一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌试验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征,将其初步鉴定为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素。该细菌素对大肠杆菌具有较好的抑制作用。     

鸡源乳酸菌细菌素的分离筛选及鉴定

为了分离鉴定产乳酸菌细菌素,采用双层琼脂扩散法,对从健康鸡肠道内容物分离到的68株乳酸菌进行筛选,获得对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡白痢沙门菌均有抑制作用的17株乳酸菌,在排除酸、过氧化氢等因素作用后仍具有较强抑菌活性,表明发酵液中还有其他抑菌活性物质的存在,用蛋白酶处理上清液后有6株菌的抑菌效果消失,表明抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素类物质。筛选出的菌株所产抑菌物质是一种广谱细菌素,它们对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有较强抑制效果。结合形态鉴定、生理生化特性试验以及16S rRNA序列同源性分析鉴定菌株LABJN02、LABJN05、LABJN06和LABJN14分离菌为唾液乳杆菌,LABJN16为约氏乳杆菌,LABJN31为卷曲乳杆菌。细菌素作为潜在的抑菌物质,与其产生菌一起在平衡肠道菌群中具有重要意义。     

健康动物肠道源产窄谱细菌素乳酸菌的筛选鉴定

从健康猪、鸡、兔新鲜粪便及鸡肠道内容物等78份样品中分离乳酸菌,以大肠杆菌、李氏杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌筛选有明显抑菌活性的菌株,同时进行产细菌素的乳酸菌筛选,并测定抑菌谱;进一步通过生化试验,并结合16S rRNA基因测序结果确定菌株的种类,采用溶血试验和动物试验确定分离菌株的安全性。结果表明,在分离得到的30株乳酸菌中,共有8株对指示菌有抑制作用,其中1株为产窄谱细菌素的短乳杆菌。本研究为下一步探讨产细菌素短乳杆菌作为天然防腐剂和抗菌剂提供了材料。     

粪肠球菌产伏尔加霉素E5的生物学特性研究

为了确定分离自健康猪胃肠道粪肠球菌产生的细菌素伏尔加霉素E5(enterocin E5)的生物学特性,本研究检测了该细菌素对热、酸碱、酶类的耐受性及其抗菌谱,enterocin E5经过121℃高压处理10min对指示菌抑菌活性没有影响;细菌素于pH 2～12作用后,对大肠埃希菌仍有抑菌活性,最强的pH抑菌活性范围为pH 4～6;enterocin E5对胰蛋白酶和蛋白酶K处理敏感,过氧化氢酶、脂肪酶和淀粉酶对其抑菌活性没有影响;enterocin E5对21株动物源病原微生物具有抑制作用,革兰阴性病原菌包括大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、多杀性巴氏杆菌等,特别对产生多重抗药性的3株鸡伤寒沙门菌具有明显的抑菌活性。抑制革兰阳性金黄色葡萄球菌、马腺疫链球菌、猪链球菌,对炭疽芽胞杆菌弱毒株和蜡样芽胞杆菌产生显著的抑菌活性。结果表明,enterocin E5对酸碱是比较稳定的,具有很宽泛的pH耐受范围,属于热稳定IIa亚型细菌素,能够作为一种抗菌物质防控动物源细菌病。     

肉鸡肠源产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

研究旨在从肉鸡肠道中筛选具有良好抑菌效果的产细菌素乳酸菌,并对其生物学特性和抑菌特性进行初步研究。试验采用牛津杯法,以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,从饲喂菌丝霉素的肉鸡肠道分离筛选具有抑菌功能的乳酸菌。利用形态学、生理生化鉴定及16S rD-NA序列同源性分析进行菌种鉴定,通过热处理、过氧化氢酶、蛋白酶K处理确定抑菌活性物质,并绘制乳酸菌生长曲线及抑菌活性曲线。分离筛选到两株对大肠杆菌、沙门氏菌和金色葡萄球菌均具有较强抑菌活性的乳酸菌LAB12和LAB19,经鉴定菌株LAB12为乳酸片球菌,菌株LAB19为植物乳杆菌。过氧化氢酶处理不影响LAB12和LAB19抑菌活性,加热处理和蛋白酶K处理后抑菌活性减小。乳酸片球菌LAB12接种后2 h进入对数生长期,18 h左右进入稳定期,随着菌体数量增加发酵液上清抑菌作用增强,22 h抑菌活性达到最大且趋于稳定;植物乳杆菌LAB19在发酵2 h进入对数生长期,经约10 h快速生长后,生长速度趋于稳定,抑菌活性也基本保持不变。研究从饲喂菌丝霉素的肉鸡肠道中分离筛选到两株具有良好抑菌功能的乳酸菌,分别为乳酸片球菌LAB12和植物乳杆菌LAB19,初步鉴定这两株菌抑菌活性物质为细菌素。     

抗奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌-细菌素的筛选及特性研究

奶牛乳房炎时常危害奶牛群，给奶牛养殖业造成严重的经济损失。在所有细菌性乳房炎中，金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎占比极高。本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用琼脂扩散法进行抑菌试验，从内蒙古手工奶酪中筛选到一株产细菌素的乳酸菌作为研究对象。根据形态特征，结合16S rRNA序列结果分析，鉴定菌株为Lacticaseibacillus saniviri，命名为LS-1。通过酶稳定性试验、酸碱稳定性试验、热稳定性试验，确定菌株LS-1的细菌素生物学特性。LS-1细菌素对木瓜蛋白酶、胃蛋白酶较敏感，经100℃水浴处理具有良好抑菌活性。LS-1细菌素经p H处理，p H为11.0时抑菌活性丧失。本研究所筛选的LS-1，丰富了产细菌素的菌种资源，其所产细菌素具有作为治疗奶牛乳房炎替抗产品的潜力。     

1株抗猪链球菌细菌素产生菌的筛选与鉴定

本试验从健康未断奶的仔猪粪便中分离出一株对猪链球菌有较好抑制作用的菌株1～6,排除有机酸、过氧化氢、菌体细胞等的干扰后仍有抑菌活性;用蛋白酶K处理后, 其抑菌活性消失;进一步硫酸铵沉淀、透析处理后, 其抑菌活性显著增强, 因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质, 进而确定菌株1～6为细菌素产生菌.通过个体及菌落形态、生理生化试验、16S rRNA基因序列同源性比较, 结果证明1~6菌株为屎肠球菌.     

细菌素抗菌作用机理及其应用

细菌素是微生物在代谢过程中通过核糖体途径合成的一类具有抗菌活性的多肽物质,对细菌素产生菌自身没有抑制作用。细菌素在自然界中普遍存在,30%~99%的细菌和古生菌可以产生至少一种     

产细菌素猪链球菌的筛选及其基因簇功能分析

以猪链球菌的细菌素为研究目标,采用琼脂扩散法筛选出27株产类细菌素猪链球菌菌株,其中CZJYW024菌株的细菌素抑菌活性最强。使用细菌素检测引物(nisin A和scn A)对产类细菌素菌株进行检测,scn A和nisin A的携带率分别为33.3%和14.8%。初步纯化CZJYW024菌株的抑菌物质,提取物对马链球菌兽疫亚种ATCC35246的抑菌环直径达(23.30±0.20)mm,经有机酸、过氧化氢干扰试验及质谱鉴定,证实该抑菌物质属于羊毛硫细菌素家族,对热、pH和蛋白酶稳定,命名为suicin024。抑菌试验证实该基因缺失株抑菌活性消失,进一步分析发现suicin024包含10个开放阅读框,由scz基因簇编码。CZJYW024菌株经BALB/c小鼠模型证实为无毒株。本研究为该细菌素在动物制药和食品原料加工等抗生素替代品的研究和开发上提供理论依据。     

产细菌素菌株的筛选鉴定及活性研究

为筛选产细菌素的乳酸菌株,本试验采用高效液相色谱法与微生物学方法相结合的方式进行初步筛选。从土壤中分离获得一株乳酸菌菌株P9-5,将菌株P9-5发酵液作用于单核细胞增生李斯特氏菌发现,其产生的细菌素对该致病菌有抑制活性。结合菌落及菌体形态,通过Biolog自动微生物鉴定系统鉴定和16S r DNA基因序列相似性分析,鉴定菌株P9-5为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),为菌株P9-5的进一步开发利用提供了技术支持。     

枯草芽孢杆菌MA139类细菌素抑菌活性的研究

为测定枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素的抑菌活性。本试验采用管碟法对枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素对多株革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的抑菌活性进行测定。结果表明:类细菌素不但对芽孢杆菌属的其他菌种有抗菌活性,对病原菌和霉菌也有拮抗作用;不同指示菌对类细菌素的敏感性不一样,其中金黄色葡萄球菌对其最敏感。该类细菌素具有广谱抗菌作用,有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

猪肠道产多肽类抗生素活性菌株的筛选与鉴定

为了筛选产多肽类抗菌物质的活性菌株,为生产猪用益生素及新型抗菌活性物质提供菌源,试验分别从猪的十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠中分离肠道内生菌2 317株,利用临床分离的致病性大肠杆菌作为指示菌,通过点种法进行对峙培养,分析其抑菌活性。结果表明:复筛所得50株肠道内生菌株均对指示菌具有明显抑菌活性,筛选得率为2.2%。经过胰蛋白酶、蛋白酶K水解处理,将发酵上清液抑菌活性明显降低或丧失的结肠57号和盲肠2号菌确定为可产蛋白或多肽类抗生素的活性菌株。经16S rDNA的序列检测及比对,两菌株均属于枯草芽孢杆菌。     

应用交叉拮抗法筛选产细菌素菌株的试验研究

应用交叉拮抗法从明串珠菌和片球菌菌株中筛选产细菌素菌株,获得了4株具有明显抑菌效果并对蛋白酶敏感的菌株,分别为乳酸明串珠菌9、乳酸片球菌、肠膜明串珠菌WZ30-2和肠膜明串珠菌WZ-9-2菌株.     

巨菌草内生细菌多样性及其促生特性

为探究不同生境巨菌草（Pennisetum sp.）内生细菌群落组成多样性,明确促生菌株的促生特性,本试验采用菌株16S rDNA全序列分析法,对5个不同生境的巨菌草中内生细菌的遗传多样性进行系统发育分析,并以溶磷、固氮、产吲哚乙酸（Indoleacetic Acid,IAA）、产铁载体和抑菌活性等为筛选标准,对初筛菌株进行多项促生活性测定。本研究中,从巨菌草植株中共分离得到187株内生菌株,其中86株具有分泌IAA的能力,占全部菌株的46%,菌株XJ-4产IAA的能力最强,分泌的IAA浓度为30.13 mg·L^-1;47株具有溶磷能力,占全部菌株的25%,菌株FJ-23,FJ-15溶磷能力最高,分别为7.10 mg·L^-1和7.35 mg·L^-1;128株可以在Ashby无氮培养基中正常生长,表明64%的巨菌草内生细菌都具有潜在的固氮能力;34株可以在产铁载体的培养基中正常生长,表明18%的菌株产铁载体;试验中,80%以上的内生细菌对1种或者多种指示菌具有抑制作用,其中菌株SX-21,SX-30,SX-1,NY-10表现出对3种指示菌的广谱性抑菌活性,菌株SX-30对玉米大斑病菌的抑制效果最好,抑菌圈达到30 mm。供试菌株共产生了23种遗传图谱类型,通过对每种图谱类型的代表性菌株进行16S rDNA全序列分析,23株菌株分别归属于芽孢杆菌属（Bacillus）、根瘤菌属（Rhizobium）、寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）、假单胞菌属（Pseudomonas）、不动杆菌属（Acinetobacter）和肠杆菌属（Enterobacter）。巨菌草中具促生特性的内生细菌表现出丰富的多样性,可为进一步构建巨菌草促生菌菌群提供良好的种质资源。     

拮抗金黄色葡萄球菌的细菌分离及其作用机制

细菌耐药性问题越来越严重,迫切需要研发新型抗菌药物。而拮抗性细菌可以产生抗菌活性物质,在对抗耐药性细菌方面具有潜力。本研究以耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌USA300为指示菌,从污水中分离并纯化得到1株拮抗性菌株H223,通过16S rRNA测序结果显示属于芽孢杆菌属,H223对指示菌USA300表现出较高的抑菌活性,并对葡萄球菌属均表现出不同程度的抑菌效果。对H223发挥抑菌活性物质进行研究,确认其存在于培养上清中。在液体培养基中静置培养36 h抑菌活性最强,最后结合超滤管和蛋白酶K处理判断H223培养上清中的抑菌活性物质为非蛋白类小分子。综上所述,该研究获得的拮抗性菌株H223培养物具有显著拮抗耐药性金黄色葡萄球菌作用,为新型抑菌成分的进一步研究和应用奠定基础。     

酸马奶提取植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性研究

为研究从酸马奶中提取的植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性,本试验提纯植物乳杆菌DSM20174细菌素,经过硫酸铵沉淀、透析后得到细菌素粗提液,再利用SephadexG-100凝胶柱层析进行纯化后,细菌素的比活力明显增加,达到154.70 AU/mL,得率为43.5%.采用牛津杯法测定纯化的植物乳杆菌DSM20174细菌素在3种不同方式处理下对牛源野生致病性大肠杆菌O78抑菌效果的影响.结果显示:①植物乳杆菌DSM20174细菌素在5组温度处理下,随着温度的升高抑菌作用降低,各组抑菌作用差异显著(P<0.05).即使121 ℃处理30 min后,抑菌直径仍达14.90 mm.②植物乳杆菌DSM20174细菌素在pH 2.0~12.0由低到高的11组酸碱处理下,pH越大抑菌直径越小,且除了pH 9.0和pH 10.0之间差异不显著(P>0.05)外,其余各组抑菌作用均差异显著(P<0.05). ③植物乳杆菌DSM20174细菌素经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶3种酶处理后抑菌直径变化明显,处理前后抑菌作用均差异显著(P<0.05).结果表明植物乳杆菌DSM20174细菌素是较好的抑菌活性物质,但不是热稳定性物质;具有较广泛的pH适用范围,且pH越小时其抑菌活性越强,在最适生长pH时抑菌活性有所增强;不是蛋白酶稳定性物质.     

北里乳杆菌97-1产细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的研究

为鉴定北里乳杆菌97-1(L.kitasatonis 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数蛋白酶降解,但耐受过氧化氢酶的处理;进一步研究表明其细菌素对单核细胞增生李斯特菌的生长具有明显抑制作用,同时可以抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,具有广谱抗菌活性;温度和酸碱耐受试验表明该细菌素对高温、强酸和强碱具有高度耐受性。本研究对细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的鉴定,为微生态制剂的研制和开发提供了良好的候选资源。     

嗜酸乳杆菌J_2产细菌素的生物学特性研究

采用琼脂扩散法,旨在对嗜酸乳杆菌所产细菌素的生物学特性进行研究。研究表明,该细菌素具有良好的热稳定性,可耐受121℃处理30 min;有效pH范围3.0~6.0;可不同程度的耐受多种有机溶剂;对多种蛋白水解酶敏感(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K和菠萝蛋白酶),但对胃蛋白酶敏感性低;抑菌谱广,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰阳性细菌及大肠杆菌和沙门菌等革兰阴性细菌具有显著的抑制作用。细菌素可作为一种高效安全的饲料添加剂,在饲料业中体现巨大的应用潜力。     

芽孢杆菌中新型非核糖体肽类抗菌活性物质的发掘、分离鉴定及特性研究

本研究旨在基于对细菌次级代谢产物的筛选,寻找新型非核糖体肽类抗菌物质。通过对烟台沿海地区的土壤、海水及近海常见海洋生物中的细菌进行培养,分离纯化得到细菌的单克隆,以大肠杆菌（E.coli）ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213为指示菌进行初步筛选,以耐多黏菌素和碳青霉烯E.coli B2（bla_NDM-5+mcr-1）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） T144作为指示菌对有活性的细菌进行二次筛选。通过提取基因组进行PCR扩增产物测序比对,确定活性菌种属。采用有机萃取法对细菌的次级代谢产物进行萃取,通过凝胶层析和制备液相色谱进行纯化,利用分析型液相色谱进行纯度检测,进—步利用质谱对纯化后的抗菌活性物质进行结构鉴定。测序结果表明,活性菌属于解淀粉酶芽孢杆菌种,将其命名为解淀粉酶芽孢杆菌9-14（活性菌9-14）。抑菌试验结果表明,活性菌9-14的代谢产物对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、MRSA T144、E.coli ATCC 25922和E.coli B2均具有高效抑制作用。活性菌9-14代谢产物是由氨基酸链组成的环状脂肽,属于伊枯草菌素的衍生物。对活性菌9-14代谢产物的生物学特性及其抑菌谱研究发现,活性菌9-14的代谢产物具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,该抗菌物质经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K和木瓜蛋白酶处理后抗菌活性没有明显减弱,具有较好的稳定性;该抗菌物质对所用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌同样具有抑制作用,对绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌、粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌均不表现活性。本研究得到一种新型的抗菌物质,以该抗菌物质为抗菌药物的前体,可为食品安全和疾病控制提供一定的参考依据。     

纤维素降解细菌的筛选、生物学特性及降解效果

为了从东祁连山高寒草甸土壤中分离筛选纤维素分解细菌,本研究根据在羧甲基纤维素钠培养基和滤纸平板培养基上的生长情况,初步筛选出3株具有较强纤维素分解能力的细菌,并对其生长条件进行了初步研究,结果表明,3株菌的最适生长温度范围为25~30℃;最适生长pH因菌种不同位于5~8之间;最适生长盐浓度位于4%~5%。菌株X1-2具有较好降解特性,根据形态观察、革兰氏染色及16SrRNA系统发育比较,鉴定该菌为芽孢杆菌(Bacillus sp.),是一株十分具有开发生产纤维素酶能力的菌株。