奶牛乳房炎无乳链球菌Fc-Sip和金黄色葡萄球菌Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗的免疫试验研究

为探究由IgG FcRn介导奶牛乳房炎无乳链球菌(S. agalactiae,Sgc)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sau)保护性抗原亚单位疫苗的免疫效果,在本实验室前期研究基础上,本研究按体积11的比例将Sgc的Fc-Sip和Sau的Fc-FnBPB-ClfA两种蛋白分别与1%的盐酸左旋咪唑(1%LH)充分混合,制备两种亚单位疫苗。将即将干奶(妊娠220 d)、CMT试验为"++"以上的奶牛随机分为4组,分别将Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA二联亚单位疫苗(A组)、Fc-Sip亚单位疫苗(B组)、Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗(C组)通过首次肌肉免疫和二次乳头管灌注免疫方式进行免疫试验。通过免疫前后对乳样细菌分离、体细胞数测定及免疫血清抗体滴度测定,评价上述亚单位疫苗的免疫效果。结果显示,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛的乳样细菌分离率分别为80%、90%、80%,其中Sgc检出率分别为20%、30%、10%,Sau检出率分别为30%、20%、10%;首免90 d后3个免疫组奶牛乳样细菌分离率分别降至20%、20%、40%,其中Sgc的检出率分别降至0、0、10%,Sau的检出率分别降至10%、10%、0,对照组免疫前后以上各项检测无明显变化。使用利拉伐牛奶体细胞检测仪检测免疫前后试验奶牛乳样中的体细胞数,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛体细胞数均值分别为6.19×105个/mL、5.16×105个/mL、5.49×105个/mL,首免90 d后3个免疫组奶牛乳样中体细胞数均值分别为2.05×105个/mL、2.04×105个/mL、2. 52×105个/mL,而对照组奶牛乳样体细胞数与免疫前无明显变化。检测首免后0、7 d、14 d、28 d、60 d、90 d的血清抗体滴度,结果显示,首免后7 d,免疫组(A、B、C)80%的奶牛血清抗体滴度为11 024;第14 d后,免疫组(A、B、C)90%奶牛血清抗体滴度达到12 048;第28 d后,免疫组(A、B、C)80%奶牛血清抗体滴度在14 096～18 192,比对照组平均上升3～4个抗体滴度,对照组奶牛血清抗体滴度一直保持在1256～1512。综合分析以上试验结果显示免疫A组(Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA)综合免疫效果在各免疫组中最佳。本研究结果表明Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA二联亚单位疫苗对无乳链球菌和金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎具有较好的治疗和预防作用,为奶牛隐形乳房炎的防治提供了实验依据。     

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定

为了能及时准确鉴定出奶牛乳房炎的病原,试验对规模化牛场的奶样进行细菌分离培养,从细菌的形态、生化特性、PCR扩增、动物回归试验等方面进行鉴定。结果表明:分离的菌株在形态、生化特性等方面疑似为无乳链球菌(GBS),PCR扩增及基因比对与GBS的同源性高达97%~98%,动物回归试验结果显示可引起动物乳房炎。说明分离的菌株为GBS。     

奶牛无乳链球菌性乳房炎的诊治

乳房炎是兽医临床上的常见疾病,一直困扰着兽医临床诊治工作。引起乳房炎的病因是多方面的,无乳链球菌只是引起乳房炎发生的其中1种病原菌。1病因无乳链球菌是牛群中乳腺炎的高度传染性病原菌,对规模饲养的奶牛,其危害是相当严重的。不规范的榨乳程序会     

我国奶牛乳房炎无乳链球菌抗生素耐药性研究

为了查明我国奶牛乳房炎无乳链球菌对抗生素耐药情况,指导临床合理用药,从我国部分地区奶牛场采集的临床型奶牛乳房炎病乳中分离鉴定出无乳链球菌115株,采用K-B纸片法测定了这些菌株对抗生素的耐药情况。结果表明,无乳链球菌对目前临床上使用的大部分抗生素,如头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素、强力霉素、麦迪霉素、林可霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、环丙沙星、氟哌酸、氨苄青霉素/舒巴坦、头孢噻肟/棒酸和头孢他啶/棒酸均比较敏感;但对青霉素G、氨苄青霉素、链霉素、恩诺沙星、阿莫西林/棒酸和复方新诺明等有一定耐药性,其耐药率达50%～100%。     

奶牛无乳链球菌乳房炎的诊断和治疗

链球菌是引起奶牛乳房炎的一大类致病菌的统称。无乳链球菌是其中一种,主要引起亚临床型乳房炎以及轻中度的临床型乳房炎。因此,就感染无乳链球菌患病牛的症状、诊断、治疗和预防措施进行阐述。     

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离与鉴定

利用THB固体培养基和色素培养基初步筛选出奶牛乳房炎中无乳链球菌，以分离的12株疑似菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增，对扩增产物进行分析，结合选择培养的生理生化特性对分离菌进行鉴定。结果表明，12株疑似菌中有8株为无乳链球菌.     

自家无乳链球菌乳房炎疫苗使用效果评价

本研究采集某奶牛场全群泌乳牛的奶样,经美国加利福尼亚隐性乳房炎测试法(CMT)检测后,对阳性奶样进行细菌培养并鉴定出该场隐性乳房炎的主要致病菌,制作自家乳房炎疫苗。通过病原菌检测、隐性乳房炎发病率及体细胞数的变化趋势分析,评估自家乳房炎疫苗的使用效果,以供参考。     

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离及PCR鉴定

利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体培养基和色素试验培养基选择培养无乳链球菌,参照GenBank中无乳链球菌参考菌株(Accession:AF015927.1、JQ289582.1)16SrRNA和种属特异性基因cfb(CAMP因子)序列设计引物,对奶样中分离的12株疑似无乳链球菌进行鉴定。结果显示,经PCR扩增后,被检测的12株细菌均可扩增出预期大小的16S rRNA基因序列,而12株中有8株可以扩增出预期大小的cfb基因序列,条带单一,特异性好。序列BLAST显示,12株菌的16S rRNA基因序列与NCBI上报道的无乳链球菌相应序列高度同源(>99.0%),各分离菌株间的16S rRNA基因序列也高度同源(99.0%～100.0%);cfb基因序列与NCBI上已报道的无乳链球菌相应序列具有高度同源性(>99.0%),各菌株间cfb基因序列也高度同源(100.0%)。经选择培养与PCR鉴定结果可以确定12株疑似菌株中有8株为无乳链球菌。     

奶牛无乳链球菌疫苗的研究进展

无乳链球菌是奶牛乳房炎最常见的病原体之一,其所致感染率高,给治疗带来了极大困难。疫苗是预防无乳链球菌感染的有效手段,但是无乳链球菌的血清型比较多,给疫苗设计带来非常大的困难。随着现代分子生物学技术的发展,应用基因工程技术重组表达来获取高纯度保护性抗原重组蛋白作为疫苗,是一个很好的发展方向。文中对近年来关于无乳链球菌在此方面的研究做一综述。     

通辽地区奶牛乳房炎无乳链球菌的分离与鉴定

为研究通辽地区奶牛乳房炎优势性病原菌,试验对30份奶牛临床型乳房炎奶样进行细菌分离,经血液琼脂平板分离培养、生化试验及药敏试验共分离到14个菌株,最终鉴定为无乳链球菌。药敏试验结果表明,分离菌株对临床上常用的链霉素及磺胺类药物均已产生不同程度的耐药性,而对卡那霉素、庆大霉素及麦迪霉素表现出较好的敏感性。     

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定及药敏试验

随着奶牛养殖业的兴起,奶牛存栏数量大幅上升,由于饲养管理等多种因素影响,导致奶牛乳房炎的发病率在逐步上升,给古勒巴格镇的奶牛养殖业造成很大危害。通过本试验可以为乳房炎的治疗提供有效的药物参考,为指导兽医临床用药、促进奶牛养殖业的健康发展提供一定的技术支持。     

奶牛隐性乳房炎无乳链球菌16SrRNA的序列分析

为了从分子生物学水平鉴定引起奶牛隐性乳房炎的无乳链球菌,试验从新鲜奶样中分离病原菌,并对经生理生化初步鉴定的无乳链球菌提取DNA,PCR扩增无乳链球菌16S rRNA序列。结果表明:引起奶牛隐性乳房炎的无乳链球菌16S rRNA为1 541 bp,与Gen Bank登录的无乳链球菌16S rRNA同源性达99.25%,从而证实该目的菌为无乳链球菌。     

奶牛乳房炎性乳房链球菌GapC重组蛋白的免疫保护性研究

为研究奶牛乳房炎性乳房链球菌GapC蛋白的免疫保护性,本研究采用纯化后的GapC重组蛋白与免疫佐剂乳化后制备疫苗,免疫家兔后采用间接ELISA法检测抗体效价,并以小鼠为实验动物进行攻毒试验.结果显示,抗体效价高达1:128 000,GapC蛋白免疫组对乳房链球菌的保护率较高,达70％,而全菌体免疫组的保护率仅为30％,表明GapC蛋白具有很高的免疫原性,为奶牛乳房炎的预防控制和进一步研究有效疫苗提供实验依据.     

奶牛乳房炎金葡菌黏附素亚单位疫苗的基础研究

为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,采用PCR方法对凝集因子A（ClfA）的A区、纤连蛋白（FnBPs）A和B的D区基因进行特异性扩增,构建了克隆质粒pMD19T-ClfA、pMD19T-FnBPA和pMD19T-FnBPB,然后将克隆基因定向插入到原核表达载体pET32a（＋）中,构建了表达质粒pET32-ClfA、pET32-FnBPA和pET32-FnBPB,并将其转入宿主菌BL21 （DE3）,经SDS-PAGE分析表明,1 mmol/L IPTG诱导后,在57ku、35ku和35ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带;经western-blot分析表明,所表达的蛋白均与目的蛋白一致,说明外源基因成功表达,且表达产物具有良好的免疫原性.     

奶牛停乳链球菌性乳房炎的诊治

<正>大庆市某牛场有产奶期奶牛80头,自2009年4月中旬临床型乳房炎发病率明显升高,到2009年5月初发病率达25%。病牛主要症状为乳房肿胀,皮下有大小不等的硬块,用手触摸有疼痛感,多数乳汁     

奶牛停乳链球菌性乳房炎的诊治

<正>大庆市某牛场有产奶期奶牛80头,自2009年4月中旬临床型乳房炎发病率明显升高,到2009年5月初发病率达25%。病牛主要症状为乳房肿胀,皮下有大小不等的硬块,用手触摸有疼痛感,多数乳汁     

我国部分地区奶牛乳房炎无乳链球菌的分离及耐药性研究

本研究对黑龙江、上海、河北、山东、内蒙古的部分牧场共计497份乳房炎患牛的乳样进行无乳链球菌分离鉴定及药物敏感性分析,结果显示,共分离出无乳链球菌18株,内蒙古分离菌株对11种抗菌药物耐药,黑龙江省分离菌株对7种抗菌药物耐药。本结果可为上述地区的牧场在抗生素临床合理使用方面提供参考。     

我国西北地区奶牛源乳房炎无乳链球菌的青霉素耐药特性研究

为了研究我国西北地区分离的奶牛源乳房炎无乳链球菌的青霉素耐药特性,试验采用药敏纸片法检测82株无乳链球菌对青霉素的耐药性,利用β-内酰胺酶试剂盒测定耐青霉素菌株β-内酰胺酶活性,通过刚果红法定性检测生物被膜的形成能力。结果表明:在82株受试无乳链球菌中,对青霉素耐药的菌株有18株(21.95%),β-内酰胺酶为阳性的有11株(13.41%),生物被膜为阳性的有64株(78.05%);在18株青霉素耐药菌株中,β-内酰胺酶为阳性的有9株(50.00%),生物被膜为阳性的有17株(94.44%),β-内酰胺酶和生物被膜同为阳性的有8株(44.44%);β-内酰胺酶为阳性而生物被膜为阴性的菌株有1株(5.56%),β-内酰胺酶为阴性但生物被膜为阳性的菌株有9株(50.00%)。说明奶牛乳房炎无乳链球菌对青霉素的耐药率较高,无乳链球菌青霉素耐药性受β-内酰胺酶和生物被膜等多种因子共同调控。     

奶牛乳房炎乳样中链球菌的PCR检测

<正>奶牛乳房炎(BovineMastifs)是限制奶业发展最重要的疾病之一,是一种世界性并且引起严重经济损失的疾病。其特征是乳腺发生各种不同类型的炎症,同时乳汁的理化性质也发生变化,乳房炎的发病率在奶牛各种疾病中占首位,给奶牛业造成很大的损失。导致奶牛乳房炎的因素很多,但病原     

奶牛乳房炎性无乳链球菌药敏试验及毒力基因检测

旨在调查山东某奶牛养殖场无乳链球菌的感染状况、药敏性及毒力基因携带情况.采集该牛场临床型乳房炎奶样200份,分别用5％绵羊血琼脂平板、MHA药敏琼脂培养基、16S rRNA基因引物、12种药敏片和多重PCR进行无乳链球菌的药敏性及毒力基因的检测.从中分离出42株无乳链球菌,分离率为21％.所分离出的无乳链球菌培养菌落特...