间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。     

菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验

菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验王在时（中国兽药监察所北京，１０００８１）受山东曲阜圣亚兽药有限公司和北京中龙生物科技总公司的委托，为检验两公司联合出品的菌毒王消毒剂对猪细小病毒（简称ＰＰＶ）和猪瘟病毒（简称ＨＣＶ）的灭活效果，根据农业部...     

间接Dot—ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原体对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

斑点酶联免疫吸附试验检测小鹅瘟病毒的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）能检出少至４．８８３ｎｇ／ｍｌ的小鹅瘟抗原。与鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、雏鸭病毒性肝炎病毒（ＤＶＨＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）等对照，病毒不发生交叉反应。能从人工感染１２小时后的雏鹅组织中检出小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）。对１８只人工感染死的雏鹅的检同率为１００％，其中对不同组织的阳性检出率为：肝脏、肾脏、空肠为１００％，心脏、脾脏、十二指肠为９４．４％，回肠８８．９     

猪细小病毒N株弱毒苗的免疫效果观察

经调查，广西猪群普遍存在猪细小病毒感染［１］。为了有效防制该病，本研究室已研制出能预防猪细小病毒感染的弱毒疫苗（简称ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗）。该弱毒苗用于预防猪细小病毒引起的繁殖失败，具有良好的免疫原性和安全性［２］。我们用四批ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗对广西多个流行该病的猪场的后备母猪进行免疫，取得了良好的效果，现将结果报告如下。１　材料和方法１．１　ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗本实验室研制，种毒按蒋玉雯等［２］的方法进行培养。１．２　试验动物５００克左右健康青年豚鼠，并经ＰＰＶ－ＨＩ检测为阴性。１．３　猪细小病毒…     

应用ELISA双抗体夹心法检测＼猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最侍工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检 出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．２％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。     

用豚鼠检测猪细小病毒N株弱毒苗的血凝抑制抗体

由于猪细小病毒（ＰＰＶ）血清型单一及其高免疫原性,使得疫苗接种成为控制ＰＰＶ感染行之有效的方法。但检测ＰＰＶ疫苗的效力要求使用ＰＰＶ血清阴性的母猪,不仅成本高,而且管理和操作费时费力,同时不容易找到ＰＰＶ血清阴性的母猪,为了解决这一问题,国外曾试图寻找一种实验动物模型作为ＰＰＶ疫苗效力检测。Ｊｏｏ等［１］曾报道用豚鼠、兔和猪对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应,证明豚鼠和兔对ＰＰＶ疫苗的血清学反应与猪相似,提供了用实验动物作为ＰＰＶ疫苗效力试验的可能性。国内潘雪珠等［２］也证明了豚鼠对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应…     

聚合酶链反应检测猪细小病毒的研究

本研究成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术。以１６个核苷酸引物对首次完成了ＰＰＶＤＮＡ结构蛋白ＶＰ１编码区２２８ｂｐ片段的扩增。同样数目的另一引物对，也成功扩增了Ｖｐ２编码区１５８ｂｐＤＮＡ片段。ＰＰＶＢＭ－１株与其它国内分离株（广西株、天津株和哈尔滨株）均出现相同扩增结果。琼脂糖凝胶电泳显示了特异条带（ＶＰ１２２８ｂｐ．Ｖｐ２１５８ｂｐ），而伪狂犬病病毒、犬细小病毒均未扩增，表明了本方法的特异性。同时，限制性内切酶分析（Ｖｐ１２２８ｂｐ及Ｖｐ２１５８ｂｐ分别含单一ＰｖｕⅡ、ＥｃｏＲⅠ位点），也证实了特异性。本方法敏感性高，可检出１０ｆｇ模板ＤＮＡ。既可作样品的快速检测，又能检查细胞系的污染。具有特异、简便、快速的优点。     

猪细小病毒灭活苗免疫豚鼠和猪抗体反应比较

猪细小病毒（ＰＰＶ）灭活苗对预防由ＰＰＶ引起的母猪繁殖障碍效果良好，Ｊｏｏ等（１９８４）报告了灭活苗接种豚鼠可产生抗体反应．本研究旨在观察豚鼠接种ＰＰＶ灭活苗后的抗体产生规律及特异性．我们用１３批ＰＰＶ灭活苗免疫３９只ＰＰＶ阴性豚鼠和猪，每批次各３只，免疫后阳性率１００％，平均ＨＩ价豚鼠为８２０～１２８０，猪为２０～３２０。     

重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究

利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于 PRRS病毒血清抗体检测的新方法     

猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立

试验旨在建立能同时检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和猪源脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)的二重PCR检测方法。根据GenBank中PPV VP2基因和EMCV 3D基因序列,利用Premier 5.0软件设计出PPV和EMCV的特异性引物。通过优化反应条件,建立了能同时特异性检测PPV和EMCV的二重PCR方法,PPV和EMCV的敏感性检测极限分别达7.62和1.22×10^-1 pg/μL。通过对临床36份样品的检测结果表明,该二重PCR检测方法敏感、特异,适合于临床检测应用。     

Porcine Parvovirus infection: review and diagnosis in a sow herd with reproductive failure

In a commercial swine herd a rise was noted during the summer of 1981 in the number of repeat breeders, mostly four to eight weeks after serving. During the autumn there was a decrease in the litter size at birth and an increase in the number of stillborn and mummified piglets. Several gilts and sows showed a seroconversion against Porcine Parvovirus (PPV), determined by the Haemagglutination Inhibition test (HI-test). Characteristic pathological findings were seen in some maturely stillborn and neonatally decreased piglets (up to an age of 28 days); hepatic congestion and necrosis, accummulation of fluid in body cavities, myocarditis, and encephalitis were the most prominent features. Serological tests for antibodies in blood samples of one sow and body fluids of two stillborn piglets were suggestive of Porcine Parvovirus as the aetiological agent.     

Clinical papers

In a commercial swine herd a rise was noted during the summer of 1981 in the number of repeat breeders, mostly four to eight weeks after serving. During the autumn there was a decrease in the litter size at birth and an increase in the number of stillborn and mummified piglets. Several gilts and sows showed a seroconversion against Porcine Parvovirus (PPV), determined by the Haemagglutination Inhibition lest (HI‐test). Characteristic pathological findings were seen in some maturely stillborn and neonatally deceased piglets (up to an age of 28 days); hepatic congestion and necrosis, accummulation of fluid in body cavities, myocarditis, and encephalitis were the most Prominent features. Serological tests for antibodies in blood samples of one sow and body fluids of two stillborn piglets were suggestive of Porcine Parvovirus as the aetiological agent.     

猪细小病毒感染诊断方法研究进展

猪细小病毒感染是由猪细小病毒引起的一种病毒性传染病。其疾病的传播是由易感母猪通过胎盘传染给胎儿 ,导致母猪流产 ,产出死胎、木乃伊胎或弱子 ,给养猪业造成巨大的经济损失。为了减少该病的发生 ,广大兽医工作者建立了许多用于检测和诊断该病的方法 ,如病毒分离培养、对流免疫电泳试验、血清中和试验、酶联免疫吸附试验、银加强胶体金技术及聚合酶链反应等。文章对其研究进展作了较全面地综述     

检测PRV野毒株、PCV-2及PPV多重PCR方法的建立及初步应用

根据GenBank中的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2、猪细小病毒(PPV)VP2基因序列,设计了3对引物,成功建立了检测PRV野毒株、PCV-2和PPV的多重PCR诊断方法,扩增产物分别为288 bp、419 bp、681 bp。敏感性、特异性试验结果显示,该PCR对3种病毒的最低核酸检测量分别为PRV 48.2 pg/L、PCV-2 36.7 pg/L、PPV 0.25 ng/L,而PRV(gE基因缺失株)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。对87份自然感染病猪样品的检测结果表明,该多重PCR检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床PRV野毒株和gE基因缺失疫苗株、PCV-2和PPV的检测。     

羊附红细胞体双抗体夹心ELISA诊断方法的建立

为快速准确诊断和检测羊附红细胞体病,及时采取防治措施,建立了检测羊附红细胞体抗原的双抗夹心ELISA诊断方法。选取规模化养殖场羊,镜检附红细胞体红细胞感染率> 90%,无菌采取血液,分离羊附红细胞体抗原,制备纯化兔抗羊附红细胞体抗体,应用辣根过氧化物酶标记抗体,进行双抗体夹心ELISA试验。试验结果表明,双抗体夹心ELISA方法的最佳工作条件为:抗体最佳包被量为82.91 μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶400,抗原最低检出量为7.81 μg/mL;而且与支原体、大肠杆菌、葡萄球菌以及牛、猪、兔附红细胞体均不出现交叉反应,表明该方法具有良好的特异性,可用于羊附红细胞体病的诊断和群体检测。     

四川省部分种畜(猪)场猪细小病毒病血清抗体的检测

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。以胚胎和胎儿感染及死亡为特征。实践中，本病以预防为主，采用猪细小病毒疫苗免疫。采用乳胶凝集抗原，对我省部分种畜（猪）场的猪血清进行了猪细小病毒病血清抗体检测，结果显示，平均阳性率为56％，其中阳性率最高达93％，最低为14．71％。     

基于重组NS1蛋白猪细小病毒野毒抗体间接ELISA诊断方法的建立与应用

本研究以原核表达的重组NS1蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒5种常见猪病病毒的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12800;批内、批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;与血凝抑制试验(HI)符合率为100%。本研究建立的PPV NS1-ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为PPV的野毒抗体检测及PPV流行病学调查等快速诊断提供了一种技术手段。     

猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立

试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）的重组酶聚合酶（recombinase polymerase amplification,RPA）检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPV VP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30 min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPV-VP2作为模板,RPA的检测限为10²拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率（86.9%）,明显高于普通PCR的阳性检出率（66.7%）。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。