用物种专化DNA重复序列作分子标记检测导入小麦的大赖草染色质

ｐＬｒ ＮＡＵ３４４，ｐＬｒ ＮＡＵ４２６和ｐＬｒＮＡＵ６４７是我们新近从大赖草中克隆到的３个特种专化ＤＮＡ重复序列。它们都大量存在于赖草属，而小麦中却很少。Ｓｕｏｔｈｅｒｎ杂交证明，ｐＬｒＮＡＵ４２６和ｐＬｒＮＡＵ６４７对导入小麦的８条不同的大草染色体（其中３条携带有小平麦赤霉病抗性基因）和两条染色体臂部都有检测效果，据此可用其作为赖草属染色质的分子标记进一步研究和利用。     

结缕草属植物杂交后代的SRAP分子标记鉴定

相关序列扩增多态性（sequence—related amplified polymorphism,SRAP）是基于PCR技术的一种新型分子标记技术。本文通过SRAP分子标记技术对结缕草属植物种间杂交的5个组合44份杂交后代进行了真假杂种的鉴定,拟为杂交后代的进一步研究奠定基础。首先通过5个杂交组合的亲本材料分别筛选10对SRAP引物组合,然后应用具有父本特征带的多态性引物组合对各个杂交组合亲本及其所有后代进行PCR扩增、电泳。结果表明,5个杂交组合的44个杂交后代中有39个后代具有父本特征带,被鉴定为真杂种,其余5个后代因不具有父本特征带,被鉴定为自交种。杂种真实性的鉴定结果为杂交后代的进一步研究及应用奠定了良好的基础,本研究结果也表明SRAP分子标记技术是比较稳定可靠的标记系统,可有效应用于结缕草属植物杂种真实性的鉴定和遗传分析。     

利用叶绿体基因组SSR标记揭示薏苡属种质资源的遗传多样性

从分子水平研究国内外薏苡属种质资源的遗传多样性差异,为薏苡属种质资源的保护、发掘和利用提供依据。从38对cpSSR引物中筛选出33对多态性引物,对93份薏苡属资源的遗传多样性、群体结构和亲缘关系进行了比较分析。33对cp SSR共扩增出153个等位基因,每个位点等位基因数目3～8个,平均4. 64个,Nei's多样性指数(H)和Shannon's信息指数(I)平均为0. 368 8和0. 720 2,种质资源的遗传多样性丰富。野生和栽培类群之间遗传分化不明显,北方早熟生态型、长江中下游中熟生态型和南方晚熟生态型类群之间的遗传距离相对较近、一致度高,但是与国外类型的遗传差异大。小珠薏苡种和窄果薏苡种独立分支,表现出明显的分化差异;台湾薏苡变种、念珠薏苡变种、薏苡变种和薏米变种4个类群之间的遗传差异较小;种质遗传距离与地理距离不存在绝对相关性,而不同类群之间可能存在基因渐渗现象。     

等电聚焦同工酶电泳技术鉴定甘兰一代杂种纯度

等电聚焦丙烯酰胺凝胶电泳方法分析了京丰一号、中甘十一甘兰一代杂种及双亲幼苗的过氧化物同工酶,共分离出12条谱带,两个杂交组合F_1杂种与亲本间同工酶图谱表现出明显不同,均为互补型差异。在此基础上,我们开展了应用等电聚焦电泳技术对甘兰杂交种纯度的检测,并同时在田间进行验证性测定,酶谱纯度和田间纯度二者回归方程式为y=7.93 0.93x,相关系数r=0.96.对r进行t测验t=4.47>2.79(t_(0.01)=2.79,n=26),表明同工酶测定和田间测定结果之间存在着极显著的正相关关系。     

小麦抗白粉病生化标记--过氧化物酶pⅠ 6.1酶带

采用等电聚焦凝胶电泳比较了抗、感白粉病小麦品种的过氧化物酶同工酶酶谱,发现抗、感品种之间的叶片过氧化物酶同工酶pⅠ6.1酶带(位于过氧化物酶同工酶等电聚焦凝胶电泳酶谱pⅠ6.1)在拔节期至白粉病发生期表现水平有很大差别.抗病品种中编码pⅠ6.1酶带的基因终生正常表达,该酶带在小麦全生育期均有较强的活性,染色后着色深,多属一级酶带.而该基因的表达在感病品种拔节之后受到抑制,酶带变得模糊不清甚至消失踪迹,多为三级、零级酶带.感染白粉病之后酶活性才回升,再度表现为一、二级酶带.为了探索造成这一差异的原因,比较了119株抗病品种与感品种杂交F2代和65株抗病品种/感病品种//感病品种的BC1代植株叶片过氧化物酶同工酶IEF酶谱,证明感病品种成株的pⅠ6.1酶带活性下降是因另一隐性基因所至.     

利用RAPD标记研究燕麦属不同种的遗传差异

利用RAPD标记对我国8个燕麦种共21份材料的遗传差异及类群划分进行了研究。22个多态性引物在21个基因型间共扩增出114条带，其中97条带具有多态性，占85．1％。用这些条带计算了不同基因型间的遗传距离，发现各种间的遗传距离(0．053～0．510)普遍大于不同种内的遗传距离(0．022～0．087)。聚类结果显示，21份材料可划归为5大类群8个亚群，并与传统的分类结果基本一致。由此表明，用RAPD标记对燕麦进行遗传关系和分类研究是可行的。     

利用ISSR标记研究鹅观草属种质资源的遗传多样性

为进一步了解鹅观草属种质资源的遗传背景和拓宽牧草育种的遗传基础,科学指导鹅观草属种质资源的收集、评价和利用,利用ISSR(Inter simple sequence repeat marker)标记对鹅观草属20个种,6个变种,共60份材料进行了遗传多样性检测。结果发现,被测材料间ISSR标记的多态性较高,在20个引物中,有16个引物可扩增出清晰且重复性好的DNA片段,共产生125条DNA片段,其中104条具有多态性,多态性比率为83.20%;每个引物可扩增出6～10条DNA片段,平均7.81条,材料间遗传相似系数GS变幅为0.188～0.879,平均值为0.375;聚类分析表明,在遗传相似系数为0.441的水平上,60份材料可以聚为5类,属于同种、同组、同系的不同材料首先聚在一起,然后再与其他种的材料聚在一起,此外,材料的聚类还表现出一定的地域性规律。     

大白菜一代杂种及双亲幼苗的等电聚焦电泳过氧化物同工酶分析

等电聚焦电泳是近些年发展起来的分离蛋白质的有效生化技术．操作简便，分辨率高，电泳条带多而且细，信息量大，利于进行深入细致的研究。该文利用等电聚焦丙烯酰胺电泳方法分析了6个大白菜一代杂种及双亲幼苗的过氧化物同工酶电泳图谱，共分离出十几条酶带，F1杂种与亲本间同工酶图谱均表现出明现差异，特别是A鉴别区内的酶带差异最明显，大多为互补型，是主要鉴别区。进一步研究结果表明，6个大白菜品种均可利用过氧化物同工酶鉴别由自交引起的假杂种。利用这项技术大量开展了这6个品种的商品种子纯度检测工作，同时在田间进行了验证性测定，二者结果基本相符。     

蜜蜂属的生化鉴定

长期来世界上都公认蜜蜂属(Apis)只有四个种,即东方蜜蜂、西方蜜蜂、大蜜蜂、小蜜蜂.我们用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了上述四种和黑色大蜜蜂(岩蜂)、黑色小蜜蜂两个少见的种的酯酶同工酶,发现它们各具自己特有的酶谱.为此,我们从生化角度对蜜蜂属的分类提供了依据,证明蜜蜂属不是四个种而是六个种.     

菵草属及其近缘属叶下表皮微形态的研究

为了探讨菵草属的系统学位置,采用次氯酸钠离析法制作叶表皮装片,用光学显微镜对菵草属及其近缘属植物的叶下表皮微形态特征进行观察。结果显示:菵草属及其近缘属,燕麦族和早熟禾族植物的叶下表皮均为典型的狐茅型,具有较高的一致性。脉间长细胞大多为长筒形,细胞壁大多平直,少数波状弯曲;脉间区短细胞稀少或常见;脉上都分布有刺细胞或短细胞;气孔器大多为2~3列;副卫细胞为平行形,少数为低圆屋顶形。叶表皮微形态显示菵草属不应划入虎尾草族,早熟禾族和燕麦族没有明显的界限,支持早熟禾族和燕麦族合并为广义的早熟禾族,菵草属归为广义的早熟禾族。     

小麦微卫星引物对多枝赖草基因组DNA扩增的研究

用227对小麦微卫星引物对多枝赖草基因组DNA进行PCR扩增，共有81对引物有扩增产物，占所用引物的35．7％。这81对小麦微卫星引物涉及101个微卫星位点，覆盖了小麦全部7个部分同源群。其中有76对引物可在多枝赖草和中国春及丰抗13问扩增出多态性标记。这说明多枝赖草虽然和普通小麦亲缘关系较远，但小麦SSR引物还是可以在多枝赖草上应用的，这不仅拓宽了小麦微卫星引物的使用范围，更重要的是为使用小麦微卫星引物对普通小麦与多枝赖草远缘杂交种质材料进行深入研究奠定了基础。     

遗传标记在石榴种质资源研究中的应用

石榴属石榴科石榴属植物,具有较高的营养价值、药用价值和观赏价值。笔者从形态、细胞、生化和DNA分子等不同层面对遗传标记在石榴种质资源研究中的应用进行阐述,并对遗传标记方法的优缺点及存在的问题进行分析和探讨,最后提出了一些建议。遗传标记的应用,特别是分子标记的发展,将为石榴遗传多样性研究、亲缘关系分析、分类研究、品种鉴定、遗传图谱构建以及功能基因定位等相关研究开辟新的途径。     

多枝赖草基因组Mb级DNA制备和酶切方法的优化

Mb级DNA的制备和酶切是构建YAC,PAC,BAC,BIBAC和TAC文库与大尺度物理图谱的基础。以浓度0.4%(m/m)NaCl人工模拟盐池中生长的多枝赖草再生叶为材料提取细胞核,经钢丝细胞筛过滤,多次回收滤渣和离心上清中的细胞核,相差显微镜调浓度达108个/mL后,经LMP包埋,蛋白酶K降解核蛋白,脉冲电泳纯化回收后,在LMP胶块中2 Mb以上DNA的浓度约为250 ng/μL。在胶中经Hind III部分酶切再用脉冲电泳回收不同大小范围的DNA,电洗脱浓缩除盐后浓度约为25 ng/μL。用此方法得到的核DNA不但无细胞器DNA等的污染,而且浓度高,可直接用于各种人工染色体文库的构建。     

贵州百里杜鹃保护区杜鹃属4个主要种的遗传多样性分析

本研究利用20对SSR引物,对贵州百里杜鹃保护区杜鹃属4个主要种包括马缨杜鹃、露珠杜鹃、大白杜鹃和皱叶杜鹃共120份材料进行遗传多样性分析,以明确贵州百里杜鹃保护区杜鹃属4个主要种的遗传多样性水平与种群遗传结构。结果显示,(1)共检测到等位基因(Na)101.25个,有效等位基因(Ne)共48.457个,多态位点百分数(P)、Shannon's多样性指数(I)、观察杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和固定指数(F)平均值分别为96.25%、1.037、0.287、0.515和0.420;(2)种群间的遗传分化、基因流和分子方差分析(AMOVA)结果表明,4个种群的遗传分化系数(Fst)的平均值为0.133,基因流(Nm)的平均值为0.218;百里杜鹃保护区4个主要种的遗传变异主要来源于种群内(78%),种群间遗传变异为22%,与遗传分化系数结果一致;(3)UPGMA聚类、NJ聚类以及主坐标分析(PCoA)结果相似,将百里杜鹃保护区内的4个主要种聚为3大支。本研究的结果表明,大白杜鹃的遗传多样性最高;遗传变异主要来源于种群内;露珠杜鹃和皱叶杜鹃的遗传距离最小,遗传一致度最高。研究将为杜鹃属杂交亲本选配、良种选育和资源保护提供重要参考。     

石斛属植物SSR分子标记的研究进展

笔者综述了SSR分子标记在国内石斛属植物中遗传多样性分析、亲缘关系比较、指纹图谱和遗传连锁图谱构建、品种鉴定、种质纯度鉴定等方面的应用进展,从开发范围、开发深度与标准化应用3个方面分析了目前SSR分子标记在石斛属植物研究中存在的主要问题,并提出后期SSR分子标记开发应针对更多石斛属下组别和品种,结合最新三代测序技术挖掘性状关联标记,制定品种鉴定的国家或行业统一标准,以期为该标记在石斛属植物中的深入应用提供更多参考。     

分子标记在鸡遗传基础研究中的应用

分子标记技术已被广泛应用于遗传学、实验动物学及免疫学等研究领域中。在此,概述了分子遗传标记的种类及其在鸡中的应用情况。随着分子生物学技术的不断发展及鸡基因组测序的完成,分子标记必将不断改进完善,人们也将会不断地发现更为有效和便捷的分子标记技术应用于鸡的遗传及应用研究中。     

基于ISSR分子标记的5种杜鹃属植物遗传多样性研究

采用ISSR分子标记技术对5种杜鹃属植物山顶矮林优势种的遗传多样性和亲缘关系进行研究,探讨比较5种植物的遗传多样性水平和亲缘关系。结果表明,5条引物共扩增出131个位点,均为多态性位点,多态性位点比率(PPB)为100%;5种植物93个样本总的观察等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei’s基因多样性指数(H)和Shannona信息指数(I)分别为2.000 0、1.324 3、0.216 1和0.353 5。变色杜鹃与猴头杜鹃的遗传相似系数最大,为0.896 9。聚类分析将5种杜鹃属植物分为三个类群,变色杜鹃和猴头杜鹃为一类,井冈山杜鹃和光枝杜鹃为一类,云锦杜鹃为单独的一类,聚类分析支持变色杜鹃为猴头杜鹃的变种。5种杜鹃属植物的遗传多样性水平较低,ISSR分子标记技术可用于杜鹃属植物之间的遗传多样性和亲缘关系研究,可为杜鹃属植物的分类鉴定提供分子证据。     

锡林郭勒草原的冰草属植物

为了研究冰草属（ＡｇｒｏｐｙｒｏｎＧａｅｒｔｎ．）植物的遗传多样性,于１９９５年８月对内蒙古锡林郭勒草原进行了系统的考察,共采集冰草属植物４个种３２份材料。这些材料所生长的土壤、生态环境以及在形态上存在广泛的多样性,其中某些材料可作为小麦改良中抗旱、抗寒和耐盐碱的主要资源。观察了所有材料的根尖细胞染色体数,发现了２个新的倍性水平材料。     

应用等电聚焦电泳测定玉米种子的纯度

应用灵敏度、分辨率和重复性均较高的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)电泳测定150多种玉米自交系和90多种玉米杂交种的胚及幼芽的酯酶(EST)同工酶,通过对酶谱的比较和遗传分析,发现它们的酶谱各有特点,而且相互间又有很显著的差异,这些差异正是它们基因型差异的反映。因此,酶谱的特点及差异为玉米自交系和玉米杂交种种子纯度的鉴定从遗传和生化角度提供了科学依据。