姬松茸原生质体制备及再生条件优化

以姬松茸JS01为试材,通过单因素试验和正交实验,利用SPSS 22.0软件进行分析,对姬松茸原生质体的制备及再生条件进行优化,以提高姬松茸原生质体产量和再生率。首次通过在再生培养基中添加细胞壁前体物质及营养因子,进一步提高姬松茸原生质体的再生率。结果表明:原生质体最佳制备条件为菌龄7d,以0.6mol·L~(-1) KCl作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间4.0h,pH 6.0,在该条件下原生质体产量高达1.97×10~7个·mL~(-1);菌龄6d,以0.6mol·L~(-1) MgSO_4作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间3.0h,pH 6.5,再生培养基为GM时,原生质体的再生率最高,为1.12%。再生培养基中添加纤维二糖和维生素B_1后,再生率为1.17%,较优化结果提高了4.46%。该研究为姬松茸在菌种提纯复壮、原生质体诱变、原生质体融合育种、原生质体基因组重排等遗传学研究提供参考依据。     

松茸原生质体制备与再生的研究

本文针对酶种类及其浓度 ,酶解时间、渗透压稳定剂的种类及其浓度、菌龄及菌丝形态等对松茸菌丝原生质体制备与再生影响的研究。结果表明 ,采用三角摇瓶培养 3 d后、静置培养60 h的松茸菌丝体 ,在 3 0℃ ,p H6.5的条件下 ,以 0 .6M蔗糖为渗透压稳定剂 ,通过 2 .5 %溶壁酶、0 .5 %崩溃酶的复合酶进行2 .5 h酶解 ,松茸原生质体制备率与再生率最高     

平菇P16原生质体制备条件研究

以平菇P16菌丝体为底物,利用溶壁酶进行原生质体制备,考察菌丝培养条件及酶解因素对原生质体制备的影响,从而确定原生质体制备最佳条件。结果表明:原生质体制备的条件为菌丝培养采用MYP液体培养基培养3 d后更换新鲜的培养基继续培养2 d、国产1.5%溶壁酶30℃酶解4 h,在此条件下原生质体浓度达到10~8个/mL。     

姬松茸母种培养基的筛选

姬松茸是一种具有很大商品潜力和发展前景的食用菌新秀。本研究对姬松茸的母种培养基进行了筛选，结果表明，PDA综合培养基和麸皮浸出汁加富的PDA上生长最佳，可作为姬松茸母种培养基使用。     

姬松茸菌丝深层培养及氨基酸分析研究

姬松茸（ＡｇａｒｉｃｕｓｂｌａｚｅｉＭｕｒｉｌ）是一种美味的食用兼保健的食用菌。本文探讨姬松茸深层培养的条件并对菌丝体氨基酸组成进行分析。试验结果表明：选用３％玉米淀粉、２％蔗糖、０．５％酵母粉、０．３％ＨＫ２ＰＯ４、０．３％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ、１０ｍｇ／１００ｍｌＶＢ１的发酵培养基，在ｐＨ５～６的条件下发酵７天，菌丝体生长最佳。经测定菌丝体氨基酸含量丰富，且种类具全     

紫外线诱变对姬松茸菌丝体生长及生理生化特性的影响

用不同剂量的紫外线诱变姬松茸菌丝体,从诱变菌株中挑取生长较好的菌丝体进行传代培养,测定第五代诱变菌株和对照株菌丝体的蛋白质含量及POD、SOD酶的活性。结果表明:紫外线对姬松茸菌丝体的生长有一定的促进作用;综合蛋白质含量及POD、SOD酶活性可以看出:照射时间为4min的诱变菌株均表现出最大值,且很明显,为试验中最优的突变菌株。     

姬松茸4个品种菌丝体的生物酶活性测定

对本实验室保藏的4个姬松茸品种进行了菌丝发酵,以酪蛋白、PNPP和ABTS为底物测定了菌丝体细胞内的蛋白酶、磷酸酶和漆酶的活性。数据结果显示,被测定的4个姬松茸品种均具有磷酸酶的活性,其中姬松茸(巴西)的活性最高为48.1 U·g-1;蛋白酶和漆酶活性的检测中发现,只有姬松茸7号和姬松茸11号具有活性,其中姬松茸7号具有较高的蛋白酶活性(95.2 U·g-)1,姬松茸11号具有较高的漆酶活性(58.6 U·g-)1。姬松茸7号和姬松茸11号同时具有3种酶的活性,可以作为深加工的优势材料。     

松茸菌丝体分离的初步研究

本文应用改良的滨田氏松茸菌培养法对珍稀濒危的食用菌松茸进行了菌丝体的组织分离及孢子分离,获得了松茸组织分离纯培养菌丝体。比较了几种不同成分的培养基的分离效果,并对所获菌丝体的形态特征进行了初步研究。经２６代移种驯化,其中２表松茸组织分离菌丝体性状稳定,在改良的ＰＤＡ培养基上生产良好。     

姬松茸北方栽培技术

由于受气候制约北方地区 ,姬松茸栽培一直受到限制。笔者从福建省农科院食用菌所引种 ,针对国内外姬松茸栽培存在的问题 ,根据东北资源及气候特点 ,系统研究了姬松茸生物学特性、栽培条件、管理技术 ,进行了适应性驯化栽培和出菇试验 ,初步获得成功。1　生物学特性　姬松茸属中温偏高菌类。菌丝生长 10～37℃ ,适温 2 5～ 2 7℃。最适 ｐＨ6 .5～ 7.5 ,以料水比 1.0～ 1.4为宜 ,最适碳源为蔗糖 ,其浓度为 7% ,硫酸铵为最适宜的氮源 ,其浓度为 0 .3% ,子实体发育温度为 2 0～ 2 6℃ ,菌丝生长阶段不需要光 ,子实体生长阶段需少量的散射光。2…     

灵芝菌丝原生质体形成与再生的研究

本文探讨了灵芝 (Ganodermalucidum)菌丝原生质体的制备及再生的条件。实验结果表明 :采用MYG为灵芝菌丝培养基 ,2 %真菌溶壁酶 (Lywallzyme)作脱壁酶 ,0 6mol/L甘露醇作渗透压稳定剂 ;对培养 6d的灵芝菌丝在 30℃下进行酶解 ,酶解时间 4- 6h ,可产生约 3 0× 1 0 6个 /mL (0 1g菌丝 )原生质体 ,并在添加灵芝子实体浸出汁的双层培养基上实现了灵芝菌丝原生质体的再生。     

毛木耳原生质体制备与再生条件的研究

通过对毛木耳原生质体制备与再生条件的系统研究,确定了原生质体制备的最佳出发菌龄、融壁酶浓度、酶解温度及酶解时间、渗透压稳定剂种类、浓度及最佳再生培养基配方。     

苹果原生质体分离培养及植株再生

以悬浮培养细胞及叶片作为分离原生质体的起始材料 ,对影响苹果原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。优化的原生质体培养基为 :改良MT 维生素C 5mg/L BA0 .5～ 1mg/L 2 ,4 D 0 .2mg/L 蔗糖 0 .6 5mol/L 谷氨酰胺 50 0mg/L CH 10 0mg/L ME50 0mg/L ;以葡萄糖代替蔗糖作渗透压调节物质效果好 ,且在培养过程中不需降压 ;适宜的低密度培养 (0 .5× 10 5/mL)可减少褐变。悬浮系原生质体培养 5～ 6d出现第 1次细胞分裂 ,15～ 2 0d形成多细胞团 ,4 0～ 50d形成肉眼可见的小愈伤组织。经培养诱导出不定芽 ,并进一步诱导生根长成完整植株。获得了平邑甜茶、M2 6 、嘎啦 3种基因型的原生质体再生植株。     

香菇原生质体工程菌株的构建研究——I.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇(Lentinula edodes)菌丝细胞壁组成.并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养.研究发现:酶解过程中,菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来.合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证;原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程,再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起-哑铃状-分枝状等不同形态类型的再生阶段;再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合,栽培后未能结实,初步判断为单核菌株.     

蜜环菌保健饮料的研制

以蜜环菌菌丝体及其发酵液为主要原料,采用正交实验对稳定剂及饮料配方进行优化。结果表明:蜜环菌保健饮料的最佳配方为蜜环菌菌汁10%、蔗糖10%、柠檬酸0.3%,稳定剂CMC为0.15%。     

High-efficiency colony formation and whole plant regeneration from mesophyll protoplasts of Pelargonium × hortorum ‘Panaché Sud’

Summary

This study aimed to establish a plant regeneration system from protoplasts of Pelargonium hortorum, efficient enough to be used for further direct gene transfer experiments. A rapid and efficient system that allowed high efficiency colony formation (40%) and whole plant regeneration (83%), as well as rooting within 4 months, was established using mesophyll protoplasts of the cultivar ‘Panaché Sud’. Protoplast culture in liquid medium was found to be better than culture on solid medium both for cell division and colony formation. The optimum density for high colony formation (31-40%) from viable cultivated protoplasts was 3 – 5 10⁴ protoplasts ml^–1. Reducing the osmotic pressure and increasing the macronutrient and sucrose contents of the culture medium after the first week of culture facilitated the rapid development of colonies. The transfer of microcalli to mannitol-free callus-induction medium produced green calli in all cases. The highest frequency of bud and shoot regeneration from protoplast-derived calli (83%; 6.6 per callus) was obtained at a density of 3 10⁴, on medium containing 0.2 mg l^–1 indole-3-acetic acid (IAA), 1.0 mg l^–1 zeatin and 0.1 mg l^–1 thidiazuron (TDZ). The best results were obtained when the medium was gelled with Gelrite^® and cultures were maintained under low light (12 µmol s^–1 m^–2). Sixty-five percent of protoplast-derived calli underwent bud and shoot regeneration and 2.6 rootable plantlets were obtained per callus after 3 weeks on elongation medium. All acclimatised plants grew normally and gave fertile flowers. However, flow cytometry on 42 plants showed that 40 of these were tetraploids, and only two were diploids, like the mother plant. This protocol can now be used in transformation experiments and applied to other genotypes to improve regeneration.     

酿酒葡萄原生质体再生植株

将酿酒葡萄品种白诗南、梅郁的花丝接种在含６ＢＡ２．０ｍｇ·１－１、２,４－Ｄ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５诱导培养基上,诱导产生胚性愈伤组织。胚性愈伤组织经液体悬浮培养形成含大量胚性细胞团的悬浮培养物。用Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　　Ｒｓ２％、Ｐｅｃｔｏｌｙａｓｅ　Ｙ２３０．３％,５ｍｍｏｌ·１－１ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ、０．６ｍｏｌ·１－１甘露醇、０．３％葡聚糖硫酸钾、ｐＨ５．６～５．８的酶混合液从胚性细胞团分离得到原生质体。原生质体培养到第５天出现第一次分裂,４０ｄ形成上百个细胞的大细胞团,５０ｄ形成０．５～１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。这些小愈伤组织在含６ＢＡ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５分化培养基上分化出胚状体进而形成幼苗,在生根培养基上生根形成再生植株。     

‘过山香’香蕉原生质体培养及植株再生

 以'过山香'香蕉的胚性悬浮细胞（Embryogenic cell suspensions,ECS）为起始材料分离原生质体,酶解液的组成为：3.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10、0.15%果胶酶Y-23、204 mmol/L KCl、67 mmol/L CaCl2和0.41 mol/L甘露醇,原生质体产量为3.1×107个/mL PCV ECS （PCV：packed cell volume,细胞密实体积）。分别以培养基‘A’和‘B’为培养成分在液体浅层培养和看护培养两种培养系统中进行原生质体培养。结果表明：在液体浅层培养系统中,采用培养基‘B’比采用培养基‘A’效果好,原生质体的细胞分裂频率和细胞团形成频率分别约是采用培养基‘A'的3倍和10倍;所获得的培养物为只能增殖而不能进一步分化的非胚性细胞团。在看护培养系统中,采用培养基‘A’与采用培养基‘B’时,细胞分裂频率和细胞团形成频率没有显著地差异;所获得的细胞团具有典型的胚性细胞特征。将从看护培养中获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上,培养45 d后,从105个原生质体获得1550个体胚。继续在体胚诱导培养基上培养30 d,7.8%的体胚能萌发。萌发的体胚在MS+0.1%活性炭的培养基中发育成健壮植株,移栽后成活良好。     

AEC对金针菇菌丝生长和粉孢子萌发的抑制作用

在PDA培养基和基本培养基中添加不同浓度的赖氨酸结构类似物S(2-氨基乙基)-2’半胱氨酸(AEC)，观察其对金针菇IM02单核菌丝和金白1号双核菌丝生长及其粉孢子萌发的抑制作用。结果表明，AEC对金针菇IM02单核菌丝和金白1号双核菌丝生长的抑制作用显著不同。当PDA培养基中AEC浓度为2000mg／L时，对金针菇IM02单核菌丝生长速度的抑制率为56．4％；金白1号双核菌丝对AEC较敏感，AEC浓度为62．5mg／L时，金白1号双核菌丝生长完全受到抑制。当基本培养基中AEC浓度为1200mg／L时，对IM02单核菌丝生长速度的抑制率可达82．5％；而当培养基中AEC浓度为37．5mg／L时，金白1号双核菌丝生长完全受到抑制。当PDA培养基中AEC浓度为2000mg／L时，10d内未见金针菇IM02单核菌丝和金白1号双核菌丝产生的粉孢子萌发。本试验为金针菇高赖氨酸良种的选育奠定了基础。     

基于液态黑脉羊肚菌菌丝体培养基配方的研究

以菌丝体生物量为测量指标，筛选出黑脉羊肚菌液体培养基最佳碳源是可溶性淀粉，最佳氮源是酵母浸膏，采用正交试验方法筛选出黑脉羊肚菌液体最佳培养基配方为可溶性淀粉3％、酵母浸膏0．5％、MgSO4·7H2O 0．1％、KH2PO4 0．3％、VB110mg·L^-1。     

荧光标记紫孢侧耳和糙皮侧耳原生质体融合研究

异硫氰酸荧光素(FITC)标记的紫孢侧耳单核原生质体与未标记的糙皮侧耳单核原生质体经PEG融合后,在倒置显微镜下,用显微操纵仪直接吸取一方带有荧光另一方不带荧光的原生质体对,经培养后,根据“锁状联合”这一形态特征挑选出融合子,融合率为5.2×10~(-3).进一步鉴定结果表明,融合菌株的酯酶同工酶谱发生了明显的变化,其生物量和生长速度有不同程度的提高,子实体形态也与双亲有所不同.