基因工程疫苗和动物克隆技术取得突破

我国在国际上第一个研制成功抗H5N1禽流感病毒的基因工程灭活疫苗和H5亚型禽流感重组禽痘病毒载体疫苗，自2005年批准生产以来，已在全国应用8.2亿只份。     

H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。     

中国防治禽流感药物研究取得重大突破

由农业部新兽药工程重点开放实验室研制的防治禽流感新制剂时前在华南农业大学P3实验室完成了活鸡人工感染H5N1亚型禽流感病毒治疗临床试验。结果表明，从中药材中提取的金丝桃素剥人工感染的H5N1亚型禽流感家禽活体具有百分之百的治愈率，对H9N2亚型禽流感病毒也有一定的抑制作用。     

天气炎热 蛋价上涨

由国家禽流感参考实验室负责研制的H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗、H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗已经取得成功，这两种新型疫苗目前已通过国家验收。新型疫苗能够彻底切断高致病性禽流感——H5N1亚型禽流感病毒通过水禽向家禽、哺乳动物和人类传播的传播链。     

我国研制成功高效禽流感疫苗

在农业部和科技部共同主持下，具有国际先进水平的新型高效的重组禽流感病毒灭活痉苗(HsN1亚型）和禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗，近日由农业部动物流感重点开放实验室研制成功。     

禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验

采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。     

禽流感HA7基因DNA疫苗的构建及免疫保护效果研究

为了研究禽流感HA7亚型DNA疫苗,将HA7基因插入高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA7,然后将pCAGGHA7以100μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,免疫SPF鸡后两周抗体水平达到3Log2,4周后用100 LD50的H7N1鼻腔途径进行攻击毒,发现100μg pCAGGHA7可形成8/8的免疫保护。表明禽流感DNA疫苗pCAGGH7诱导的保护性抗体免疫反应水平较高,能达到免疫保护效果。     

陈化兰:H5N1亚型禽流感疫苗的研究及应用

1996年,我国首次在广东病鹅体内发现H5N1亚型高致病力禽流感病毒.其后,在有关主管部门的领导下,我国兽医科学工作者开展了大量的禽流感主动监测和研究工作.通过系统研究发现,我国H5N1禽流感分离株的抗原性存在相对保守性,为使用疫苗防治该病提供了重要理论依据.     

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。     

重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的质量分析及发展方向

对主要用于我国高致病性禽流感防控的重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的种类和使用情况,以及国内高致病禽流感流行株的主要分支情况作一介绍。随着病毒抗原性的不断变异,疫苗毒株也需随之进行更换,因此必须使用匹配相应分支的疫苗才能取得理想的防控效果。目前国内重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的生产现状是共有10家生产企业,其中2个厂家采用悬浮细胞工艺生产,其余8个厂家均采用鸡胚工艺进行疫苗生产。笔者根据企业上报的产品批签发报告情况,以2016年至2017年农业部规定的高致病性禽流感强制免疫疫苗重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)为例,着重从疫苗的安全性和效力两方面对4家重组禽流感灭活疫苗生产企业共计488批次产品的批签发检验数据进行了质量分析。从Re-6株、Re-7株、Re-8株不同组分效价的比较可以看出,所有批次疫苗抗体效价几何平均滴度(GMT)至少高于国家标准1个滴度以上,而Re-6株和Re-8株组分抗体效价(GMT)高于国家标准2个滴度以上。虽然产品的效价都超过了国家标准,但抗体水平还是参差不齐,较高产品的3个组分抗体效价(GMT)比较低的要高出1.5个滴度以上。各生产企业产品批间差异较大,这虽有生产工艺不断成熟和优化的因素,但对于相近批次产品批间差异出现较大差异,则说明企业生产工艺并不十分稳定。4个企业在2017年生产的疫苗各组分抗体效价GMT整体水平均比2016年有所提高,说明生产工艺的不断成熟和优化,企业对产品质量的进一步严格把关。我国禽流感病毒灭活疫苗含有的甲醛和细菌内毒素是造成疫苗副反应的直接原因,因此通过生产工艺改进,降低疫苗中甲醛和细菌内毒素的含量,可以降低疫苗的副反应。核酸疫苗是当前禽流感疫苗研究发展的前沿技术,是现阶段禽流感疫苗硏制中最具理想前景的疫苗,也是禽流感疫苗研究的一大热点。另外,具有交叉保护性的广谱免疫原性的通用疫苗可以有效的解决抗原漂移这一难题,是现阶段流感疫苗研究的一个重要研究方向。     

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗对商品蛋鸡免疫程序优化

为优化商品蛋鸡场禽流感的免疫程序,掌握商品蛋鸡场H5亚型禽流感母源抗体的消长规律和不同首免日龄免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)疫苗的抗体效价消长情况,本试验将商品蛋鸡分成5组,1～4组为试验组,分别于7、10、14和21日龄免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗,第5组为空白对照组,...     

中草药复方制剂对禽新城疫及禽流感H5亚型免疫抗体水平的影响

[目的]探讨中草药复方制剂对禽新城疫及禽流感H5亚型免疫抗体水平的影响。[方法]通过测定中草药复方饲料添加剂对免疫禽新城疫及禽流感疫苗的鸡血清抗体水平,评价天然中草药饲料添加剂的使用价值,筛选最佳剂量。[结果]复方制剂I号和复方制剂Ⅱ号均能显著提高新城疫、禽流感的免疫抗体水平(P0.05),其中复方制剂I号效果优于复方制剂Ⅱ号(P0.05)。复方制剂I号能够有效延长新城疫、禽流感免疫抗体消长水平,其中中等剂量组(0.50 ml/kg)效果最佳。[结论]该研究可为中草药复方饲料添加剂的开发为提供一定的理论依据。     

重组禽流感疫苗对鸵鸟抗体效价消长的观察

1993年Allwright等报道在南非的一次临床暴发禽流感的鸵鸟中分离出禽流感病毒H7N1亚型,该毒株能引起鸵鸟发病,但对家禽,尤其是雏鸡无致病力。随后1995年Panigrahy等也报道从美国的食用火鸟和三趾鸵鸟中分离到禽流感病毒H5N2和H7N1亚型。P.H.J5rgensent等也报道在欧洲死亡鸵鸟病料的器官组织中分离出流感A型禽流感H5N2型病毒。虽然国内还没有鸵鸟相关病例的报道,但我国南方气候多变,同时又与高发禽流感疫情的东南亚国家相比邻,禽流感一年四季均可发生。鸵鸟属禽类杂食性动物,在防控不利的情况下,也会感染高致病性禽流感,死亡率也高,特别是雏鸟。本试验主要研究国产禽流感疫苗对非洲鸵鸟免疫效价的消长规律,以达到控制鸵鸟禽流感疫情的发生。挑选30只健康30日龄、体重相近的小鸵鸟,随机分成三个试验组,每组采用相同的饲养方法,采用不同疫苗免疫剂量。结果显示:三组分别注射1ml/羽、1.5ml/羽、2ml/羽不同的疫苗量42天后均可获得最高免疫效价,84天后尚有50%个体效价仍≥25,具有较强的免疫力。     

蛋鸡禽流感（H5）免疫效果的跟踪调查

自2004年以来,邹城市对禽流感（H5）实行强制免疫,并且免疫率100%,使用疫苗是重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）。为了追踪H5亚型禽流感疫苗的免疫效果及其免疫抗体（HI）消长规律,探索本辖区H5亚型禽流感灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）的免疫程序,     

禽流感H5、H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫效果评价

对采自成都市牧星蛋鸡场免疫鸡群的2943份血清样品进行了H5、H9亚型禽流感抗体免疫接种试验。结果表明,在2943份血清样品中,tt5、H9亚型HI效价≥410g2的样品数量分别为2455、2738份,免疫合格率分别为83-4％、93．1％,免疫后抗体高峰维持7log2以上的时间达63d以上。超过蛋鸡场免疫合格标准,可...     

H5N1禽流感病毒HA基因的重组腺病毒表达载体的构建

采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有HA基因的腺病毒pAd-H5。结果表明:含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-H5经PCR、双酶切及核苷酸测序鉴定无误。包装成功的腺病毒pAd-H5经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。     

表达载体pCAGGS显著增强禽流感DNA疫苗的免疫保护效果

【目的】将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入鸡β-actin启动子高效真核表达载体pCAGGS，构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA5，以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果。【方法】将pCAGGHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白，随之将pCAGGHA5及pCIHA5分别以100 ?g和10 ?g剂量一次免疫3周龄SPF鸡，4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击。【结果】间接免疫荧光法和Western-blot分析表明2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白，载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI；免疫SPF鸡后，100?g pCAGGHA5可形成5/5的免疫保护，100?g pCIHA5可形成2/4的免疫保护，10?g pCAGGHA5可形成对免疫鸡5/5的免疫保护，而10?g pCIHA5 则基本不能形成免疫保护，pCAGGHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5。【结论】鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平，增强免疫保护效果。     

我国成功研发对水禽有效的禽流感疫苗

中国农科院哈尔滨兽医研究所(国家禽流感参考实验室)研制的H5N2疫苗,在扑灭我国2004年暴发的高致病性禽流感中发挥了关键作用。近期,他们又自主研发出国际最新型的H5N1基因重组禽流感灭活工程疫苗,该疫苗对鸭、鹅等水禽也同样具有良好的免疫性,首次成功解决了水禽缺乏有效禽流感疫苗这一世界性难题,是目前全球唯一大规模应用的人类/动物流感病毒反向遗传操作工程疫苗,极大地提高了我国禽流感的预防控制能力和国际地位。目前已签订了向越南出口3.4亿羽份的合同。摘转自《中国农业信息》我国成功研发对水禽有效的禽流感疫苗…     

减毒沙门氏菌介导H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用研究

构建获得含有H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组真核表达质粒pCAGGS-HA。重组质粒电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组沙门氏菌SL7207(pCAGGS-HA)。重组菌SL7207(pCAGGS-HA)以5×109cfu的剂量2次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡后,再以油乳剂灭活疫苗加强免疫1次,并设立重组菌单独免疫组、灭活苗免疫组、空载体免疫组及空白对照组。联合免疫组和重组菌单独免疫组的小肠黏膜抗体效价与其他组之间存在显著差异(P<0.05),且两组的攻毒免疫保护水平与空载体组之间差异显著(P<0.05),其中联合免疫组的免疫保护率最高,达100%,而灭活苗免疫组保护率为80%,表明减毒沙门氏菌介导的H9亚型禽流感DNA疫苗与灭活疫苗联合应用具有良好的免疫协同作用。     

广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株（SS株）进行交叉血凝抑制试验（HI）及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗（SS株）进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值（R）,结果发现A/chicken/Guan...