甘肃省部分规模场猪PCV-2抗体检测与分析

[方法]采用间接ELISA方法,对采自21个规模养猪场的629份血清,进行PCV-2抗体检测。[结果]8个PCV-2免疫场抗体阳性率母猪为82.93%,生长猪为82.22%,育肥猪为86.21%;13个未免疫场中抗体阳性率为69.23%。猪群抗体阳性率依次为母猪69.79%,保育猪34.91%,肥育猪97.30%,仔猪16.67%。[结论]母猪、生长猪和育肥猪免疫抗体阳性率之间没有明显差异。未免疫场不同生长阶段的猪均存在较为普遍的感染,阳性率呈先下降后上升的趋势,其中以肥育猪群感染最为严重,仔猪感染率最低。不同生长阶段PCV-2感染抗体阳性率存在明显差异。     

PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。     

应用灭光定量RT-PCR方法检测PRRSV变异株在仔猪体内动态分布

为进一步了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株(HuN4株)在体内的动态分布规律和特点,探讨病毒对组织器官的嗜性,本研究将HuN4株和细胞传代致弱毒株HuN4-F65人工感染40日龄健康仔猪,分别于感染后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d和28 d各迫杀2头,并应用建立的荧光定量RT-PCR方法对脑、颌下淋巴结、扁桃体、肺脏、肝脏和十二指肠等组织及血清中的PRRSV进行定量检测.结果显示:感染后HuN4组各器官病毒载量比HuN4-F65组高100倍,病毒栽量峰值期出现在感染后7 d,随后呈下降趋势.HuN4株在仔猪体内分布广泛,在21 d的试验期内持续存在,并且各器官的病毒载量呈正态分布规律;而HuN4-F65株血清病毒载量较低,并且集中在单核巨噬细胞相对密集的扁桃体和颌下淋巴结,与HuN4株主要嗜性器官肺脏相比发生了改变.     

中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析

2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV，该类病毒属于L1A (Sublineage1.5)亚型。近年来，新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异，已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征，本研究从2021年～2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序，利用Seq Man软件拼接，获得了4株完整的PRRSV全基因组序列，相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列，利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树，分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性，以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列，分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法，对新发类NADC34 PRRSV的ORF5...     

广东历年PRRSV流行毒株与疫苗株的重组分析

从GenBank上可查的全部424株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）全基因序列中筛选出了42株来源于广东的PRRSV毒株全基因组序列与6株PRRSV疫苗株全基因序列，用RDP4(Recombination detecting program 4,RDP4)软件进行重组分析。发现广东株之间的重组事件集中在2010年、2011年和2015年。JXA1-RCN-2009作为亲本毒株出现在12个重组事件中，重组体的年份从2010年延续到2018年。疫苗株Ingelvac ATP-US-2006与CH-1R-CN-2008作为次要亲本毒株出现在事件10中，该事件的重组体为广东2018年的毒株。在事件18和25中可以见到疫苗株之间的重组，但软件同时显示该事件可能是自然进化而非重组。该研究对广东猪场科学规范的使用弱毒疫苗有着一定指导意义。     

基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。     

用PRRSV大,小空斑变异株双重感染新生和三周龄仔猪的试验

现已证实,猪生殖——呼吸道综合征(PRRS)病毒(PRRSV)主要引起妊娠后期母猪胎盘传递感染,使胎儿随后发生死亡.有些胎儿出生时有病毒血症,或具有抗PRRSV特异性抗体.这些乳猪出生时常为弱仔,进而死亡,有的没多大健康问题而存活.在生产条     

2004-2009年河北省规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异分析

为了解河北省规模猪场PRRSV的变异情况,采用RT-PCR方法对2004-2009年采集的16个典型发病场的病料样本进行PRRSV Nsp2基因扩增、克隆和测序,利用DNA star软件分析所测序列。结果表明,从样本中扩增的16个Nsp2基因中,有8份均在第481位和533～561缺失30个氨基酸,有8份没有缺失。表明,危害河北省规模猪场的PRRSV已经发生了较大的变异,其中2004-2005年的属低致病性PRRSV毒株,2006-2007年的属高致病性PRRSV毒株,而2008-2009年这两种毒株在规模猪场中均存在。     

高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染的研究

应用RT-PCR技术对来自广东省某猪场患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪肺脏组织进行检测,结果初步鉴定为PRRSV高致病性变异株(YGhp株)与经典株(YGcl株)混合感染.进一步对2个毒株的NSP2基因进行序列分析,结果发现YGhp株与VR-2332、JXA1和Lelystad株的核苷酸同源性分别为75.1%、99%和35%,而YGcl株与上述毒株的同源性分别为99%、77.7%和34.5%,表明YGhp株为高致病性变异株,YGcl株为经典株,均属美洲型. 高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染属非常罕见.     

规模猪场PRRSV的净化

本文就某三点式布局的现代集约化猪场,在爆发PRRS后,利用对PRRSV的最新研究成果,结合国外的成功经验,因地制宜地制订了PRRSV清除程序。通过猪场的部分清群和全场清洗消毒,以较小的代价,成功地清除了PRRSV,为我国规模猪场的PRRS控制和净化,提供了宝贵的经验。     

重组N蛋白抗原检测美洲型PRRSV抗体间接ELISA方法的建立

利用表达纯化的PRRSV特异N蛋白抗原表位基因的重组融合蛋白作为抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。研究结果表明重组N蛋白的最适包被浓度为4.5μg/mL,最适包被条件为37℃1 h加4℃过夜,待检血清稀释度为1:40,HRP-兔抗猪IgG(1:1000)37℃孵育30min。经重复性试验、交叉试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高,与武汉科前ELISA试剂盒的符合率达93.2%。用已建立的方法检测2007年以前临床血清样本983份,总阳性率为48.6%。     

猪伪狂犬病毒Bartha株与变异株疫苗免疫后中和效价比较试验

通当前由于伪狂犬病毒变异株在全国流行,引起人们对疫苗选择的关注,产生是否换用疫苗的不同看法。为了给生产提供疫苗选择的参考,本研究选用某进口猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha株疫苗和某国产PRV变异株疫苗,分别免疫15头仔猪,经2次免疫后第3周采血清,检测血清中和效价,并对结果进行统计分析。结果显示,变异株疫苗免疫后中和效价明显高于该进口Bartha株疫苗。     

中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析

2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5％.为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演...     

对PRRSV快速分型的多重RT-PCR方法的建立与应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病性Nsp2变异株及其他相关病毒株进行敏感度和特异性试验。结果显示,所建立的多重RT-PCR对欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的RNA最小检出量分别为0.050 2、0.055 4、0.056 4ng,与CSFV、TGEV、JEV、SIV的核酸均无交叉反应。用该方法检测病料76份,结果PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的阳性率分别为0、7.89%和53.9%,未发现3型病毒间有混合感染的情况。检测结果与单一RT-PCR及RT-PCR检测试剂盒检测结果一致,高于病毒分离。     

猪伪狂犬病变异株及其疫苗的研究进展

猪伪狂犬病(PR)是由猪伪狂犬病病毒(PRV)引发的高致死率的一种急性传染病。PRV变异株的出现使得PR在全国范围内广泛流传,其发病特征和致病性也变得十分严重,并且现有疫苗起不到完全的保护作用。本文对PRV变异株的致病性、分子特征和分子基础及PRV变异株疫苗研制等方面的研究进展进行了综述,以期为PRV的防控和净化提供新思路。     

育肥猪群猪瘟(脾淋源)疫苗免疫抗体检测报告

育肥猪群分别在猪瘟(脾淋源)疫苗免疫第2次和第3次后21d,采血检测免疫抗体。结果表明,猪群第2次免疫后的抗体平均滴度在25.71,高于农业部规定的猪瘟抗体正向间接血凝试验抗体效价≥25的合格标准,且群体合格率为82.8%。第3次免疫后,猪瘟的抗体水平达到了28.24,且群体合格率为99.5%,远远高于农业部规定的合格率必须达到≥70%判定群体合格的标准。     

重庆地区PRRSV分离株ORF5基因变异分析

为了解重庆地区PRRSV流行毒株的遗传变异情况和分子流行病学背景,我们对2006～2008年分离到的重庆市内流行毒株进行OBF5基因序列的测定和分析。结果表明：本次分离的毒株的OBF5基因存在点突变,与2006年以来国内流行的变异毒株相比,OBF5基因的核苷酸与它们推导氨基酸序列同源性同源性达到98．2％～99．7％和98．0％～99．5％;从遗传进化以及变异情况看,重庆地区流行毒株与JXA1和HB-1（sh）／200Z同属美洲型中的亚群Ⅱ。     

猪多种疫苗分点同时注射的免疫抗体检测试验

试验采用口蹄疫、猪瘟和高致病性蓝耳病3种疫苗分点同时注射,以探讨是否会产生相互干扰。试验分为5组,每组30头,用ELISA方法和正向间接血凝试验检测免疫抗体,结果表明,口蹄疫、猪瘟和蓝耳病分点同时注射组产生的口蹄疫抗体在14d和21d达到最高值,且抗体水平高于单苗注射组;猪瘟抗体在28d达到最大值,较单苗注射组推迟了1周,蓝耳病抗体2个组在43d内,S/P值都在零以下,2个免疫程序对蓝耳病免疫抗体的生成时间和水平无明显差异。     

猪口蹄疫免疫抗体两种不同ELISA检测方法的比较

将5个规模化养猪场各20份猪血清样本分成5组用两种不同ELISA检测方法进行FMD免疫抗体检测,采用液相阻断ELISA方法检测的抗体合格率为63%,采用间接ELISA方法检测的抗体合格率为77%,两者差异显著。试验结果表明:(1)液相阻断ELISA的检测合格率明显低于间接ELISA的检测合格率;(2)运用液相阻断ELISA方法评价FMD免疫质量(不加强免疫),难以达到农业部所定标准,解决的最佳途径就是做好口蹄疫疫苗的强化免疫工作。     

实时荧光RT-PCR鉴别检测美洲型PRRSV及其变异株

本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑样品进行检测.结果显示,实时...