茶树愈伤组织诱导和组织培养

茶树愈伤组织诱导培养中,外植体类型、培养基种类、激素对愈伤组织的诱导均有影响。通过对培养条件的优化,得到了愈伤组织生长的适宜培养基：MS 2,4-D 1．0 mg/L NAA 1．0 mg/L 6-BA 0．5 mg/L。同时测定了愈伤组织在45 d内的生长曲线,在培养的第39 d,愈伤组织生长可达到最大值,其鲜重最大增殖倍数为4．14倍。     

茶树愈伤诱导及不同儿茶素含量细胞系筛选

茶树组织培养是开展茶树次生代谢及调控研究重要的研究平台。在建立茶树愈伤组织培养体系的基础上,开展了茶树含不同儿茶素含量的细胞系筛选方法的研究。结果表明,在H、S和B 3种诱导培养基中,只有B培养基适合于诱导生长迅速、组织疏松、质地均一且具有一定儿茶素合成能力的愈伤组织。从外植体方面考虑,种子诱导出的愈伤组织具有较强的植株再生能力;幼茎和叶片诱导出的愈伤组织,其生长速度快、组织疏松,但再生能力弱。在此基础上,采用目视法和二分法,结合HPLC分析,对B培养基诱导的细胞系“yunjing63Y”进行了筛选,得到含不同儿茶素含量的细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”。分析结果显示,细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”的儿茶素组分与鲜叶相似,且二者儿茶素含量（干重）差异较大,前者为7.77 mg·g^-1,后者为0.13 mg·g^-1。     

茶树花药愈伤组织诱导及增殖研究

以茶树花药为外植体,以MS培养基为基本培养基,探究适合花药愈伤组织诱导的花药发育时期,不同光照时间对花药愈伤组织诱导的影响,不同植物生长调节物质对花药愈伤组织诱导及增殖的影响,为建立茶树组织培养体系提供依据。研究结果表明：利于花药愈伤组织的形成的处于单核中期的花蕾直径在0.7～0.8 cm,黑暗条件下较12 h/d光照条件下茶树愈伤组织的诱导率高,茶树花药经过低温预处理24 h后,在培养基MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.4 mg/L+2,4-D1.0 mg/L上愈伤组织诱导率最高,诱导率为84.6%,茶树花药愈伤组织增殖率最高的培养基为MS+NAA1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L+2,4-D0.2 mg/L。     

茶树愈伤组织诱导

以茶树[Camellia sinensis (L.) O. Ktze.]种子在无菌条件下萌发的根和叶为外植体,探究在MS培养基中不同种类植物生长调节剂对茶树根和叶愈伤组织诱导的影响。结果表明,以幼根为外植体诱导愈伤组织的最适培养基为NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L,诱导率为85.1%;培养基NAA1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L为幼叶诱导愈伤组织的最适培养基,诱导率为87.0%。     

蔗糖对茶树儿茶素生物合成的影响

儿茶素是茶树重要的次生代谢产物,也是茶叶的重要功能物质,具有多种药理活性。因此正确评价茶叶及其制品中儿茶素含量,了解儿茶素生物合成及其调控手段具有重要的意义。利用香草醛盐酸比色法、HPLC等方法,研究蔗糖诱导子处理对茶儿茶素生物合成的影响,并通过qRT-PCR技术分析蔗糖处理对茶树儿茶素生物合成过程中基因表达的影响。结果显示,无论是茶树愈伤组织还是茶树幼苗经蔗糖处理后其儿茶素含量及组分都有所增加,但是高浓度的蔗糖会抑制茶树愈伤组织的生长,特别是在液体培养的早期添加蔗糖。添加适当浓度的蔗糖能增加茶树愈伤组织中非酯型儿茶素C和EC的含量;蔗糖处理后茶树幼苗中非酯型儿茶素EGC和EC含量明显上升,而酯型儿茶素 EGCG相对含量有所下降。qRT-PCR分析显示蔗糖诱导了茶树幼苗中C4H、CHS、CHI、F3H、LAR、ANR、DFR、F3’H、F3’5’H基因表达,其中变化最明显的是F3H,其次是ANR、CHS。这进一步证实了F3H、ANR为茶树儿茶素合成的关键基因。     

亚麻不同阶段愈伤组织的蛋白组分初探

以黑亚14号和Opaline亚麻为试验材料,选取无菌苗、初始愈伤组织、胚性愈伤组织、非胚性愈伤组织、褐化组织5个阶段提取可溶性蛋白,通过对5个时期蛋白质进行SDS-PAGE分析,发现黑亚14号胚性愈伤组织在47ku处有一条特异性条带,Opaline胚性愈伤组织在50ku处有一条特异性条带,这两条特异性条带有可能作为各自的生化标记。     

茶树愈伤组织诱导与共培转化的初步研究

以福鼎大白无性系茶树大田种子胚为材料，切取子叶、胚芽、胚轴和胚根进行培养，诱导形成愈伤组织。选用较致密的愈伤组织切块与带ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因Ｔｉ质粒的根癌农杆菌共培养，通过卡那霉素抗性选择，得到了抗性愈伤组织并得到了芽的分化。抗性愈伤组织的诱导率在５％左右。共培过程中发现茶树愈伤组织能较强烈地促进农杆菌生长，表现在农杆菌在茶树愈伤组织周围的聚结。这可能是由于茶树多酚类含量较高，而通常酚基复合物有利于农杆菌对植物细胞的附着和转化。     

不同因子对甘蓝型油菜愈伤组织诱导影响的分析

探讨了基因型、生长调节剂、外植体和光照等因子对甘蓝型油菜愈伤组织诱导的影响。结果表明，生长调节剂是影响油菜愈伤组织诱导的关键因子，不同基因型愈伤诱导的出愈率差异不显著，不同外植体愈伤诱导的效果不同，同一外植体在不同生长调节剂组合中的诱导效果也不同，光照对愈伤诱导频率影响不明显，但对下胚轴愈伤形成的特征则有影响。     

茶树新品系“1005”儿茶素含量与结构基因关联分析

以茶树新品系“1005”新梢3个不同发育时期的芽头、二叶、四叶为试验材料,用高效液相色谱检测儿茶素含量,高通量测序技术分析结构基因表达差异,应用数据统计分析其儿茶素含量与结构基因表达的关联性.结果表明,茶树新品系“1005”的儿茶素总量与CHI、F3'5'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.339 74、0.716 47、0.467 89、-0.032 61;简单儿茶素含量与CHI、F3 '5'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.568 99、0.498 87、0.704 26、0.491 51;酯型儿茶素含量与CHI、F3'5 'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.160 66、0.598 08、0.250 61、-0.217 38.试验为研究茶树儿茶素生物合成过程的关键结构基因提供了理论基础.     

凤冈锌硒绿茶中7种儿茶素及咖啡因含量特征

采用HPLC方法同时测定了26个凤冈锌硒绿茶样品中7种儿茶素儿茶素(+C)、没食子儿茶素(GC)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG))和咖啡因(CAF)的含量。结果表明,凤冈锌硒绿茶中儿茶素总含量平均值为20.08%,其中EGCG含量最高;儿茶素平均品质指数为556;咖啡因的含量平均值为3.9%。该研究可为凤冈锌硒绿茶品质的进一步研究提供依据。     

不同干燥方式对速溶青砖茶中儿茶素含量及香气成分的影响

以湖北特色青砖茶为原料,经浸提、过滤、浓缩之后,研究热风干燥、真空冷冻干燥、离心喷雾干燥对速溶青砖茶中儿茶素含量及香气成分的影响。HPLC检测分析结果显示,速溶青砖茶粉相比原料,儿茶素及咖啡碱成分都有明显增加,其中真空冷冻干燥和离心喷雾干燥粉中儿茶素含量差异不大,但都明显高于热风干燥粉;GA、GC、EGC、C、Caf、EGCG和EC七种有效成分,真空冷冻干燥粉中含量较高;GCG、ECG和CG三种有效成分,离心喷雾干燥粉中含量较高。GC-MS检测分析结果显示,青砖茶原料、热风干燥粉、离心喷雾干燥粉和真空冷冻干燥粉各鉴定出33、19、39和29种挥发性香气成分,离心喷雾干燥对于速溶茶中的香气成分有更好的保留和增加效果,并且减少了部分对风味有反作用的物质。     

绿茶多酚和儿茶素提取与原料品质关系的研究

根据试验室研究和工厂大生产中原料收购的多年榆测结果,对绿茶多酚和儿茶素提取与原料含量进行了系统的统计分析与研究．结果表明,云南人叶种绿茶比小叶种绿茶具有较高的茶多酚和儿茶素总量,且在儿茶素组成上表现为较高的Ecg,EC和DL-C,而小叶种EGCg和EGC含量较高,同一绿毛茶原料筛分不同规格绿副茶、不同茶树品种绿副茶、商山与平地茶旧绿副茶的茶多酚、儿茶素总量、儿茶索组分含量均有明显的差异．由大叶种原料和小叶种原料提制的产品在儿茶素组成上存在差异,人叶种产品表现为较高的Ecg,EC,DL-C和较低的EGCg／ECg而小叶种产品有高含量的EGCg和较高的EGCg/ECg．原料中茶多酚和儿茶素的含量高,制备的产品中相应的成分含量也高,同时产品成本低。     

茶叶中没食子酸、儿茶素类和生物碱的 HPLC检测方法研究

比较 ZorbaxSB-C18与 TSKgelODS-100Z这2种色谱柱对12个组分的分离效果,从洗脱方式、流动相pH 值、柱温与流速等方面优化色谱条件,并对其进行方法学考查以及茶样测定应用,从而建立了一种同时测定茶叶中没食子酸（GA）、8种儿茶素类（GC、EGC、C、EGCG、EC、GCG、ECG、CG）与3种生物碱（可可碱、茶碱、咖啡碱）的高效液相色谱（HPLC）检测方法。确立的最优色谱条件为：采用 TSKgelODS-100Z （4．6mm×150mm,5μm）色谱柱,流动相为2‰甲酸水溶液（A 相）和甲醇（B相）,洗脱方式为83％A （0 min）→75％A （5min）→73％A （7min）→58％A （16min）→83％A （18min）,柱温为40℃,流速为1．0mL ·min－1,检测波长为280nm。茶叶中各组分回归方程的相关系数均在0．9990以上,保留时间与峰面积的精密度RSD 分别小于0．105％与4．076％,加标回收率在97．767％～104．766％。该方法具有良好的线性关系、精密度和回收率,对待测组分的分离效果好,适用于茶叶中没食子酸、儿茶素类及生物碱含量的准确测定。     

茶树根愈伤组织及发状根诱导的研究

为了获得茶树发状根，生产茶叶中的有用物质，以大田茶树的根为材料，在离体培养下对其诱导发状根．结果表明，从茶树根愈伤组织中诱导出的发状根具有生长快、无向地性、密生白色根毛和较强的分枝能力．发状根分枝，存在直接分枝和在发状根上出现瘤状突起后在其附近发生侧根2种类型．发状根及其愈伤组织轮换在不同组分的培养基上继代培养，对发状根的分化与增殖有明显的促进作用．根外植体在本研究的所有培养基上都诱导出了愈伤组织，不同品种的根外植体愈伤组织诱导率存在明显差异．     

制备型逆流色谱分离绿茶提取物中儿茶素单体

为了进一步研究儿茶素的作用机理，对自制的制备型逆流色谱分离纯化绿茶提取物中多种儿茶素单体的技术进行了研究，采用两组溶剂系统，一组是石油醚-乙酸乙酯-水(0．2：1：2)；另一组是正丁醇-乙酸乙酯-水(0．2；1：2)系统，每次实验进样量为4g绿茶提取物，用前一组溶剂系统，表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)得到了很好的分离，每一种单体的纯度达到了98％，其中ECGC达到99％；用后一组溶剂系统，表没食子儿茶素(EGC)、儿茶素(士C)得到了分离，纯度达到92％。     

单宁酶降低速溶绿茶中酯型儿茶素含量的研究

酯型儿茶素是速溶茶苦涩味的主体成分,其存在导致所应用产品口感苦涩,难以满足市场消费者的口感需求。单宁酶可降解茶叶中的酯型儿茶素组分,其在速溶茶加工中的应用值得关注。通过单宁酶对不同浓度速溶绿茶溶液的酯型儿茶素降解效果、单位单宁酶的EGCG降解量以及在速溶绿茶加工中的应用,结果表明,速溶绿茶溶液折光度为2.35时,单宁酶酯型儿茶素降解效果最好,单位单宁酶EGCG降解量可达6.70mg·mg-1。应用于速溶绿茶加工时,单宁酶添加量以原料的3‰为宜,先提取分离后酶解,可获得口感醇和的速溶茶粉,茶多酚及儿茶素含量相较于热水提取基本不变。     

3类茶中水溶性多糖及蛋白质的含量分析

[目的]比较分析绿茶中的西湖龙井和碧螺春、红茶中的祈门红茶和立顿红茶以及普洱茶的云南特级地方标准样和临沧普洱茶的水溶性多糖和蛋白质含量。[方法]茶叶样品经沸水浸提和透析等前处理,采用蒽酮-硫酸法和硫酸-咔唑法分别测定茶叶多糖的中性糖和酸性糖含量,用Bradford法分析蛋白质含量。[结果]绿茶的总多糖平均值接近39.58 mg/g,红茶为30.73 mg/g,普洱茶为60.12mg/g,约是红茶的2倍。普洱茶的水溶性蛋白质含量约为18.57 mg/g,高于绿茶和红茶。[结论]3类茶中,均以普洱茶的水溶性多糖及蛋白质含量最高。     

高ECG型儿茶素纯化工艺研究

为探索高ECG(epicatechin gallate)型儿茶素产品的工艺制备途径,以大叶种复合儿茶素为材料,过AB—8树脂上吸附的儿茶素经乙醇解吸后,配套采用溶剂萃取后续工序,可同时制得ECG含量高达67．22％的儿茶素专化产品与含量为88．13％的咖啡因产品．