吸虫病的防控

华支睾吸虫病是由华支睾吸虫寄生于人、犬、猫、猪及其他野生动物的肝脏胆管和胆囊内,可使肝脏肿大并导致其他肝病变,是一种重要的人兽共患吸虫病.对华支睾吸虫的生活史以及该病的流行病学、致病机理及病理变化、诊断方法、防治措施进行介绍,以期为有效防控华支睾吸虫病提供参考.     

华支睾吸虫间接ELISA检测方法的建立及初步应用

RT-PCR扩增华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的Enolase基因后,进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物;以纯化后的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对工作条件进行优化。结果表明,ELISA最佳工作条件为:抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,37℃1h再4℃过夜;5%脱脂奶粉,37℃封闭1h;待检血清1∶100稀释37℃孵育1h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育45min;TMB显色作用时间10min;确定的阴阳性血清临界值为0.253。所建立的ELISA方法特异性较好,可检测犬华支睾吸虫病阳性血清,与犬卫氏并殖吸虫病阳性血清、犬蛔虫病阳性血清、犬弓形虫病阳性血清、犬新孢子虫病阳性血清均不发生反应。该方法敏感性为1∶3 200。批间批内重复性试验变异系数均小于10%。在临床应用中,对浙江地区353多份犬血清的检测表明,样品阳性率为1.13%。本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为华支睾吸虫的血清流行病学调查提供了有效手段。     

华支睾吸虫的流行病学分析

华支睾吸虫是一种严重的食源性寄生虫病,其寄生在人和犬、猫等动物的胆囊和胆管内造成肝胆的一系列疾病.寄生在肝胆管内虫体运动的机械性刺激和虫体代谢产物的作用,致胆管上皮损伤,胆管阻塞,从而引起华支睾吸虫病,可表现为胆管胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍等.该病在我国流行范围广、感染率高,呈地方分布.本文主要针对其流行病学进行分析,正确认识该病发生流行情况,为更好地开展预防和治疗提供依据.     

吉林省扶余市松花江流域淡水鱼的华支睾吸虫寄生情况调查

华支睾吸虫病(又称肝吸虫病)是一种危害严重的淡水鱼源性人兽共患寄生虫病,吉林省是我国该病危害最为严重的地区之一,为了解吉林省淡水鱼的感染情况,本试验于2014年9月—2015年6月对吉林省扶余市3个乡镇(长春岭镇、得胜镇、更新乡)的松花江流域及沿江支流的野生淡水鱼感染情况进行了形态学观察与PCR鉴定。进行胃蛋白酶消化法的囊蚴形态学观察;PCR引物的设计及特异性鉴定;华支睾吸虫吉林分离株囊蚴和成虫的PCR鉴定。结果显示,3个乡镇分别获得11种淡水鱼,麦穗鱼、泥鳅、黑鱼、老头鱼、鲫鱼、鲶鱼、嘎牙子、白鲢、虾、白鱼、船钉鱼平均每克囊蚴感染量依次为142.16、0.47、0.05、0.38、0.09、0.14、0.32、0.07、0.42、10.23、39.3个,其中麦穗鱼感染量最高。华支睾吸虫吉林分离株18SRNA的PCR扩增片段与中国广西分离株同源性为98%。     

淡水鱼虾华支睾吸虫囊蚴感染情况调查

采集吉林省白城地区镇赉县周边6个鱼塘的各种鱼类,用直接压片镜检法和人工消化法分别对采集回来的麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况进行统计调查,结果表明,感染率最高、感染强度最大的鱼塘是四方坨六分场。随即对四方坨六分场鱼塘中各种鱼类华支睾吸虫囊蚴感染情况也采用同样方法进行调查,结果显示,感染率最高的是麦穗鱼、银飘鱼、尖头鱥,均为100%;其次是细鳞鱼,为80%;其他种类的鱼虾均未检测到有华支睾吸虫囊蚴寄生。     

Differentiation of hamster liver oval cell following Clonorchis sinensis infection

Oval cells which appear in the liver after hepatic injuries are suspected to be progenitor cells for both hepatocytes and bile duct cells. Oval cell isolated from the livers of the hamsters treated with diethylnitrosamine and 2-acetylaminofluorene and infected with Clonorchis sinensis (CS). cultured for 2 weeks and evaluated for differentiation and plasticity by electron microscopy and immunohistochemistry. In the CS-uninfected group, glycogen granules and peroxisomes were noted in the cells that were cultured for 2 weeks. Starting at 1 week postculture, immunoreactivity of the cells to cytokeratin 19 markedly decreased but that to albumin and alpha-fetoprotein gradually increased. This means that oval cells isolated from hamsters that were not infected with CS differentiated toward hepatocyte lineage. However, in the CS-infected group, cultured cells contained numerous rough endoplasmic reticulum and showed immunoreactivity that was generally in reverse to that of CS-uninfected group, meaning that cells isolated following CS infection were primed by CS and differentiated toward bile duct cell lineage. The results of this study suggested that oval cells are indeed bipolar progenitor cells for hepatocytes and bile duct cells and can differentiate toward either lineage depending upon the priming factor.     

犬源华支睾吸虫28ku谷胱甘肽S-转移酶的原核表达与反应原性分析

本研究提取犬源华支睾吸虫总RNA,应用RT-RCR技术扩增28 ku谷胱甘肽S-转移酶(Cs28GST)编码基因,PCR产物经T/A克隆后,亚克隆入pET一30a(+)原核表达载体,构建重组质粒pET-Cs28GST,转化大肠埃希茵BL21(DE3),异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;表达产物经十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹分析和鉴定,研究结果显示犬源Cs28GST编码区含有639个碱基,编码212个氨基酸残基,表达的蛋白以包涵体形式存在,大小约为30.6 ku,可被自然感染华支睾吸虫病犬的阳性血清识别,证明Cs28GST基因可在原核表达系统中高效表达并具有反应原性.     

东北地区华支睾吸虫ITS1基因序列分析

为研究我国东北地区华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)ITS1基因的变异情况及多态性,本研究以采自宾县、大庆、海伦、双城、泰来、同江和长春7个地区的华支睾吸虫为研究对象,PCR扩增ITS1基因,并与GenBank登录的麝猫后睾吸虫、猫后睾属吸虫、东方次睾吸虫、广西株华支睾吸虫、沈阳株华支睾吸虫和韩国株华支睾吸虫的ITS1基因进行比对分析.结果表明,各地区华支睾吸虫样品ITS1基因大小均为661bp,同源性在99.4%～100%之间.构建的系统发生树显示,分支情况与地区距离呈正相关,广西株与其它地区华支睾吸虫所属分支相隔较远,韩国株与东北地区各株相隔较近,海伦株与泰来株,大庆株与沈阳株,长春株与同江株,双城株与宾县株分别位于同一分支.结果显示,ITS1片段除了可作为遗传标记用以鉴定华支睾吸虫科内属间遗传关系,还可以区分属下种间的遗传关系.     

华支睾吸虫γ-谷氨酰转移酶7基因的原核表达及反应原性分析

γ-谷氨酰转移酶7(GGT7)是华支睾吸虫生长发育的各个时期都存在且高表达的蛋白,为探索其作为诊断抗原的潜能,依据GenBank中华支睾吸虫GGT7基因序列,设计了特异性引物,并构建了 pET-32a-GGT7重组表达质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,进行蛋白表达和反应原性分析.生物分子信息学分析显...     

绵羊附红细胞体人工感染小鼠模型的建立

分别用绵羊附红细胞体自然感染病羊的全血及分离纯化的绵羊附红细胞体对小白鼠进行攻毒,以建立绵羊附红细胞体人工感染小鼠模型。通过攻毒后症状观察、血液涂片镜检和绵羊附红细胞体特异性PCR检测法,对建立的模型进行评价。结果显示,各试验组小鼠人工感染后3~6 d,血液中均可检测到绵羊附红细胞体,而对照组小鼠未出现异常症状,且血液附红细胞体检查结果为阴性。该研究成功地构建了绵羊附红细胞体小白鼠感染模型,创建的模型可用于附红细胞体的生物学特性、致病机制、药物筛选等方面的研究。     

粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

华支睾吸虫病又称肝吸虫病,是由华支睾吸虫寄生在人或多种动物胆管内所引起的一种人兽共患病.目前,华支睾吸虫的分离鉴定主要集中在成虫或囊蚴,对虫卵的研究甚少.采用分子生物学方法成功建立了感染人粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取方法及华支睾吸虫基因片段PCR检测方法,同时对PCR反应条件进行优化,为从分子水平上检测华支睾吸虫虫卵提供科学依据.