K88—LTB工程菌苗免疫母猪ERFC动态

用K_(88)—LTB双价基因工程活菌苗免疫妊娠后期母猪,然后用E玫瑰花环形成试验检测实验母猪外周血活性玖瑰花环形成细胞EaRFC和总玫瑰花环形成细胞的动态变化。结果表明:双价基因工程活菌苗可使母猪细胞总免疫反应增强,并大幅度降低其新生仔猪腹泻的发病率。     

K88菌毛及其在仔猪断奶腹泻预防制剂开发中的应用

K88大肠杆菌是引起仔猪断奶后腹泻(PWD)的主要病原.现有商业疫苗通过母猪免疫能有效控制新生仔猪大肠杆菌性腹泻,而对PWD却难以奏效.口服疫苗能诱导肠粘膜产生局部抗体,阻止致病性大肠杆菌的粘附,进而预防PWD.从分子水平认识K88菌毛及其受体的生物学特性,对口服疫苗的研制具有重要意义.文章概述国内外关于K88菌毛基本特性、蛋白亚基及受体的研究,就K88菌毛在PWD预防制剂研发中的应用的进展作了综述,并探讨分析了口服基因工程细菌疫苗和植物疫苗的前景.     

仔猪大肠杆菌K88抗原筛选鉴定方法

应用玻片凝集、琼扩试验、抗Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）证实所购３株大肠杆菌只表达Ｋ８８菌毛；该菌毛的特与资料报道的完全一致。通过比较上述３种方法的敏感性，本文还提出了筛选、鉴定Ｋ８８菌株的可行方法。用ＳＤＳ－ＰＡＱＧＥ分析该菌毛的粗提物表明其中含有一种分子量为２４０００Ｄａ的蛋白质，它可能就是Ｋ８８菌毛蛋白。     

贵州仔猪大肠杆菌分离物K88菌毛的鉴定

从贵州省７个种猪场发生腹泻的仔猪分离致病性细菌、对１６株病原细菌分离物进行了生化鉴定，１５株细菌符合然氏大肠杆菌的生化特征，其中１０株是普通大肠杆菌；５株是类大肠杆菌。两株细菌能在血琼脂平板上产生溶血素、两株细菌经抗Ｄ－甘露糖血凝试验表明能产生Ｋ８８菌毛；阳性率达１２．５％。本文还对Ｋ８８菌毛，肠毒素溶血素与仔猪大肠杆菌病的流行病学关系进行了讨论。     

产肠毒素大肠杆菌k88ac基因原核融合表达载体的构建

利用PCR技术扩增出菌毛K88ac基因片段,并将其插入到原核表达载体pET32a( )的多克隆位点上。测序结果表明:与Genbank中序列比对同源性达到99%以上,成功构建了原核表达载体。为进一步的研究工作,奠定了基础。     

仔猪腹泻大肠杆菌的药敏试验研究

试验用２２种抗菌药物，对７０株仔猪腹泻大肠杆菌进行药敏试验结果表明：抑菌作用最强的药物是氟哌酸、丁胺卡那霉素、妥布霉素和先锋霉素，其次为庆大霉素、新霉素和卡那霉素。     

大肠杆菌k88ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达及亲和层析纯化

利用PCR技术,从E.coli C83902中扩增出不含信号肽序列的K88ac菌毛蛋白亚基基因片段,将其克隆到表达载体pQE-30中,构建了原核表达载体pQE30-K88ac,并转入E.coli XL1-Blue中。经IPTG诱导后,由T5启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的以包涵体形式存在的K88ac蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化,并获得了高纯度的融合蛋白。     

大肠杆菌K99—F41基因工程亚单位苗对牛和羊的免疫试验研究

用大肠杆菌Ｋ９９－Ｆ４１基因工程亚单位苗对１１５５头怀孕母牛，１２２５只怀孕母羊进行免疫接种，所有接受免疫接种的怀孕母畜均无任何不良反庆，所产物畜均发育正常。免疫母年哄产特牛１１５０头，发生腹泻者６５头；死亡１２头，发病率为５．６５％，死亡率为１８．５％。与对照组（发病率为７６．２％，死亡率为５９．４％）相比，两组的发病率和死亡率均呈极显著差异（Ｐ＜０．０１）。免疫母羊共生羔产１２２６只，发生腹泻     

K88ac-STⅡ融合基因的克隆与测序

利用重叠延伸PCR技术将K88ac STⅡ融合基因克隆于T载体上,将重组基因质粒转化到受体菌DH10B中,蓝白斑筛选阳性菌落,通过PCR、NcoI/XcoI酶切后测序,与genbank报道的K88ac结构基因序列进行比对,证明所克隆的目的片段为K88ac STII融合基因。     

K88-K99-987P和K88-K99-F41佐剂苗对鸡免疫效果的比较

将猪致病性大肠杆菌K88-K999-87P和K88-K99-F412种混合菌液分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝和磷酸缓冲盐溶液)混合制成8种灭活疫苗免疫产蛋鸡4次,经水稀释、絮凝澄清、盐析及亲和层析制备特异性卵黄免疫球蛋白(IgY),用SDS-PAGE检测抗体纯度和分子量、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体滴度。结果表明,与氢氧化铝乳胶苗和水苗相比,弗氏佐剂苗和白油苗均能诱导并产生稳定、高活性卵黄抗体,免疫蛋鸡所制得抗体的滴度比未免疫蛋鸡分别提高32和16倍。IgY在温度低于60℃和pH值4~8时比较稳定,胃蛋白酶在不同pH下对IgY的活性影响显著。抑菌实验表明IgY能有效抑制大肠杆菌的生长。     

仔猪黄痢K88-K99-987p-F41多价菌毛混合油乳剂灭活疫苗的制备及小鼠免疫保护试验

根据我国仔猪大肠杆菌性腹泻流行的实际情况，用产菌毛粘附因子的野生分离菌株HN2001(K88ab)、HN2002(K88ac)、HN2003(K88ad)、HN2004(k99)、C83915(987p)及C83621(F41)提取菌毛制成5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗，5批多价灭活疫苗对小鼠的平均保护率达95.0％（38/40）。     

仔猪大肠杆菌性腹泻的病原检测与免疫防制

以江苏姜曲海种猪场的仔猪腹泻病症为研究对象,研究合成了检测肠毒素(ST1、ST2、LT1)、菌毛(K88、K99、987P、F41)以及耶尔森氏菌强毒力岛(high pathogenicity island,HPI)核心基因的特异性引物,用PCR方法对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)和HPI+大肠杆菌进行检测,并对致病性大肠杆菌的免疫防治进行了研究.结果表明:该猪场62.5%的病例存在HPI+大肠杆菌感染,12.5%的病例存在HPI+大肠杆菌及ETEC感染,仅有5%的病例与ETEC感染相关.取分离鉴定的2株大肠杆菌制备灭活抗原,并以氢氧化铝胶为佐剂免疫接种母猪,结果表明,其所产仔猪的腹泻发病率为15.2%,保护率高于仔猪大肠杆菌三价灭活疫苗.     

复方中草药煎剂预防仔猪腹泻效果试验

本试验选取中草药组方制成复方中草药煎剂,对仔猪进行灌服给药,用来预防仔猪发生腹泻,结果表明,添加了复方中草药煎剂组的仔猪发生腹泻的比例明显低于未添加复方中草药煎剂组,说明本方剂预防仔猪腹泻具有较好的效果。     

仔猪细菌性腹泻临床检查与治疗试验

根据在3个乡镇6个猪场进行实地诊断,通过对其进行了流行病学调查,对其疫苗注射检查、检疫管理、仔猪腹泻患病率、死亡率、发病原因、发病年龄、发病高峰期和防治效果进行了调查,针对仔猪腹泻的不同症状提出了两种不同的治疗方案,对腹泻仔猪治疗取得了一定的效果,从生理、病理、临床情况,应激反应、品种、环境等因素出发,全方位的分析了仔猪腹泻的原因和因素,从仔猪的自我免疫力、喂食的饲料、饲养管理等角度提出了预防措施,具有减少仔猪腹泻率和病死率的现实指导意义。     

中草药煎剂治疗仔猪腹泻效果对比试验

选取中草药组方,经煎煮法制成复方中草药煎剂,对断奶前后发生腹泻的仔猪用灌服给药方式来治疗仔猪腹泻,同时选取了乙酰甲喹注射液和环丙沙星注射液进行对比试验,探讨了中草药复方制剂治疗仔猪腹泻的临床治疗试验效果,结果表明:中草药复方制剂在治疗子猪腹泻方面有较好的优势,治愈率高,效果显著。     

仔猪腹泻大肠杆菌的药物敏感性试验研究

本试验用22种抗菌药物,对70株仔猪腹泻大肠杆菌进行敏感试验,结果表明:抑菌作用最强的是:氟呱酸(高度敏感菌株占100％)、丁胺卡那霉素(高敏、中敏菌占100％)、妥布霉素和先锋霉素_4(高敏、中敏菌均为94.28％),其次为庆大霉素(91.42％)新霉素(90％)和卡那霉素(88.57％)。