白细胞介素—3对猪瘟病毒E2基因疫苗免疫增强作用的研究

以昆明系小白鼠为试验动物，观察了白细胞介素－３（ＩＬ－３）对猪瘟病毒Ｅ２囊膜糖蛋白（ＨＣＶ Ｅ２）基因疫苗免疫效果的增强作用。用ＤＮＡ重组技术将ＨＣＶ Ｅ２基因和白小鼠ＩＬ－３基因克隆到ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ质粒，因在两者之间有脑心肌炎病毒（ＥＭＣＶ）的核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）片段，可得到ＨＣＶ Ｅ２抗体效价。结果显示，ＩＬ－３能显著提高ＨＣＶ Ｅ２基因疫苗的免疫效果，表明ＩＬ－３可作为ＨＣＶ Ｅ２     

IBDV VP2/VP243基因DNA疫苗表达质粒的构建与表达

将传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２／ＶＰ２４３插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ中,置于ＣＭＶ启动子的调控之下,构建成ＤＮＡ疫苗表达质粒ｐｃＤＮＡ ＶＰ２和ｐｃＤＮＡ ＶＰ０。分别转染ＣＥＦ细胞后,于２４、４８、７２ｈ取细胞裂解液进行ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测,ｐｃＤＮＡ ＶＰ２于转染后２４ｈ呈阳性反应,４８ｈ表达量高于２４ｈ;ｐｃＤＮＡ ＶＰ０于转染后４８ｈ呈阳性反应     

猪瘟病毒E2基因疫苗表达抗原在小白鼠胫前肌的分布及消长

用免疫组化法检测了猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ｅ２囊膜糖蛋白基因免疫表达的抗原在小白鼠胫前肌中的分布及消长，结果：ＨＣＶ Ｅ２基因疫苗ｐＣＤＳＴ接种小白鼠胫前肌后，表达的Ｅ２抗原主要分布于肌纤维膜上，少量分布于肌纤维间，在细胞浆中很难检测到Ｅ２抗原；用ＨＣＶ基因疫苗免疫后１ｄ，Ｅ２抗原已有表达，１３ｄ抗原达高峰，以后逐渐减少，３０ｄ仪检测到少量抗原。     

化学佐剂对猪瘟病毒E2基因疫苗免疫增强作用的研究

以昆明小白鼠为试验动物，研究了化学佐剂对猪瘟病毒Ｅ１２囊膜糖蛋白（ＨＣＶ Ｅ２）基因疫苗的免疫增强作用；用印度墨水活体染色法筛选促进印度墨水在肌肉中扩散的化学试剂，并用筛选到的化学试剂与ｐＣＤＬａｃＺ混合肌肉注射小白鼠。结果表明，斯苯和甘油能较好的促进ＬａｃＺ基因在小白胫前肌中表达，提示斯苯和甘油可作为基因疫苗的化学佐剂；用斯苯和甘油按比例混合配制ＨＣＶ Ｅ２基因疫苗质粒ｐＣＤＳＴ免疫小白鼠，其抗     

鸡新城疫CS2实验疫苗的生产及鉴定

应用ＳＰＦ鸡胚生产出３批ＣＳ２实验疫苗，疫苗的病毒价≥１０８．５ＥＬＤ５０／ｍｌ。对２月龄小鸡的最低免疫量（ＭＩＤ）为３～３０ＥＬＤ５０。据此，作者们建议对此种小鸡的实用免疫剂量为１０５ＥＬＤ５０。对这３批疫苗的实验结果显示：１０倍的剂量（即１０６ＥＬＤ５０）对鸡不引起任何不正常现象。免疫持续期达１２个月以上。在２～８℃和－１５℃中分别保存９和２４个月效力不变。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究

ＯＲＦ完整的ＩＢＶ类Ｍ４１株Ｓ１基因ｃＤＮＡ插入真核表达质粒ｐＣＩ ＣＭＶ启动子下游我隆位点，构成ｐＣＩＳ１用于１周龄ＳＰＦ雏鸡的ＤＮＡ免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射ｐＣＩＳ１ＤＮＡ１００ｇ，２周后加强免疫一次。二次免疫２周后，代感染ＩＢＶ Ｈ５２株。结果，ＩＢＶ人工感染后第４天气管－泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者，免疫试验组为１／６，而对照组为６／６，鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后临感染前及     

接种La Sota疫苗雏鸡外周器官中CD4+T细胞的来源及其作用

切除胸腺的２日龄雏鸡,接种抗鸡Ｔ细胞表面分子ＣＤ４的单克隆抗体,于１２日龄时以ＬａＳｏｔａ疫苗免疫。然后,在不同的日龄分别用ＦＡＣＳ,ＭＴＴ及间接ＥＬＩＳＡ测定脾脏和外周血中ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞亚类数量,脾Ｔ淋巴细胞转化功能及病毒特异的血清ＩｇＧ抗体的动态变化。     

鸡新城疫(D_(10)株)和减蛋综合征(GC_2株)鸭胚源二联灭活苗免疫效果观察

鸡新城疫（ＮＤ）和减蛋综合征（ＥＤＳ）是危害我国养鸡业的２种重要传染病。目前,本地区已将接种ＮＤ和ＥＤＳ列入蛋鸡群免疫程序,虽然取得了较好的免疫防治效果,但产蛋鸡ＮＤ仍有零量发生。为有效控制该病,简化免疫程序,我们对南京农业大学最新研制的ＮＤ和ＥＤＳ鸭胚源二联灭活苗进行了免疫效果观察,并与江苏另２家科研单位所研制的ＮＤ·ＥＤＳ二联苗作了比较,现报告如下。１　材料与方法１－１　疫苗　鸡新城疫（Ｄ１０株）和减蛋综合征（ＧＣ２株）鸭胚源二联灭活疫苗,由南京农业大学动物医学院用同一鸭胚同时增殖２种病毒法…     

正义和反义Calpastatin cDNA真核表达载体的构建

本研究利用真核表达载体ｐＲＣ／ＲＳＶ，将位于ｐＢＳ－ＳＫ质粒中的ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ以正反两个方向构入载体；经酶切分析，构建的质粒结构正确。所构建质粒ｐＲＣ／ＲＳＶ正义、反义ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ两个表达载体，为进一步转化肌细胞，人为控制Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ基因的表达，从而控制Ｃａｌｐａｉｎ活性，深入研究钙蛋白酶在肌肉发育及肉嫩化中的作用打下基础。     

苏丹草与高粱染色体核型比较研究

采用去壁低渗火焰干燥法对4个苏丹草和6个高粱品种的核型进行比较研究。结果表明,苏丹草和高粱体细胞染色体数均为20(2n=20);苏丹草品种均为1A核型,并具有1对随体染色体,其中1、2号品种的第2对染色体为近中间着丝点染色体,3、4号品种为中间着丝点染色体;高粱品种除5号为1A核型、中间着丝点染色体外,其余的5个品种为2A或2B核型,且都有1或2对近中间着丝点染色体,9号品种还出现1对近顶端着丝点染色体;高粱8、9号品种各观察到1对随体染色体。染色体数量分析表明,第1到第10对染色体长短臂的绝对长度、相对长度以及绝对全长在苏丹草和高粱2类间的差异均不显著(P>0.05)。因此,苏丹草和高粱的遗传差异不在染色体长度上。     

中国少棘蜈蚣与家蚕和野桑蚕肌球蛋白轻链2的结构功能分析比较

从中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)毒腺cDNA文库中克隆的肌球蛋白轻链2(MLC2)基因的cDNA,其开放阅读框为606 bp(GenBank登陆号为FJ262953),编码201个氨基酸,与家蚕(Bombyx mori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的MLC2等长,序列一致性达52%。3种MLC2都包含:1个同位且完整的EF-H功能域和Ca2+结合位,1个N端poly-lys基序及相同的丝氨酸磷酸化修饰位点。三级结构预测显示中国少棘蜈蚣MLC2的三维结构相似于乌贼(Loligo pealei)的同源模型,而家蚕和野桑蚕的则与淡色库蚊(Culexpipiens pallens)的MLC2一样类似于扇贝(Aequipecten irradians)的同源结构。分析结果有助于进一步研究家蚕和野桑蚕MLC2的结构功能及其功能应用。     

青海省海晏县线叶嵩草内生细菌的生物功能鉴定及测定

对线叶嵩草（Kobresia capillifolia）内生细菌部分生物功能进行鉴定及测定;采用组织分离法从青藏高原青海省海西线叶嵩草根部分离出10株内生细菌。结果表明,10株内生细菌均能固氮,2G1和2G10能够产IAA;其中2G2、2G3、2G4、2G5、2G6、2G7、2G8和2G9对指示菌均有拮抗作用,对马铃薯炭疽菌Colletotrlchum coccodes的拮抗作用最强,抑菌率达88.58%。通过培养性状和形态特征,结合16S rDNA序列相似性分析,将2G1和2G10分别鉴定为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis和Bacillus simpix,2G2和2G9鉴定为亲甲基醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus,2G3和2G6鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,2G4和2G5鉴定为云南苏铁芽孢杆菌Bacillus siamensis,2G7和2G8鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。该研究结果为青藏高原极端生境牧草根部内生细菌的多样性及功能菌株的开发提供依据。     

猪胰高血糖素样肽2及其长效化物在大鼠体内的药代动力学研究

本试验旨在研究猪胰高血糖素样肽-2(p[Gly2]GLP-2)、聚乙二醇修饰猪胰高血糖素样肽2(PEG-p[Gly2]GLP-2)和p[Gly2]GLP-2微球在大鼠体内的药代动力学过程,为利用p[Gly2]GLP-2修复断奶仔猪肠道损伤提供参考依据。选取18只280 g左右的雄性SD大鼠,随机分为3组,分别单次皮下注射p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)、PEG-p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)和p[Gly2]GLP-2微球(15 mg/只),定点采血后,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定胰高血糖素样肽-2(GLP-2)的血药浓度。结果表明:1)PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期(t1/2)是p[Gly2]GLP-2的4倍,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)和平均滞留时间(MRT0-t)是p[Gly2]GLP-2的3倍,清除率(CL)是p[Gly2]GLP-2的1/2,两者的达峰浓度(Cm ax)相差不大,PEG-p[Gly2]GLP-2的达峰时间(Tm ax)滞后于p[Gly2]GLP-2。2)p[Gly2]GLP-2微球的达峰时间与p[Gly2]GLP-2、PEG-p[Gly2]GLP-2相差不大,但半衰期为(72.20±6.02)h,平均滞留时间为(90.66±7.41)h。结果提示,经聚乙二醇(PEG)修饰后p[Gly2]GLP-2的药代动力学行为发生了很大的改变,半衰期延长、达峰时间滞后、平均滞留时间延长、血浆清除减慢、生物利用度更高;p[Gly2]GLP-2微球半衰期更长,且持续稳定的释放,操作便利。     

氮磷钾配施对甘草育苗质量的影响

利用“3414”方案进行N、P、K营养液配方设计,在配方营养液浇灌条件下进行甘草育苗质量比较,旨在探寻适宜甘草育苗的施肥配方,为其测土配方施肥和无土栽培育苗提供依据。结果表明,以纯沙石作为育苗基质,在添加Hoagland营养液条件下,不同N、P、K配比营养液对经98%硫酸处理的甘草种子的出苗质量和幼苗生长发育均具有极显著影响。N₂K₂配比下出苗质量均优于空白对照,且随着施磷水平的提高出苗质量呈下降趋势,出苗质量依次为N₂P₀K₂＞N₂P₁K₂＞N₂P₂K₂＞N₂P₃K₂。而出苗活力依次为N₂P₁K₂＞N₂P₀K₂＞N₂P₂K₂＞N₂P₃K₂。N₂P₂K₂和N₂P₁K₂处理均可极显著提高甘草根系活力,为培育壮苗奠定良好基础。单纯缺N、缺K和过量N、P和K肥均不利于甘草出苗和幼苗的生长发育。以上说明在甘草出苗阶段需P量小,但出苗后开始显示其营养效应。从育苗效益和环境保护双重考虑,配方施肥宜采用N₂P₁K₂,即添加80 mg/L NH₄NO₃、89 mg/L KH₂PO₄和298 mg/L KNO₃作为N、P和K营养源,每隔20 d浇1次。需要注意的是浇灌后应及时喷灌适量水,使氨态氮下渗到底部基质,以避免氨的挥发而灼伤幼苗。     

氮磷钾配施对田周地种植桂牧1号杂交象草产量及效益的影响

通过不同的施肥处理方案研究在田周地种植桂牧1号杂交象草Pennisetum purpureum cv.Guimu 1的氮、磷、钾需要量及其最佳配比模式。结果表明,在田周地种植桂牧1号杂交象草,通过合理的氮、磷、钾配方施肥,能够达到良好的生产效果与效益。实测结果以N2P2K2（氮肥414 kg/hm2,磷肥138 kg/hm2,钾肥276 kg/hm2)试验组的产量最高[（256.81±1.18）t/hm2],与其他低水平试验组差异均达到极显著水平(P<0.01);与无肥处理相比,增产率达到16.6%。通过对各处理进行效应模型的配置与分析,得出田周地种植桂牧1号杂交象草的预测最高产量为259 t/hm2,对应施肥量为氮肥414621 kg/hm2、磷肥140 kg/hm2、钾肥204 kg/hm2;预测最佳经济产量为256 t/hm2,对应施肥量为氮肥414 kg/hm2、磷肥140 kg/hm2、钾肥172 kg/hm2。     

猪CPB2基因可变剪接体的克隆及生物信息学研究

本研究旨在克隆猪CPB2基因的不同可变剪接体，预测对应蛋白的功能特性以及研究不同转录本表达特性。以健康状态和体重相同的3头12月龄巴马小型猪为试验动物，通过RT-PCR技术及基因平末端克隆技术扩增猪CPB2基因的CDS区及部分非编码区，利用生物信息学工具预测CPB2编码蛋白的基本生物学特征，利用RT-PCR技术检测CPB2基因在肝、心、肾、皮下脂肪、肠系膜脂肪、股二头肌和背最长肌中的表达特征。以实验室制备的代谢性疾病易感猪为试验动物，利用qRT-PCR技术检测CPB2基因在富营养饮食效应下肝中的表达特征。结果表明，本研究成功克隆出猪CPB2基因的3种可变剪接体（CPB2-1、CPB2-2和CPB2-3），其中CPB2-1与NCBI序列XM_001929146.4相同，CPB2-2和CPB2-3为新发现转录本。与CPB2-1相比，CPB2-2和CPB2-3发生了5'端可变剪接（alternative 5'splice site，A5SS）事件；CPB2-1编码423个氨基酸的酸性不稳定性蛋白，CPB2-2和CPB2-3编码同种281个氨基酸的碱性不稳定性蛋白；与CPB2-1相比，CPB2-2和CPB2-3缺少信号肽和激活肽，但具有相同羧肽酶活性结构域；CPB2基因3种转录本仅在肝和肾中表达，其他组织无表达；在富营养饮食诱导的代谢性疾病易感猪的肝中，CPB2-1（P<0.01）和CPB2-2（P<0.01）显著降低，CPB2-3未显著降低（P=0.14）。综上，本研究成功在肝中克隆了猪CPB2的3种可变剪接体，推测CPB2-1是行使纤溶与凝血等生理功能的正常转录本；新发现转录本CPB2-2和CPB2-3被留在肝和肾中可能具有羧肽酶活性和重要生理学功能；CPB2基因可能与代谢相关的慢性肝病存在一定联系。     

Infectivity of porcine circovirus type 2 DNA in semen from experimentally-infected boars

Porcine circovirus type 2 (PCV2) is an economically important pathogen. It has been demonstrated that PCV2 DNA can be detected in boar semen by PCR; however, the biological relevance of this is unknown. The objectives of this study were to determine if semen positive for PCV2 DNA is infectious (1) in a swine bioassay, or (2) when used for artificial insemination. For the first objective, 4-week-old pigs were inoculated intraperitoneally with PCV2 DNA-negative (bioassay-control; n = 3), PCV2a DNA-positive (bioassay-PCV2a; n = 3), or PCV2b DNA-positive (bioassay-PCV2b; n = 3) raw semen, or PCV2 live virus (bioassay-positive; n = 3), respectively. Pigs inoculated with PCV2 DNA-positive semen and PCV2 live virus became viremic and developed anti-PCV2 antibodies indicating that the PCV2 DNA present in semen was infectious. For the second objective, three Landrace gilts were inseminated with PCV2 DNA-negative semen (gilts-controls) from experimentally-infected boars, and six gilts were artificially inseminated with semen positive for PCV2a DNA (gilts-PCV2a; n = 3) or PCV2b DNA (gilts-PCV2b; n = 3). Serum samples collected from the gilts in all groups remained negative for anti-PCV2 antibodies for the duration of the experiment. In addition, fetal serum samples from all 105-day-gestation fetuses were negative for anti-PCV2 antibodies or PCV2 DNA. Under the conditions of this study, PCV2 DNA-positive semen was not infectious when used to artificially inseminate gilts; however, it was demonstrated to be infectious in a swine bioassay model and therefore is a potential means of PCV2 transmission amongst swine herds.     

Comparison of chemotherapeutic drug resistance in cells transfected with canine ABCG2 or feline ABCG2

ABCG2 (ATP binding cassette subfamily G, member 2) mediates resistance to a variety of cytotoxic agents. Although human ABCG2 is well characterized, the function of canine ABCG2 has not been studied previously. Feline ABCG2 has an amino acid substitution in the adenosine triphosphate‐binding domain that decreases its transport capacity relative to human ABCG2. Our goal was to compare canine ABCG2‐mediated chemotherapeutic drug resistance to feline ABCG2‐mediated chemotherapeutic drug resistance. HEK‐293 cells stably transfected with plasmid containing canine ABCG2, feline ABCG2 or no ABCG2 were exposed to carboplatin, doxorubicin, mitoxantrone, toceranib or vincristine, and cell survival was subsequently determined. Canine ABCG2 conferred a greater degree of chemotherapy resistance than feline ABCG2 for mitoxantrone. Neither canine nor feline ABCG2 conferred resistance to doxorubicin, vincristine or toceranib. Canine, but not feline, ABCG2 conferred resistance to carboplatin, a drug that is not reported to be a substrate for ABCG2 in other species.