茶多酚体内外抗流感病毒作用研究

研究了没食子儿茶素(Gallocatechin, GC)、表儿茶素(Epicatechin, EC)、表没食子儿茶素(Epigallocatechin, EGC)、表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate, ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate, EGCG)、原儿茶醛(Protocatechuic aldehyde, PAD)、原儿茶酸(Protocatechuic acid, PA)共7种茶多酚类物质在MDCK细胞中的抑制流感病毒活性。结果表明,EGCG和ECG具有显著的抑制病毒作用,对感染H₅N₁、H₁N₁和H₉N₂ 3种亚型流感病毒的MDCK细胞50%保护率浓度(EC₅₀)分别在0.04~0.11 mmol/L和0.05~0.07 mmol/L范围,其保护效果均优于阳性对照药利巴韦林（EC₅₀：0.41~0.53 mmol/L）。7种茶多酚类物质对流感病毒神经氨酸酶（NA）均有不同程度的抑制作用,EGCG和ECG对H₅N₁、H₁N₁和H₉N₂ 3种亚型流感病毒NA活性抑制浓度（IC₅₀）分别在0.03~0.14 mmol/L和0.34~0.69 mmol/L范围。茶多酚对NA的抑制活性大小与其细胞中对病毒的抑制作用基本一致,表明对NA的抑制可能是其抗流感病毒机制。本文还研究了茶多酚含量为85%的苦茶(C. assamica var. Kucha)提取物对感染流感病毒小鼠的肺炎抑制效果,结果显示,1 000 mg/(kg·d)苦茶提取物对感染H₉N₂亚型流感病毒BALB/c鼠肺炎有显著抑制作用(P﹤0.05),肺指数抑制率达37%。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卡莫司汀处理后张氏肝细胞DNA损伤的保护作用

采用MTT法、Cometassay(彗星实验)和流式细胞分析法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤的保护作用及其机制。结果表明:EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43.31μg/ml,当用无毒浓度25μg/ml和50μg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52.46μg/ml和46.65μg/ml。彗星分析结果表明EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9.07±5.48降为联用时的6.02±2.46。EGCG还能减小卡莫司汀所致张氏肝细胞的早期凋亡率,25μg/ml的EGCG和20μg/ml的卡莫司汀联合处理4、6h和24h时,早期凋亡率分别从4.53±0.64(%)、6.01±0.14(%)、2.27±0.32(%)降至3.04±0.47(%)、5.61±0.10(%)、1.14±0.23(%)。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的杀伤,其机理是它能减少这类药物引起的细胞DNA损伤,降低卡莫司汀所致细胞早期凋亡。     

氧化应激对Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用

研究了氧化应激对肾细胞Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用。用MTT、吖啶橙染色和DNA凝胶电泳等方法研究了H2O2和Cr6+应激对Vero细胞的损伤,及EGCG对凋亡细胞的保护作用及其机理。结果表明,H2O2和Cr6+剂量效应地抑制Vero细胞活性,IC50分别为175.6和9.8mgL-1;其中50 mgL-1 H2O2和400 mgL-1/2h Cr6+可诱导Vero细胞凋亡。0~60 mgL-1 EGCG有效抑制H2O2和Cr6+应激引起的细胞活性下降,且40 mgL-1 EGCG显著抑制细胞凋亡。对于Cr6+所诱导的细胞凋亡,EGCG的保护作用与EDTA和Vc的协同作用效果相当,表明清除活性氧和络合金属离子都有助于减轻Cr6+应激损伤。可见,EGCG通过清除活性氧和络合离子有效地保护了肾细胞免受应激损伤,这对易遭受活性氧损伤的肾脏无疑具有一定的临床价值。     

茶黄素双没食子酸酯的抗癌活性及其作用机理研究

以SephadexLH-20柱色谱分离得到茶黄素双没食子酸酯(TFDG)成分,以H1299和HCT-116细胞分析了该成分的抗癌活性及其作用机理。结果表明,TFDG具有良好的抑制H1299细胞生长的活性,IC50为25μmol/L;有调节细胞周期的活性,可增加HCT-116细胞G1期细胞的比例;有促进HCT-116细胞凋亡的作用,浓度为50μmol/L时效果显著,48h凋亡率达到40%以上;Western杂交技术分析结果表明,它可降低HCT-116细胞中促癌蛋白质因子Bcl-xL的表达量,可增加抑癌蛋白质因子Bax的表达量。     

EGCG对高糖培养的系膜细胞增殖及周期素激酶抑制剂P27的作用

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对高糖培养的系膜细胞(GMCs)增殖及周期素激酶抑制剂p27蛋白表达的作用。方法:以大鼠肾系膜细胞为实验对象,将GMCs分成6组,分别刺激48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定GMCs增殖情况,Westernblot法测定p27蛋白表达。结果:作用48h后,高糖明显诱导GMCs增殖并上调p27蛋白表达,不同浓度的EGCG能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制p27蛋白表达。结论:EGCG能抑制高糖诱导的GMCs增殖,并下调p27蛋白表达,提示EGCG可通过抑制p27表达而减少细胞外基质的积聚,延缓糖尿病肾小球肥大和肾小球硬化。     

EGCG抑制波罗的海希瓦氏菌生物被膜和腐败活性的研究

以海产品腐败菌波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)为对象,评价了儿茶素单体抑制生物被膜的效果,并分析效果最佳的单体对该菌生物被膜和腐败活性的影响。结果表明,5种儿茶素单体均能抑制S.baltica生物被膜形成,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)抑制率最高,其最小抑菌质量浓度为40μg·m L-1,亚抑菌质量浓度10~30μg·m L-1的EGCG对细菌生长无显著影响。在30μg·m L-1 EGCG作用下,群体感应(Quorum sensing,QS)信号分子呋喃酮酰硼酸二酯(Autoinducer-2,AI-2)、二酮哌嗪类化合物(Diketopiperazine,DKPs)cyclo-(L-Pro-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe)活性显著下降(P0.05),其抑制率分别为63.95%、27.43%和21.94%。亚抑菌浓度EGCG能显著抑制S.baltica生物被膜形成、泳动能力和蛋白酶活性(P0.05),呈现浓度依赖性,在30μg·m L-1时抑制率分别为55.18%,66.71%和46.67%。因此,EGCG在亚抑菌浓度下能够干扰S.baltica的QS系统,有效抑制生物被膜形成,减弱致腐能力,研究为EGCG作为新型的QS抑制剂调控食品腐败菌奠定基础。     

柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)的抑制作用研究

目的探讨柴胡总对胃癌(SNU-216)抑制作用。方法采用体外法培养胃癌(SNU-216),分别用不同浓度柴胡总皂苷(0.025μmol/L、0.050μmol/L、0.075μml/L、0.100μml/L)作用于体外培养的胃癌(SNU-216),分别在24、48、72h用MTT法检测胃癌(SNU-216)生长抑制率。结果柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)具有抑制生长作用,并随剂量增长抑制作用增强。实验组与对照组进行比较,有显著性差异(P0.001)。在药物的作用时间上, 24h以内作用较弱,48h以内是随着作用时间增加,抑制效率增强, 72h以内观察抑制效率亦有所增强,但与48h组比较抑制效率差异明显。结论不同浓度柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)细胞生长有抑制作用。     

茯砖茶中几种单体成分功效的高通量筛选研究

选择与降脂减肥作用相关的FXR、LXR、PPARδ、PPARγ及3T3-L1模型对从茯砖茶中分离制备的6个单体化合物进行高通量药物筛选研究。结果表明,各单体对所选模型均有活性。对于FXR激活模型,没食子酸(GA)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)在50μg/ml的初筛浓度时激活值分别达1.766和3.220;表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在10μg/ml和50μg/ml的初筛浓度时激活作用均较强,特别是50μg/ml的初筛浓度时,其激活倍数达6.000;对于PPARδ模型,此三种单体添加量均需达50μg/ml,作用才显著。在初筛浓度为30μg/ml时,没食子儿茶素(GC)对PPARγ模型的激活倍数达1.619;3-甲氧基-4,5-二羟基苯甲酸(MDBA)对PPARγ模型的激活倍数达1.734;3,4-二羟基苯甲酸(DBA)对FXR抑制值为3.641,明显小于对照初级胆汁酸鹅脱氧胆酸(CDCA)的抑制值6.435,因此其抑制模型的作用非常明显。以上试验结果说明此6个化合物均为活性化合物。     

茶多酚及儿茶素对前列腺癌细胞生长的抑制作用

前列腺癌是最常见的恶性肿瘤之一。茶多酚及其儿茶素单体对前列腺癌细胞具有明显的抑制和诱导凋亡作用 ,作用效果的 IC50 顺序为 88、97、112μM(EGCG>ECG>EGC) ,EC几乎没有作用 ,但含 EC的 TPS(茶多酚 )和不含 EC的 TPS存在差异 ,它们的 IC50 为 39μg/ m l和 4 3μg/ m l,且成剂量效应和时间效应关系。同时用荧光显微镜可以看到癌细胞的凋亡小体。     

SOD对表没食子儿茶素没食子酸酯抗肿瘤活性及稳定性的影响

采用MTT方法研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人结肠癌细胞HT-29、人乳腺癌细胞MCF-7和人宫颈癌细胞Hela生长的影响。通过检测培养基中乳酸脱氢酶的活力研究EGCG对三种细胞的细胞毒作用,用流式细胞仪检测EGCG对HT-29的凋亡影响,用HPLC方法分析EGCG在培养基DMEM/F-12中的稳定性。以上研究均设加入SOD和不加SOD两个对照组。研究表明：与没有SOD存在条件下相比,加入SOD后,细胞存活率下降,培养基中LDH活性增强,HT-29细胞凋亡率上升;EGCG在培养基中的稳定性增强。     

茶儿茶素对癌细胞凋亡作用的研究

本文研究茶儿茶素诱导白血病癌细胞凋亡的作用及其机理。结果表明 ,茶儿茶素 (包括EGCG ,ECG和EGC)在浓度超过 5 0 μg ml时促进白血病癌细胞的凋亡 ,并在 5 0～ 30 0 μg ml浓度范围内存在正的量 -效关系。茶儿茶素诱导癌细胞凋亡的可能机理之一是促进自由基的产生 ,并抑制癌细胞的抗氧化酶     

茶多酚中儿茶素类的HPLC分析方法学考察

本文建立了一种非梯度洗脱的儿茶素HPLC定性定量分析方法 ,同时对茶多酚中的四种主要儿茶素(EC ,EGCG ,ECG ,EGC)考察了其方法学。得到最佳色谱条件为 :ODS (5 μm ,4 6× 2 5 0mm)柱 ,以重蒸水∶乙睛∶乙酸乙酯 =86∶12∶2 (v v v)为流动相 (浓硫酸调pH值至 3 0～ 4 0 ) ,流速为 1 0ml min ,UV检测波长 2 80nm。探讨了分离测定条件并验证其精密度及方法的稳定性     

EGCG与锌离子互作对PC-3细胞能量代谢的影响

采用Hoechst33258荧光染色法观察EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+对前列腺癌PC-3细胞凋亡的诱导作用;采用HPLC法检测了EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+对PC-3细胞内腺苷酸(ATP、ADP、AMP)含量的影响,并分析了能量负荷(EC)和ATP/ADP比值。结果表明,Hoechst33258染色后正常细胞发出均匀微弱的蓝色荧光,细胞核未见异常,EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+处理后凋亡的PC-3细胞都发出较强的蓝色荧光,细胞核DNA断裂及染色体高度浓缩;EGCG、Zn2+及二者混合物处理后细胞内总腺苷酸含量、EC及ATP/ADP比值都下降,表明EGCG与Zn2+对PC-3细胞能量代谢都存在明显的抑制作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强卡莫司汀抗肿瘤作用的体外研究

采用MTT法及Comet assay(彗星实验分析方法)研究了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与卡莫司汀联用对人肺癌细胞A549的生长抑制率及DNA损伤的影响,结果表明：联合应用EGCG能降低卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀。卡莫司汀单用对人肺癌细胞A549的IC₅₀为187.46βμg/ml,当用无毒浓度25βμg/ml和50βμg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀分别下降为139.56βμg/ml和154.02βμg/ml。EGCG还能增强卡莫司汀引起的人肺癌细胞A549 DNA的损伤,彗星尾矩值由单用时的19.02±14.60上升为联用时的33.07±10.47。结果说明EGCG能增强卡莫司汀对人肺癌细胞A549造成的DNA损伤,从而增强其抗肿瘤活性。     

混菌发酵绿茶产脂肪酶及其对酯型儿茶素的水解作用分析

微生物的发酵作用导致黑茶加工过程中儿茶素的生物转化和总茶多酚含量的下降,这一转化过程的代谢途径和调控机制尚不清楚。通过添加冠突曲霉(Aspergillus cristatum)菌株PE-1和黑曲霉(A. niger)菌株PE-4混合发酵绿茶,采用鉴别培养基平板检测、酶活性测定和酶蛋白分离纯化,研究脂肪酶活性及其对酯型儿茶素的水解作用。两个菌株单菌发酵和混合菌种发酵绿茶条件下均可以检测到脂肪酶活性,混菌发酵酶活力高于两个菌株单菌发酵的酶活力。混菌发酵条件下获得一个分子量约为37 kDa的脂肪酶,对EGCG和ECG有不同的生物转化作用。UPLC检测结果表明,该脂肪酶对EGCG有较好的底物选择性,EGCG的水解率为94.46%,EGC的产率为63.33%;ECG的水解率为15.45%,EC的产率为4.15%。脂肪酶对EGCG和ECG的生物转化将为儿茶素代谢途径的研究和单体儿茶素的生产起到促进作用。     

EGCG抑制Nicotine诱导肺腺癌H1299细胞JAK2/STAT3 mRNA的表达研究

为探索EGCG对Nicotine诱导肺癌细胞增殖的抑制作用,本研究通过MTT实验筛选出EGCG、Nicotine对肺腺癌细胞H1299的最佳作用浓度,利用实时荧光定量PCR技术检测EGCG、Nicotine对H1299细胞中Bax、Bcl-2、Jak2和Stat3基因mRNA相对表达量的变化。实验结果表明,EGCG对H1299细胞的半抑制浓度IC₅₀值约为32βμmol·L^-1（24βh）、15βμmol·L^-1（48βh）;1βμmol·L^-1的Nicotine对H1299细胞促增殖作用明显;以15βμmol·L^-1的EGCG预处理H1299细胞24βh可显著下调1βμmol·L^-1 Nicotine的促增殖作用（P<0.05）。1βμmol·L^-1的Nicotine处理H1299细胞可明显降低JAK2/STAT3信号通路中Bax基因mRNA的表达,增加Bcl-2、Jak2、Stat3基因的mRNA表达;15βμmol·L^-1 EGCG预处理H1299细胞可反向调控Nicotine诱导所致JAK2/STAT3信号通路中Jak2、Stat3和Bax、Bcl-2基因表达量的变化,结果具有显著性差异（P<0.05）。由此可知,EGCG对Nicotine诱导的肺腺癌H1299细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路中促增殖基因mRNA的表达起抑制作用。     

儿茶素对dGMP羟基加合物的电子转移修复效应

用脉冲辐解动态研究技术，分析了由绿茶中提取的儿茶素对氧化型ｄＧＭＰ羟基加合物的电子转移修复效应。结果表明，ｄＧＭＰ中性Ｎ２Ｏ饱和水溶液在儿茶素存在下脉冲辐解后３１０ｍｍｄＧＭＰ－ＯＨ生长明显减慢，儿茶素酚氧自由基逐渐形成，儿茶素对ｄＧＭＰ－ＯＨ的修复速率常数依次是：ＥＧＣＧ为７．２×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＧＣ为４．７×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＣＧ为５．６×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＣ为２．９×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１。     

儿茶素与咖啡碱络合物的晶体学研究

通过高效液相色谱分析发现儿茶素和咖啡碱占绿茶乳酪总质量的88％以上.以乳酪中含量最高的两种酯型儿茶素和对应的非酯型儿茶素与咖啡碱络合建立绿茶乳酪简化体系CATs-CAF,发现4种儿茶素在沉淀中的分布比例为EC:ECG:EGC:EGCG≈1:2:1:2.选用ECG和EC分别与咖啡碱络合制备单晶,扫描电镜观察络合前后晶体的...     

儿茶素单体对小鼠急性高尿酸血症的作用

通过腹腔注射300 mg·kg-1氧嗪酸钾盐建立小鼠急性高尿酸血症模型,观察儿茶素单体对模型小鼠血清尿酸水平的影响;进一步进行血清、肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)活性实验和体外XOD抑制试验。结果显示,表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素(EGC)的灌胃剂量均为600 mg·kg-1时,在体内具有极显著降尿酸的作用,与模型对照组相比分别下降了23%(P0.001)、35%(P0.001)和37%(P0.001);ECG可降低小鼠血清和肝脏XOD活性,分别降低了31%(P0.01)和32%(P0.05);在体外ECG和EGCG具有抑制XOD活性的作用。因此,EC、ECG和EGC具有降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的作用,其中ECG的降尿酸效果与抑制小鼠体内XOD活性有关。