应用高分辨溶解曲线(HRM)技术分析猪微卫星多态性

为了验证利用高分辨熔解曲线(high-resolution melting curve analysis,HRM)技术对猪微卫星标记进行基因分型的可行性和可靠性,使用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法对5个微卫星(SSRs)位点多态性进行检测,再使用HRM技术对这5个微卫星(SSRs)位点进行基因分型测定,最后对1个微卫星的所有基因型进行单克隆测序。结果表明:在样本测试中,使用HRM技术分辨出S0107和SW1953位点均有8种基因型,SW72位点有6种基因型,SW29位点有5种基因型,SW2155位点有4种基因型,其结果与利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测的结果完全吻合,并且SW72位点的所有基因型克隆测序结果与HRM检测一致。这些结果提示,HRM分析技术可作为筛选猪微卫星标记多态性和对其进行基因分型的有效手段。     

利用微卫星标记进行猪亲子鉴定

以杜洛克猪、长白猪、大白猪3个品种的48头系谱清楚的猪为样本,使用PAGE法从55个微卫星位点中筛选出扩增效果好、多态性丰富且便于进行多重PCR扩增的位点,对试验样本逐一进行基因分型,并据此进行亲权确认,建立一种高效的亲子鉴定方法。结果显示,试验选取的14个微卫星位点在48个样本中进行排父率分析,在双亲未知、只知单亲和双亲已知的情况下计算的累积排父率分别为0.978 5,0.998 4,0.999 99;利用建立的亲子鉴定体系对样本中8个家系进行检测,结果累积排父率均大于99.99%。结果表明,试验构建的微卫星标记体系,为亲本信息不明的个体进行亲子关系的验证,纠正潜在的错误系谱,建立完整、准确的系谱体系,保证育种值估计的准确性,保障猪育种工作的正常开展具有非常重要的意义。     

内蒙古地区西门塔尔牛亲子鉴定微卫星标记筛选

研究旨在筛选适合于我国肉牛亲子鉴定的微卫星标记,以内蒙古乌拉盖地区368头西门塔尔牛为实验材料,利用荧光引物PCR和ABI3730测序仪对12个微卫星标记进行基因型检测,应用Cervus3.0软件统计12个微卫星标记的遗传多态性。结果表明:其中4个微卫星标记扩增效率较低,被剔除;其他8个微卫星的多态性丰富,平均等位基因数为11.38,平均期望杂合度为0.6686,平均多态信息含量为0.6354,适合于我国肉牛亲子鉴定。     

黑龙江省完达山东部林区马鹿微卫星位点的筛选

利用黑尾鹿、白尾鹿等近缘物种的18对微卫星引物,对2个东北马鹿肌肉DNA样品和176个粪便DNA样品进行扩增,通过毛细管电泳法筛选适合东北马鹿的微卫星位点。结果表明,其中3个位点为高度多态性位点（PIC〉0.5）,1个为中度多态性位点（0.5〉PIC〉0.25）。共检测到26个等位基因片段,平均每个位点6.5个等位基因。多态信息含量0.393～0.827,个体识别率0.643～0.958,累积个体识别率为0.9999,累积非父排除率为0.9976。这4个多态性微卫星位点为东北马鹿的遗传研究提供了理论依据。     

克隆清原马鹿的微卫星鉴定

为对体细胞克隆马鹿进行遗传鉴定,选取8对在牛中具有多态性的微卫星位点,通过筛选出在清原马鹿中具有高度多态性的引物,分别对体细胞克隆清原马鹿、清原马鹿供体细胞、受体清原马鹿进行微卫星分析。结果表明:清原马鹿的HUJ1177、BM888、BM757、IDVGA37、oarFCB304、RM12等6个微卫星位点的PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后呈现多态性。经PAGE电泳分析,克隆清原马鹿与供体细胞的微卫星DNA基因型完全相同,而与受体清原马鹿的微卫星基因型明显不同。因此,体细胞克隆清原马鹿基因组来源于供体清原马鹿细胞而与受体无亲缘关系;HUJ1177、BM888、BM757、IDVGA37、oarFCB304、RM12等6个微卫星位点可用于克隆清原马鹿的鉴定。     

基于微卫星标记鉴定湖羊家系

试验旨在基于微卫星（simple sequence repeats，SSR）多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法，通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA023、ETH152和MCM527。采集30只湖羊种公羊血液，使用试剂盒提取血液基因组DNA，合成筛选出的9个微卫星引物并使用荧光基团标记，利用降落式PCR进行扩增，扩增产物在基因分型后使用CERVUS3.0.7进行基因型分析，使用POPGENE1.32基于Nei氏遗传距离构建树状聚类图，根据图示的亲缘关系远近划分湖羊家系。结果显示，当双亲基因型未知时，9个微卫星位点的单亲累积排除概率为99.2094%；当单亲基因型已知时，9个微卫星位点的累积排除概率为99.9688%；当双亲基因型未知时9个微卫星位点的双亲累积排除概率为99.9999%，排除概率能够满足遗传育种中亲子鉴定和系谱分析的要求。根据Nei氏遗传距离构建UPGMA聚类图，将30只种公羊划分为6个家系，为育种工作提供了一定参考。本方法能够进行湖羊家系的鉴定与划分，对湖羊育种工作具有一定的应用价值。     

新疆鹅喉羚微卫星位点的筛选

为了对15份新疆鹅喉羚肌肉DNA样本和138份粪便DNA样本进行扩增,试验利用牛、羊等近缘物种的20对微卫星引物,通过毛细管电泳法筛选适合新疆鹅喉羚的微卫星位点。结果表明:其中10个位点均为高度多态性位点[多态信息含量(PIC)0.5)],共检测到74个等位基因片段,平均每个位点7.4个等位基因。PIC范围为0.509~0.827,个体识别率为0.529~0.845,累计个体识别率为0.999。     

绵羊(ATAG)n四碱基微卫星位点的筛选及其在亲子鉴定中的应用

本试验旨在筛选绵羊高度多态性四碱基微卫星遗传标记,建立适用于绵羊亲子关系鉴定的实验体系。试验以小尾寒羊为主要研究对象,从已有的绵羊参考基因组序列出发,基于全基因组序列筛选法共筛选出53个（ATAG）_n四碱基重复微卫星位点,然后通过基因分型数据共筛选出30个扩增效果好、多态信息含量（PIC）丰富的四碱基重复微卫星位点;30个位点的基因分型结果表明,共扩增出253个等位基因,平均等位基因数为8.433,等位基因数均>5,多态信息含量在0.566~0.898,观测杂合度（Ho）范围在0.548~0.903,期望杂合度（He）范围在0.631~0.921,平均期望杂合度为0.776;哈代-温伯格平衡检验30个位点均处于遗传平衡状态。随后根据PCR的扩增效率从获得的30个多态性位点中筛选出22个微卫星位点用于亲权排除概率的计算,根据多态信息含量的大小由高到低依次增加位点数进行组合。结果表明,在两个亲本的基因型均未知的情况下,标记位点数为15个时,累积排除概率可达到99.99%,其中单个位点的第一非亲排除率（non-exclusion probability of the first parent,NE-1P）介于0.321~0.663之间。利用建立的亲子鉴定体系对16只具有系谱记录的小尾寒羊样本进行检测,结果共鉴定出4个具有高置信度的绵羊家系,鉴定结果与系谱记录完全一致。本试验为绵羊分子系谱的构建、亲子鉴定以及保障绵羊育种工作的正常开展奠定重要基础。     

青海高原牦牛遗传多样性研究

以中心产区简单随机抽样在青海省西宁市共抽取青海高原牦牛76头,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白(酶)结构基因座及12个微卫星位点的多态性,并进行中性检验及连锁不平衡分析.结果表明:在所检测的21个血液蛋白基因座中,有6个存在多型,多态位点百分比为28.57%,12个微卫星位点全部为多态,共检测出63个等位基因;两层次标记所反映的群体内遗传变异水平均较低,21个血液蛋白基因座平均有效等位基因数、观察杂合度、期望杂合度和多态信息含量分别为1.118、0.0665、0.0729和0.0603,12个微卫星位点相应指标分别为2.9005、0.4138、0.5325和0.4903;除Alp外,其余5个血液蛋白多态基因座和12个微卫星位点均为中性基因.除Alp-CA、LDH1-ADH两对血液蛋白基因座和8对微卫星显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)处于连锁不平衡状态外,其余13对血液蛋白基因座和58对微卫星均处于连锁平衡状态(P＞0.05);另外,6个血液蛋白多态基因座、12个微卫星位点或是两者的合并数据从群体水平上均处于连锁平衡状态(P＞0.05).     

豫西脂尾羊微卫星DNA多态性研究

为了分析5个微卫星位点BL1038、BM757、BM4621、OarFCB304、OarFCB48在豫西脂尾羊群体中的多态性,试验采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测其多态性。结果表明:在豫西脂尾羊群体中共发现5个微卫星位点有60个等位基因,有效等位基因(Ne)在6.010 3～10.846 8之间,平均Ne为8.430 3,OarFCB48的Ne最高为10.846 8;5个微卫星位点的平均杂合度(H)为0.876 7,OarF-CB48的H最高为0.907 8。微卫星位点OarFCB48的多态信息含量(PIC)最高为0.902 1,BM757的PIC最低为0.817 5,平均PIC为0.866 5。说明豫西脂尾羊群体属于PIC较高的遗传群体。     

高原鼢鼠微卫星多态位点筛选及其通用性检测

跨种扩增是微卫星DNA标记获取的快捷有效途径之一。为了筛选出高原鼢鼠微卫星多态性位点,从已开发微卫星信息的鼹形鼠科和甘肃鼢鼠物种中进行了高原鼢鼠微卫星多态性位点及其通用性研究,结果表明:在87对微卫星位点中,只有54对进行了成功扩增,多态位点仅有9个,27个鼹形鼠科物种的微卫星在高原鼢鼠中并没有多态性,9个多态位点全来自于同属的甘肃鼢鼠。基于获得的9个多态位点,检测到高原鼢鼠的等位基因数在4~12,其平均观测杂合度(Ho)为0.544,期望杂合度(He)为0.671,多态信息含量为0.551,研究为高原鼢鼠的微卫星标记应用奠定了基础。     

中国荷斯坦种公牛亲子鉴定及个体识别信息库的建立

为了构建基于微卫星标记的中国荷斯坦种公牛亲子鉴定及个体识别技术平台,本研究选取国际动物遗传学会（ISAG）推荐的12个微卫星标记（BM1824,BM2113,SPS115,ETH10,TGLA122,ETH225,INRA023,TGLA126,TGLA227,BM1818,ETH003和TGLA53）,采用荧光标记毛细管电泳方法,对571头荷斯坦种公牛进行基因型检测。统计结果显示,标记的平均多态信息含量为0．700,平均杂合度为0．735,属于高多态性标记;12个标记的累积排除概率大于0．996,累积一致性概率为4．9×10^-13,将其运用于亲子鉴定和个体识别具有很强的检测效率。此外．通过分析每个标记的检测信号峰图特征,将检测结果与商业化试剂盒进行比较以及利用ISAG参考DNA样品进行等位基因统一命名等手段,建立了标准化的微卫星等位基因分型方法,并初步建立起中国荷斯坦种公牛遗传检测信息库。     

基于微卫星多重PCR技术的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定

本研究旨在建立一套适用于特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子关系的鉴定体系。试验选取11个微卫星标记位点进行组合扩增,通过优化微卫星标记位点组合的引物浓度、退火温度及反应体系等条件,建立了4组多重PCR体系,对多重PCR扩增产物采用毛细管电泳进行基因型分型,经PROSize3.0软件读取基因型分型结果,Cervus 3.0软件分析群体的遗传多样性,鉴定特克塞尔×哈萨克级进F2代(特哈级进F2)和横交F2代(特哈横交F2)的亲子关系。结果表明,特哈级进F2和特哈横交F2的等位基因数为180和140、平均等位基因数为16.364和12.727、平均观测杂合度(Ho)为0.533和0.544、平均期望杂合度(He)为0.807和0.831、平均多态信息含量(PIC)为0.783和0.803。对特哈级进F2和特哈横交F2两个品种70只候选亲本和64只候选子代的11个微卫星标记位点进行亲子关系鉴定,结果表明:当双亲基因型未知时的累积排除概率(CE-1P)为0.9995和0.9997;当单亲基因型已知时的累积排除概率(CE-2P)均达到1.0000;双亲基因型已知的累计排除概率(CEPP)均达到1.0000。说明选择的11个微卫星标记位点具有高度的多态性和较高的排除概率,适用于遗传分析和个体的亲子鉴定。利用微卫星标记建立的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定体系为分析绵羊群体遗传多样性和辅助育种工作提供了理论依据。     

基于微卫星多重PCR技术的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定

本研究旨在建立一套适用于特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子关系的鉴定体系。试验选取11个微卫星标记位点进行组合扩增，通过优化微卫星标记位点组合的引物浓度、退火温度及反应体系等条件，建立了4组多重PCR体系，对多重PCR扩增产物采用毛细管电泳进行基因型分型，经PROSize3.0软件读取基因型分型结果，Cervus 3.0软件分析群体的遗传多样性，鉴定特克塞尔×哈萨克级进F2代（特哈级进F2）和横交F2代（特哈横交F2）的亲子关系。结果表明，特哈级进F2和特哈横交F2的等位基因数为180和140、平均等位基因数为16.364和12.727、平均观测杂合度（Ho）为0.533和0.544、平均期望杂合度（He）为0.807和0.831、平均多态信息含量（PIC）为0.783和0.803。对特哈级进F2和特哈横交F2两个品种70只候选亲本和64只候选子代的11个微卫星标记位点进行亲子关系鉴定，结果表明：当双亲基因型未知时的累积排除概率（CE-1P）为0.9995和0.9997；当单亲基因型已知时的累积排除概率（CE-2P）均达到1.0000；双亲基因型已知的累计排除概率（CEPP）均达到1.0000。说明选择的11个微卫星标记位点具有高度的多态性和较高的排除概率，适用于遗传分析和个体的亲子鉴定。利用微卫星标记建立的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定体系为分析绵羊群体遗传多样性和辅助育种工作提供了理论依据。     

皖西白鹅微卫星DNA遗传多样性分析

从9对微卫星引物中筛选出6对引物对49只皖西白鹅的DNA多态性进行检测，分析等位基因组成，计算各座位的基因杂合度和多态性信息含量。结果表明，6对微卫星引物共扩增出16个等位基因，基因频率分布在0．0392-0．9608之间。6个微卫星位点的平均杂合度为0．3809，平均多态性信息含量为0．3285。     

济宁百日鸡群体遗传多样性的微卫星标记分析

采用微卫星标记技术,在分布于家鸡的22条染色体的25对微卫星引物中,筛选出10对多态性丰富的微卫星位点,对60个个体的DNA多样性进行了检测。结果共检测到29个等位基因,每个微卫星座位的等位基因数目为2~5个,平均等位基因数为2.90,该鸡群的平均基因杂合度(H)为0.348,多态性信息含量(PIC)为0.511。表明所检测的济宁百日鸡群体的遗传多样性较丰富,具有一定的选择潜力,可以做进一步的选择利用。     

东北黑熊养殖群体6个微卫星基因座遗传多态性研究

利用微卫星标记研究东北黑熊养殖群体的遗传多态性,及时掌握养殖群体的相关遗传信息,为今后黑熊的人工繁殖及育种、保种工作奠定基础。本研究选取了黑熊的6个微卫星基因座(MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36、UT38)对115头东北黑熊进行了遗传检测,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行DNA分型以及ABI 3730遗传分析仪进行基因大小的判读,计算了6个微卫星位点的等位基因频率、多态信息含量(PIC)、杂合度等值。结果表明:东北黑熊养殖群体的6个微卫星座位共检测到51个等位基因,平均为8.5个;6个微卫星基因座的平均多态信息含量为0.641 9,其中5个微卫星基因座的PIC>0.5,6个微卫星基因座的平均观察杂合度、平均期望杂合度分别为0.529 9、0.641 7。数据证明,6个微卫星标记均具有高度多态性,可用于东北黑熊的遗传多样性分析。     

微卫星标记BMS2508和Bulge5在河南淮山羊中的遗传多样性研究

<正>用2个微卫星标记,通过PCR扩增,利用12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色等方法对河南淮山羊进行微卫星DNA遗传多态性进行研究。结果显示:在Bulge5基因座上检测出6个等位基因,其片段大小在105～140bp之间,其多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)     

青海高原牦牛遗传多样性研究

以中心产区简单随机抽样在青海省西宁市共抽取青海高原牦牛76头,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白（酶）结构基因座及12个微卫星位点的多态性,并进行中性检验及连锁不平衡分析。结果表明：在所检测的21个血液蛋白基因座中,有6个存在多型,多态位点百分比为28．57％,12个微卫星位点全部为多态,共检测出63个等位基因;两层次标记所反映的群体内遗传变异水平均较低,21个血液蛋白基因座平均有效等位基因数、观察杂合度、期望杂合度和多态信息含量分别为1．118、0．0665、0．0729和0．0603,12个微卫星位点相应指标分别为2．9005、0．4138、0．5325和0．4903;除Alp外,其余5个血液蛋白多态基因座和12个微卫星位点均为中性基因。除Alp-CA、LDH1-ADH两对血液蛋白基因座和8对微卫星显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）处于连锁不平衡状态外,其余13对血液蛋白基因座和58对微卫星均处于连锁平衡状态（P〉0．05）;另外,6个血液蛋白多态基因座、12个微卫星位点或是两者的合并数据从群体水平上均处于连锁平衡状态（P〉0．05）。     

猪八号染色体产仔数微卫星标记的探讨

本试验从猪第八号染色体遗传图谱上选择九个微卫星标记位点，。合成引物对长大，二花脸和大白共254头母猪进行PCR扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分型，用SPSS统计软件分别对9个微卫星的多态性与母猪产仔数连锁关系进行分析，结果表明，长大母猪产仔数与SW1070，SW905两个位点显著相关，二花脸猪的产仔数与OPN，SWR1101，SW790三个标记位 显著相关联，大白猪的产仔数与SWR1101，SW268，SW1070标记位点显著相关。