适合荔枝样品几种内源激素的分析方法

结合自己几年来工作的体会,介绍了荔枝几种内源激素(ABA、IAA、GA、CTK)的提取纯化方法及其 HPLC、GC 的分析技术,以及应注意的关键问题.     

HPLC法检测果实组织中内源IAA、ABA方法的改进

以柑橘、猕猴桃、桃和葡萄果实为材料,在前人研究的基础上,结合近10年的研究积累,针对果实组织材料富含多酚类和色素等杂质的特点,对以往的HPLC分析植物内源激素的植物材料前处理方法进行了改进,并配合适宜的HPLC色谱条件,用于果实组织内源IAA和ABA的分析测定。结果显示该改进方法适合果实组织内源IAA和ABA的分析测定。     

高效液相色谱测定蓝莓叶片内源激素的方法研究

以贵州省主要栽培的兔眼蓝莓品种‘园蓝’叶片为试材,利用高效液相色谱仪(HPLC)建立一种同时测定蓝莓叶片中3种内源激素生长素(IAA)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)含量的方法。以Thermo U3000Syncronis C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱,流速为1 m L/min,进样量10μL,柱温为35℃,波长为254 nm,流动相A相为纯甲醇,B相为p H值3.2的冰乙酸水溶液[V(A)∶V(B)=5.5∶4.5]等度洗脱。结果表明,蓝莓叶片中3种内源激素的分离效率良好,IAA、ABA和GA3平均加标回收率分别为98.91%、95.64%、90.03%,相对标准偏差(RSD)分别为4.65%、3.11%、5.22%,为蓝莓内源激素的分离和测定提供了一种有效、准确的方法。     

超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用法同时定量荔枝果实组织中IAA和ABA

应用超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用仪(UPLC-MS/MS),探索建立同时定量测定荔枝中内源激素吲哚-3-乙酸(IAA)和脱落酸(ABA)含量的方法.设定IAA和ABA标准品测定所需色谱和质谱条件参数,比较不同抗氧化剂、提取剂、除色剂、萃取剂、提取方式、pH值调节对IAA和ABA的保留行为及富集效果的影响,确认适合...     

荔枝果皮多酚提取条件优化及其在果实成熟期间的变化

为优化荔枝果皮多酚提取条件并确定其在果实成熟过程中的变化规律,以淮枝品种荔枝果实为试材,通过正交试验法确定果皮多酚化合物优化的提取工艺,同时利用高效液相色谱（HPLC）法分析荔枝果皮中主要多酚的化学组成及果实成熟前后其含量的变化。结果发现,在本试验条件下,固液比3∶10、提取剂甲醇/丙酮（1/1,v/v）、提取剂浓度6...     

荔枝花芽分化期内源脱落酸的变化动态

为了寻求内源脱落酸与荔枝花芽分化的关系,本文研究了荔枝芽中脱落酸的提取、分离、鉴定技术和方法。通过纸层析、气相色谱和气相色谱—质谱联用技术鉴定证明,荔枝芽中存在脱落酸;应用气相色谱仪分别测定了大年糯米糍荔枝树花芽和小年树营养芽在不同分化期的脱落酸含量。结果表明,它们的变化动态有明显的差异。在花芽分化临界期和花序轴分化初期,大年树花芽的脱落酸含量稍有下降,而小年树营养芽的脱落酸含量迅速下降到一个比花芽低得多的水平;从花序轴分化期至雄蕊、雌蕊分化期,大年树花芽的脱落酸含量则明显高于小年树营养芽的含量。据此,初步认为内源脱落酸对荔枝花芽分化有促进作用。本文的结果可为制订促进荔枝花芽分化的栽培措施提供依据。     

黄肉桃果实中类胡萝卜素提取和测定方法研究

【目的】建立适于黄肉桃果实中类胡萝卜素有效提取和高效液相色谱(HPLC)快速测定的方法。【方法】在采用YMC-C30色谱柱,检测波长450 nm和柱温25℃的条件下,重点从提取料液比、提取方式和时间、液相测定的流动相配比、流速和进样量等方面研究了黄肉桃果实中类胡萝卜素提取和测定的方法,并对方法进行了评价。【结果】黄肉桃果实中类胡萝卜素以丙酮为提取剂,果肉与提取剂的料液比(g·m L~(-1))为1∶6,超声波避光辅助提取1 h;HPLC测定进样量20μL,以甲基叔丁基醚和甲醇(V/V=30∶70)为流动相等度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1)。本方法操作简单,类胡萝卜素提取效率高,HPLC测定回收率为95~105%,相对标准偏差(RSD)小于2.25%,稳定性良好,精密度高,用时短,成本低。【结论】优化所得方法适于黄肉桃果实中类胡萝卜素的有效提取和快速测定。     

UPLC-MS/MS法同时测定生菜叶片中五种植物内源激素

以有机生菜为试材,采用甲醇∶甲酸∶水=15∶1∶4作为提取剂,经过超声、离心、氮吹,DiKMA ProElut PXA固相萃取柱分离纯化后得到植物激素提取液,在38℃恒温水浴中氮吹浓缩干燥,甲醇作为复溶液进行复溶,得到植物激素待测液.采用ACQU-ITY UPLC BEN反相色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)对5种植物激素进行分离,流动相A为0.1％甲酸水溶液,流动相B为甲醇溶液,梯度洗脱,流速为0.30 mL·min-1,柱温为40℃;在液相色谱质谱联用多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析,外标法测定植物激素回收率.建立了应用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS),同时测定叶菜类蔬菜中赤霉素、生长素、脱落酸、水杨酸、茉莉酸5种植物内源激素含量的方法,并优化了生菜基质中激素的前处理方法、质谱色谱条件等.结果 表明:生菜在低、中、高浓度加标时,5种激素的加标回收率为60.15％～107.73％,且相对标准偏差均小于7.6％,检出限为0.30～0.52 μg·kg-1,定量限为0.68～1.56μg·kg-1.该方法快速灵敏,可适用于其它叶菜类植物中赤霉素、生长素、水杨酸、茉莉酸、脱落酸含量的检测,以期为叶菜类植物叶片中多种内源激素的同时检测提供了一个快速有效的方法.     

甜樱桃休眠花芽内源激素的高效液相色谱测定

以甜樱桃休眠花芽为试材，提取生长素(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米素(ZT)、玉米素核苷(ZR)和脱落酸(ABA)5种内源激素，通过设定不同的溶液配比，摸索出了适宜分离这5种内源激素的流动相及检测条件，得到了满意的分离效果。     

荔枝矮化品种的相关机制研究

为了揭示荔枝矮化品种的致矮机制,研究采用徒手切片法、组织离析法和石蜡切片法,观察了荔枝2个矮化品种和6个乔化品种的茎、叶解剖结构的差异;采用酶联免疫法和愈创木酚比色法,分别测定了8份供试材料的激素含量和过氧化物酶（POD）活性。结果表明,各供试材料的茎、叶解剖结构及叶片内源激素含量和POD活性均表现出一定的差异。其中,...     

荔枝三种结实类型内源激素的平衡与坐果机理

首次引入内源激素平衡[(1AA+GAs+CTK)/ABA]概念,比较分析了荔枝三种类型果实(大核、小核、无核)内源激素平衡的动态变化;揭示了无核果在花后3d相对高水平的生长促进类激素(IAA+GAs+CTK)及花后ABA水平的持续下降是其具有单性结实能力的主要原因;同时,揭示了坐果期低水平的IAA、GAs及相对较低的(IAA+GAs+CTK)/ABA值是小核品种严重生理落果的主要原因;并比较了荔枝果实各组成部分(果皮、假种皮、种子)内源激素平衡的差异,认为胚的正常发育对维持荔枝果实后期的生长发育有重要意义,是大核品种后期生理落果较少的内部生理基础。     

低温胁迫下PP_(333)对荔枝IAA、ABA、蒸腾速率和水势的影响

利用人工气候室模拟寒潮对荔枝进行低温胁迫处理,研究低温胁迫下多效唑对荔枝内源激素和水分状况的影响,结果表明,PP333处理明显提高了低温下的荔枝叶片脱落酸(ABA)水平,降低了吲哚乙酸(IAA)水平,叶片ABA/IAA处于高水平,并使叶片蒸腾速率(Tr)减弱,水势升高,叶片电解质渗出率减少。经受极端低温后,PP333处理的荔枝仍有较高的成花率。     

糯米糍荔枝裂果与内源激素变化的关系

以易裂荔枝品种糯米糍为材料,研究了果实发育前期（ 即果皮发育期） 裂果与正常果、裂果多与裂果少的植株果实内源激素变化,结果表明,在果实发育前期果皮中的细胞分裂素（ＣＴＫ） 、生长素（ＩＡＡ） 含量较高,说明果实发育前期果皮主要以细胞分裂、加厚生长为主。比较裂果多与裂果少植株上的正常果实,裂果多的树生长促进类物质（ＩＡＡ＋ ＧＡＳ＋ ＣＴＫ） 含量较高,果肉尤为如此。初步认为,裂果与内源激素变化密切相关。还讨论了内源激素比例与裂果的关系。     

苹果内源激素含量的变化与单果性状的关系

为了研究苹果内源激素含量的变化与单果性状的关系,以每个花序仅坐一个果的苹果品种澳洲青苹、瑞星和坐多个果的苹果品种瑞林为试材,测定了不同时期的中心花和边花的激素含量水平.结果表明,在花期,多果品种瑞林边花的生长促进类激素处于较高水平;其中GA3含量与中心花无显著差异,ZT含量比中心花分别高出23.8%~104%,IAA含...     

Spraying calcium is not an effective way to increase structural calcium in litchi pericarp

Calcium in different forms was compared in the pericarp of cracked and healthy fruit in the cracking-susceptible litchi (Litchi chinensis Sonn.) cultivar ‘Nuomici’. Incorporation of ⁴⁵Ca into the cell walls of the pericarp and effects of sprays of calcium chloride (0.2% or 0.5%) on endogenous calcium and cracking incidence were examined. The results showed that calcium concentration in cracked fruit was significantly lower than in healthy fruit. Structural calcium as part of cell wall components contributed to the majority of the difference in calcium concentration between cracked fruit and healthy fruit. Surface spray of calcium chloride, either once or three times at different stages of fruit development exhibited no significant effect on fruit cracking and hardly increased calcium, especially structural calcium in the pericarp. X-ray microanalysis revealed that the applied calcium remained on pericarp surface. Radioisotope test showed that less than 0.1% of ⁴⁵Ca applied on fruit surface was incorporated into the cell walls. It is suggested that spraying calcium on fruit surface is not an effective way to prevent litchi fruit cracking due to the difficulty in uptake of the calcium sprayed on fruit surface.     

荔枝果实感染霜疫病后的生理变化

人工接种霜疫病菌的荔枝果实感病后,病斑部位的果皮和距离病斑部位较近的果皮中■产生速率和MDA含量较高,而SOD活性较低;距离病斑部位较远的果皮中■产生速率和MDA含量较低,而SOD活性较高;邻近病斑部位的果皮中PPO、POD和PAL活性较高,而距病斑部位较远的果皮中PPO、POD和PAL活性较低。表明霜疫病菌的侵染对荔枝果皮中以SOD为核心的活性氧清除酶系统产生了破坏作用,导致SOD活性下降,使得自由基等活性氧与其清除系统之间的相对平衡被破坏,启动膜脂过氧化,膜脂过氧化产物MDA含量显著增加,造成对细胞的伤害,加速荔枝果实衰老和劣变。同时霜疫病菌侵染诱导荔枝果皮中POD、PPO和PAL活性增高,是加速荔枝果皮酶促氧化褐变的一个重要原因。     

海南部分荔枝种质的RAPD分析

 采用10个10碱基的随机引物，通过RAPD分析的方法，在分子水平上对海南30份荔枝种质进行鉴定、分类和亲缘关系分析。结果表明，大多数种质相似系数在55% ～80%之间，说明他们之间的亲缘关系较近；在相似系数为0.61的水平上，30份海南荔枝种质被分为4组，与以龟裂片特征为主要分类依据的形态分类有一定的相关性，但是RAPD分类比形态分类的分类范围更细。因此，传统形态分类不能完全反映出品种间的亲缘关系，有待结合RAPD分析方法进一步完善。     

正交试验法在龙眼和荔枝组织培养中的应用

利用正交设计试验法研究了椰乳（ＣＭ）、２，４－Ｄ、赤霉素（ＧＡ３）和蔗糖等四个因素及其组合对石硖龙眼和桂味荔枝的幼胚愈伤组织产生的影响，并讨论了正交设计试验法应用于龙眼和荔枝组织培养培养基筛选的可能性。结果表明：１）对龙眼，诱导愈伤组织的最优组合是 ＣＭ １０％、２，４－Ｄ１．０ｍｇ·１－１、ＧＡ３０ｍｇ·１－１和蔗糖３％；对荔枝，最优组合是ＣＭ０％，２，４－Ｄ１．０ｍｇ·１－１，ＧＡ３０ｍｇ·１－１和蔗糖 ５％。 ２）适当的 ２，４－Ｄ浓度（１．０ ｍｇ·１－１）可提高愈伤组织的产量；３）ＧＡ３抑制了龙眼和荔枝的愈伤组织的产生；４）不同树种的胚需要不同的糖浓度；５）适当ＣＭ浓度（１０％）可提高龙眼愈伤组织的产量，而荔枝愈伤组织的产生并不需要ＣＭ。     

焦核优质荔枝新品种‘草莓荔’

 ‘草莓荔’由广西实生荔枝优良变异单株后代中选育出，具有丰产、稳产、品质优等特性，平均单果质量27.5 g，可食率77.94%，焦核率97.0%；果肉蜡黄色，风味佳，可溶性固形物17.73%。     

荔枝败育胚S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的全长扩增和序列分析

 从荔枝‘桂味’的败育胚中提取总RNA，利用GeneRacer^TM Kit将RNA经去磷酸化反应、去mRNA的帽子结构及RNA Oligo连接，反转录合成cDNA，以cDNA为模板，分别用SSH分离得到的胚败育相关差异表达s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的部分cDNA序列(599 bp)设计出3’和5’端基因特异引物，进行PCR末端扩增。荔枝败育胚的s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因序列全长为1515 bp，编码393个氨基酸，与其它物种的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的核苷酸序列同源性在79%~82%之间，氨基酸序列同源性在88%～91%之间。结果表明所获得的基因为与荔枝胚败育相关的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因。关键词：