猪细小病毒病的研究进展

PPV是一种小DNA病毒．是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。该病毒在世界范围内广泛存在并呈地方性流行,给生猪的繁殖、发展带来了巨大的经济损失．严重影响着养猪业的发展。笔者从病毒学着手,对猪细小病毒进行了系统的论述,并提出了相应的诊治技术及防疫措施。     

蝴蝶兰病毒病研究进展及防治对策综述

蝴蝶兰病毒病严重影响蝴蝶兰产业的发展。介绍了近年来危害蝴蝶兰的病毒,以及其病原性质和分子生物学研究方面的最新进展,并提出了相应的防治措施。     

大豆花叶病毒病及其防治

介绍了大豆花叶病毒病的分布与危害,症状、病原、发病条件,并根据病毒病原特征及已知流行因素,提出了防治方法。     

小菜蛾生物防治研究进展

综述了小菜蛾生物防治的最新研究进展并展望了其发展前景。目前应用于小菜蛾防治的生物杀虫剂主要有:细菌、真菌、病毒和线虫。细菌性杀虫剂是目前最有潜力取代化学杀虫剂的微生物杀虫剂,应用最多的是苏云金杆菌制剂。真菌是最重要的昆虫病原微生物,其中以白僵菌研究的最多。病毒杀虫剂主要以核型多角体病毒(NPV)效果较好。昆虫病原线虫是新型的杀虫剂,以小卷蛾线虫和异小杆线虫防治效果较好。     

鳜鱼传染性脾肾坏死病毒病研究初探

正1鳜鱼传染性脾肾坏死病毒病鳜鱼是我国重要名特优鱼类之一,随着人们对名贵水产品需求不断增加,鳜鱼养殖业不断发展,产值逐年上升。1994年在广东省暴发并逐渐传播开来鳜鱼病毒病,成为限制鳜鱼养殖业发展的制约因素,至今仍深度影响鳜鱼产业。1997年吴淑勤等通过电镜发现了病鳜脾脏中的病毒颗粒,病毒直径约150nm,并证明该病毒能引起鳜鱼大规模死亡。1998年何建国等通过回归感染进一步证明了该病毒的病原性,并通过组织学     

一起规模猪场蓝耳、圆环病毒与多病原混合感染的诊断及整体控制措施

通过对南宁某规模猪场蓝耳、圆环病毒与多病原混合感染引起的疫情的病原及抗体水平检测与分析,对蓝耳、圆环病毒与多病原混合感染引起的疫情做出诊断并提出猪场整体控制措施。经过临床症状、病理剖解、细菌分离鉴定及抗原、抗体检测对疫情原因进行分析确诊。结果表明,本疫情主要是由蓝耳、圆环病毒与支原体、金黄色葡萄球菌、弓形虫等多病原引起的混合感染,猪场免疫程序存在一定缺陷。【结论】本规模猪场疫情复杂,进行疫病防治时不应仅针对某个病原进行,应从猪场整体考虑制定综合防治措施。     

猪圆环病毒病原生物学研究进展

猪圆环病毒是单链环状DNA病毒,有2种不同的血清型:猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型.现有研究表明PCV1暂无致病性,PCV2则被认为是引起猪圆环病毒病的主要病原.许多国家养猪业的经济效益因此受到重大的影响.对PCV病原生物学的研究进展进行了综述.     

猪圆环病毒的病原学与诊断

介绍了PMWS的病原——猪圆环病毒,并提出了诊断手段和防治措施。     

猪病毒性腹泻病的诊断与防治体会

近期,猪病毒性腹泻病在各地时有发生,并呈蔓延趋势。其主要病原为传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒和轮状病毒。但在生产中,以上病原往往和其他病原混合感染引起呕吐、腹泻等症状,临床上很难确诊,且一旦发病往往波及全群,造成较大的经     

土壤病原微生物检测技术研究进展

病原微生物如细菌、病毒、真菌等广泛存在于土壤环境中,其严重威胁着全球公共卫生安全。发展病原微生物快速检测技术,对于减少病原菌扩散传播、防控传染性疾病、维护生物安全具有重要意义。本文对病原微生物检测技术的最新研究进展进行了综述,包括显色培养技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、分子生物学技术、拉曼光谱技术、流式细胞技术和生物传感器等,并对其原理、应用及优缺点进行了全面比较。最后,对病原微生物检测技术的未来发展提出展望,旨在促进土壤环境病原微生物的快速检测和生物风险防控。     

贵阳地区新发生猪传染病的血清学检测

采用血清学方法对贵阳地区部分种猪场、规模饲养场及农村散养户猪群分别进行PPV、PRV、PRRS、PCV及APP抗体水平监测。以乳胶凝集试验检测PPV抗体阳性率为0%（0/160）;以间接ELISA检测PCV和PRRS的抗体阳性率分别为14%（28/200）和0.62%（1/160）;以竞争ELISA检测PRV的gpI抗体阳性率为19.14%（36/188）;以间接血凝试验检测APP的抗体阳性率为19.14%（36/188）。结果表明,PPV和PRRS似乎不是引起贵阳地区猪繁殖障碍的主要原因,而PRV和APP在非免疫猪群中的抗体阳性率较高,应引起该地区养猪业的高度重视。     

贵州省几种猪繁殖障碍性疫病的血清学调查

采用乳胶凝集试验和间接ELISA试验,分别对贵州省部分地区种猪场和规模场猪群进行猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒及猪Ⅱ型圆环病毒抗体水平检测。结果:免疫猪群中猪细小病毒感染、猪伪狂犬病及猪繁殖障碍与呼吸综合征抗体阳性率分别为81.6%(124/152)、84.0%(221/263)和62.7%(406/648);非免疫猪群中猪细小病毒感染、猪伪狂犬病、猪繁殖障碍与呼吸综合征及猪Ⅱ型圆环病毒感染抗体阳性率分别为17.6%(79/449)、13.8%(61/442)、5.4%(19/352)和15.9%(83/519)。表明,猪细小病毒感染、猪伪狂犬病免疫效果比较理想,贵州省猪群中可能存在上述4种疫病的感染,应当引起养猪业的高度重视。     

猪细小病毒N株免疫期测定

用PPV—N株制备成弱毒疫苗,在配种前1个月接种PPV HI抗体阴性的后备母猪,接种2周后检测PPV HI抗体均达到1：256以上。当怀孕到40d时用PPV强毒攻击,攻毒后40d剖杀的2头怀孕母猪其胎儿正常健活,胎儿心血未检测到PPV HI抗体,胎儿脏器未分离到病毒;自然分娩的2头母猪,其仔猪健活,未吃初乳仔猪PPV HI抗体阴性,仔猪脏器未分离到病毒;而强毒攻击的对照猪均出现不同程度的死胎,并从未吃初乳仔猪检测到PPV HI抗体和从死胎儿肺回收到病毒。按上述方法连续观察到第3胎（免疫后15个月）,证明免疫母猪怀孕到第3胎仍能抵抗PPV强毒攻击,说明PPV—N株对母猪的免疫期达1年以上。     

育肥猪血清中猪细小病毒16WS株的分离与鉴定

从一育肥猪早、中期生产状况差的猪场收集猪血清214份,采用猪细小病毒(PPV)特异性检测引物进行PCR检测,选取1份阳性血清接种猪睾丸细胞(ST)进行PPV分离、部分生物学特性研究,以及PPV部分基因序列分析。结果表明:在15、16、17、18、22周龄猪血清中均检测到PPV,检测阳性率分别为10%、40%、20%、15.4%、9%,而从2~14及24周龄的猪血清中没有检测到PPV;病毒分离和部分生物学特性研究结果表明,从血清中分离的PPV在ST细胞上传到第5代能够出现较稳定的细胞病变(CPE),病毒血凝效价为28;PPV部分基因序列与GenBank收录的PPV毒株序列同源性在98%以上,其中与2012年西北农林科技大学时乐[1]分离的YL毒株同源性高达99.1%。以上结果证实本研究分离到PPV,且说明PPV在采样猪场的保育后期和育肥前、中期猪血清中具有较高的阳性率。     

公猪精液CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV的PCR检测

应用PCR技术对采自广西6市12个种猪场的441头(份)公猪精液进行CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV的带毒情况检测,结果有75%的猪场公猪精液存在带毒现象,被CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV污染的精液样品阳性率分别为10.20%、2.04%、7.48%、0.45%和0.45%,总阳性率为20.63%,表明精液传播病毒仍然是当前母猪繁殖障碍的重要原因之一,因此,要加强对公猪精液的管理和公猪疫病的控制与净化,从源头控制传染源。     

猪细小病毒NS1基因和VP2基因的克隆与序列分析

根据GeneBank 上发表的猪细小病毒(PPV)的基因组序列,分别设计扩增非结构蛋白NS1基因和结构蛋白VP2基因的特异性引物,采用PCR方法扩增PPV泰安株(PPV-TA)NS1基因和VP2基因.结果表明,PPV-TA NS1基因长1989 bp,编码662个氨基酸,与参考PPV NS1基因核苷酸同源性在98.3 %～99.9 %之间.PPV-TA NS1蛋白有3个糖基化位点分别是356NIS、446NFS、513NLT,除PPV Tomau/1/02在356位缺失了一个糖基化位点之外,PPV-TA与其他PPV参考毒株一致;这表明不同毒株NS1蛋白调节功能可能有差异.PPV-TA NS1蛋白的潜在磷酸化位点是Thr435和Ser473,与PPV参考毒株相同.NS1基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV china亲缘关系最近.PPV-TA VP2基因长1740 bp,编码579个氨基酸,与PPV参考毒株VP2基因核苷酸同源性在98.3 %～99.8 %之间.PPV-TA VP2蛋白的378D、383H、436S氨基酸残基决定了PPV的组织嗜性,与PPV-NADL-2和PPV-china相同,这表明这3个毒株的组织嗜性是一致的.但与其他PPV参考毒株有差异,这表明不同毒株在动物体内的组织分布是有差别的.PPV-TA VP2蛋白有9个线性抗原位点,与PPV NADL-2和PPV china的线性抗原位点是一致的,这表明具有相同的抗原特性.VP2基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV NADL-2亲缘关系较近.     

Quantitative analysis of the interaction of heterologous viruses with Plum pox virus in C5 HoneySweet transgenic plums

Stone fruits are an important crop in most parts of the world and are heavily challenged by several viruses including Plum pox virus(PPV), Prune dwarf virus(PDV), Prunus necrotic ringspot virus(PNRSV), and Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV). We validated the PPV resistance in C5 plum plants(commercially known as Honey Sweet) grown in the Czech Republic for more than 16 years in a field trial experiment under natural environmental conditions. We quantified single(PPV-Rec) and mixed viruses(PPV-Rec+ACLSV, PPV-Rec+PDV and PPV-Rec+ACLSV+PDV) in C5 transgenic plums inoculated for the period 2016 to 2018. The accumulation of PPV-Rec was high(～5.43 E+05 copies) compared with that of ACLSV(～8.70 E+04 copies) in the inoculated graft of C5 transgenic plants. Leaves close to the inoculum sources showed a differential level of virus titre in single and mixed infections(～10 to ～5×10~2 copies). C5 plants with permanent virus pressure showed 10~3-to 10~5-fold fewer copies of viruses than those of the inoculated graft. We observed high accumulation of conserved mi RNAs such as mi R167, mi R69 and mi R396 in C5 plants co-infected with PPV, ACLSV and PDV that are associated with its resistance against viruses. Overall, i) C5 transgenic plums showed high resistance to PPV infection, and a low level(～32 copies) of PPV only accumulated in some grafted plants, ii) high accumulation of PPV was found in inoculated grafts in single PPV infection and mixed infections, iii) heterologous virus infection sustained by ACLSV or PDV did not suppress PPV resistance, and iv) high and low conserved micro RNAs accumulated in C5 plants.     

Molecular Cloning and Prokaryotic Expression of Non-Structural Protein NS1 Gene of Porcine Parvovirus

Porcine parvovirus (PPV) is one of the major agents causing swine reproductive failure. NS1protein is a non-structural protein of PPV and can be used as a reagent for differentiation of vaccinated ani-mals and infected ones. In present study, a recombinant plasmid pET28a/NS1 was constructed by cloning thecoding sequence for NS1 of PPV into pET28a, a bacterial expression vector. The NS1 protein was expressed inE. coli BL21 (DE3) after induced by IPTG and the recombinant fusion protein was purified with affinity chro-matography. Expression amount of NS1 protein was improved by optimizing the inducing parameters. The re-combinant NS1 protein is reactive to PPV positive sera in Western blot and ELISA test and therefore can beapplicable in differential diagnosis of PPV infections.     

猪细小病毒HNZM01株NS1基因的克隆及序列分析

为加强猪细小病毒病的监控,对分离的猪细小病毒(PPV)HNZM-01株NS1基因的序列进行了分析。设计一对特异性引物,以抽提的PPV HNZM-01株的DNA为模板,通过PCR反应扩增出大小约2.27kb的目的片段,并将其插入克隆载体pGEM-T Easy上,构建了重组质粒并测序。结果表明,NS1基因全长1 989bp,与预期目的片段大小一致。序列分析结果表明,PPV HNZM-01株的NS1基因与其他PPV毒株同源性在98.2%～99.8%,说明NS1基因具有高度保守性。同时应用ANTHEPROT软件分析了HNZM-01株NS1基因编码蛋白质的氨基酸组成和二级结构的含量、分布。结果表明,由于HNZM-01株中碱基的突变,造成其氨基酸序列与NADL-2株有所不同,形成的二级结构略有差异,但二级结构元件分布大致与NADL-2株相同。     

PPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪细小病毒（PPV）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中的PPV VP2基因序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR,扩增猪细小病毒VP2基因,并将其纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy 载体中,构建重组质粒。对扩增程序中的荧光染料浓度、引物浓度和Mg²⁺浓度条件进行优化,建立最佳的荧光定量 PCR 反应体系和标准曲线。以阳性重组质粒为模板,建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对其灵敏性、特异性和重复性进行检验。应用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对临床60份疑似PPV病料进行检测,同时与血凝试验(HA)和常规PCR方法的检测效果进行比较。【结果】 在25 μL扩增体系中,Mg²⁺终浓度为4.5 mol/L、SYBR Green染料浓度为20 μmol/L、引物浓度为25 μmol/L时,本底反应最小、循环阈值最低、扩增效率最高。所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法能够特异、定量地检测猪细小病毒,灵敏度达20 TCID₅₀/mL;在临床样品检测中,其检出率比常规PCR方法高13.3%。【结论】 成功建立了PPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为临床猪细小病毒的早期诊断及定量分析病毒的感染程度奠定了基础。