柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)感染鸡IgG生成细胞及血清IgG变化

为了探明鸡球虫保护性免疫机制,通过人工复制的鸡球虫病鸡,利用免疫组化技术和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),分别检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)初次感染雏鸡后,盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化,循环血液中特异性IgG水平的动态变化;雏鸡母源抗体的动态变化和不同抗体水平雏鸡的抗球虫能力.结果表明:(1)攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞早于第2～3d(d)开始增殖,在第9～12d达到峰值,随后即开始下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组.(2)雏鸡感染E.tenella后第6d即可在循环血液中检测到特异性IgG,于第18d达到峰值,第30d降至感染后第7d时的水平.(3)特异性母源抗体IgG水平高的雏鸡,抗球虫水平高.雏鸡母源抗体IgG水平随日龄增长逐渐下降,同时雏鸡的抗球虫水平也随之降低,母源抗体IgG水平与抗球虫能力有明显的正相关性.     

柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染鸡IgG生成细胞及血清IgG变化

利用免疫组化技术和Dot-ELISA，分别检测了雏鸡初次感染柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)后，盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化、循环血液中特异性IgG水平的动态变化、雏鸡母源抗体的动态变化以及不同抗体水平雏鸡的抗球虫能力。结果表明，（1）感染后2-3d，盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、肓肠扁桃体中的IgG生成细胞即开始增殖，9-12d达峰值，随后开始下降，盲肠扁桃体中IgG生成细胞数在22d时仍高于对照组；（2）感染后6d即可在循环血液中检测到特异性IgG，18d达峰值，30d降至感染后7d时的水平；（3）特异性母源抗体IgG水平高的雏鸡，抗球虫能力高，二者呈明显的正相关。     

柔嫩艾美尔球虫实验感染雏鸡体液免疫机制研究

本文通过人工复制的鸡球虫病鸡,利用免疫组化技术等方法,检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)初次感染雏鸡后,盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化。结果表明:攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞分别于第3、3、3、2d开始增殖,在第12、12、16、9d达到峰值,随后即开始下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组,且差异显著(P<0.05)。     

雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染与体内NO的生成

本实验研究了雏鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染与其体内一氧化氮生成的剂量-效应关系和时间-效应关系。在预试基础上，1日龄黄羽肉用雏鸡饲喂基础日粮2周后，随机分成对照组和0.5×10     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化

为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2～ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4～ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常     

外源性一氧化氮对鸡柔嫩艾美尔球虫的作用

用酸化亚硝酸钠作为一氧化氮(NO)供体处理新收取的柔嫩艾美尔球虫未孢子化和已孢子化卵囊,来探讨外源性NO对球虫卵囊的抑杀作用。另外通过内服亚硝基谷胱甘肽(GSNO)试验来观察外源性NO对球虫病的防治作用。结果表明,酸化亚硝酸钠溶液(pH=1)对球虫卵囊的孢子生殖具有明显的抑制作用,20mmol/L酸化亚硝酸钠溶液对卵囊孢子生殖的抑制率可达100%;但不经酸化的亚硝酸钠溶液和相同pH的盐酸溶液对卵囊的孢子生殖没有明显影响。经20mmol/L以上浓度酸化亚硝酸钠处理的孢子化卵囊也失去了对雏鸡的致病力,但直接内服GSNO溶液则没有明显的抗球虫作用。这提示外源性NO对鸡柔嫩艾美尔球虫未孢子化和孢子化卵囊均有抑杀作用,但直接内服没有明显的抗球虫病作用。     

雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫病理组织学动态变化研究

目的采用柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊人工感染雏鸡,在不同时间内观察临床症状及病理学变化。方法10日龄伊莎褐雏鸡分别口服艾美耳球虫孢子化卵囊5×104/只,每天观察临床症状、粪便及病死状况,并在接种后3、5、7、9、11、13、17、19、21 d各捕杀3只,进行剖检,观察各组织器官病理变化。结果被感染雏鸡4 d后出现食欲减退,精神萎顿;5~13 d可视黏膜、冠、垂髯苍白,消瘦、腹泻,血便排出,严重者粪便如水样带血或为全血,继而死亡。剖检,盲肠明显肿胀,出血严重,肠腔内有较坚硬的干酪样肠芯。病理组织学以出血、坏死性肠炎为特征,并在肠及肠腺上皮细胞内见有数量不等的裂殖体,盲肠扁挑体淋巴滤泡明显增大,淋巴细胞增生;15 d后受损肠粘膜渐渐修复,21 d盲肠基本恢复正常。结论雏鸡感染孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊后,盲肠损伤最为严重,具有典型病变。     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡血清凋亡蛋白的影响

为了研究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染对鸡血清细胞凋亡相关蛋白的影响，探讨柔嫩艾美耳球虫与宿主相互作用，将240只体重接近的7日龄海兰灰公雏鸡分为4组：A组为不感染不诱导凋亡组；B组为不感染诱导凋亡组；C组为感染不诱导凋亡组；D组为感染诱导凋亡组。诱导凋亡的处理方法是采血前2.5 h按6.4 mL/kg体重灌服40%酒精诱导凋亡，不诱导凋亡的处理则同时灌服与40%酒精等体积的生理盐水替代。于柔嫩艾美耳球虫感染（每只鸡感染1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊）后第24、48、72、96、120 h，每组抽取10只鸡心脏采血，制备血清，采用ELISA法检测血清中细胞色素C（Cyto-C）、半胱氨酸蛋白酶（Cas）-9、Cas-8、Cas-3、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Bcl-XL、BH3结构域凋亡诱导蛋白（Bid）的浓度。结果显示，感染后24、48、72、96 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均低于B组，感染120 h D组Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3的浓度均显著高于B组（P<0.05），感染24、48、72、96 h D组Bcl-2/Bax和Bcl-XL/Bid值均高于B组，感染120 h D组的Bcl-2/Bax低于B组，Bcl-XL/Bid值高于B组。说明柔嫩艾美耳球虫感染早期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的增加来抑制宿主细胞凋亡，感染中晚期通过Bcl-2/Bax值、Cyto-C、Cas-9、Cas-8、Cas-3浓度的降低促进宿主细胞凋亡。     

柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法，ＤＥＡＥ纤维素层析法，Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法，柱高８ｃｍ，直径２００μｍ的玻璃株柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ缓冲液作洗脱提纯子孢子，回收率为６４．１％，子孢子洗脱高峰期集中，且易于无菌操作，柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液，提纯子孢子回收率为６３．２％，但严格无菌操作困难，Ｇ３漏斗法易     

中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血T细胞亚群的影响

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4+T细胞亚群,以及CD8+T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,感染给中药组鸡CD4+、CD8+T细胞亚群数目及百分比(CD4+T/CD8+T)均高于感染不给药组,9d时,感染给中药组最高,分别为9.77和7.53,与感染不给药组差异显著(p0.05)。感染球虫组CD4+T/CD8+T比值均低于不感染组,感染给中药组在接种后第6d和第9d均高于感染不给药组。感染给中药组、不感染给中药组和不感染不给药组CD4+T/CD8+T平均值均在2-1之间,分别为1.11、1.33和1.25,而感染不给药组仅为0.93。     

柔嫩艾美耳球虫感染鸡的体液免疫机理研究

为了揭示鸡柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）病的免疫机制，试验从分子水平、细胞、亚细胞对人工攻毒病鸡特异性抗体、免疫细胞的动态变化及在抗球虫中的作用进行了探讨，试验结果如下：一是雏鸡感染E．tenella后，第6天即可在外周血液中检测出特异性IgG，于第18天达到峰值，第23天开始下降，第30天时降至感染后第7天的水平；二是揭示了雏鸡感染E．tenella后，鸡体IgG生成细胞的动态变化规律为：主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和盲肠局部的IgG生成细胞于第2天和第3天开始增殖，在第9天至第16天达到峰值，然后逐渐下降，盲肠扁桃体中的IgG生成细胞在第18天降至对照组水平，盲肠、脾脏和法氏囊中的IgG生成细胞数在第22天仍高于对照组，且差异显著。     

应用ELISA检测紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株虫苗抗体

将无球虫雏鸡随机分为2组,在9日龄和16日龄分别进行首免和二免。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗球虫抗体的变化情况。结果显示,雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势,并且在二免后第11天出现峰值(0.398),其后稳定地维持在较高水平;对照组抗体水平稳中有降。抗体水平动态变化表明,紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株有较强的免疫保护力。     

雏鸡感染柔嫩艾美尔球虫后鸡血清蛋白醋膜电泳分析

用 E.tenella卵囊感染雏鸡，通过醋酸纤维薄膜电泳检测 5种血清蛋白百分含量的变化。分别在感染后 3d和 7d进行采血检测。结果如下：试验组的蛋白 (％ )在感染后 7d显著低于对照组 (p<0.05）；试验组的α_1球司法部白（%）在感梁后7d比在3d显著下降（p<0.01）；试验组的γ球司法部白（%）在感染后7d极显著高于3d和对照组（p<0.01）。α_2球司法部白（%）在组间和组内无明显差异。     

人工感染柔嫩艾美耳球虫对雏鸡盲肠正常菌群的影响

在对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后6、8、13、20天,分别对感染雏与未感染雏盲肠内容物中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等8种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果发现在球虫感染第20天,感染组有益菌如乳酸杆菌的数量低于对照组,差异极显著(P<0.01),有害菌如梭杆菌、葡萄球菌数量感染组高于对照组,其中梭杆菌差异显著(P<0.05),葡萄球菌差异极显著(P<0.01)。     

球敌对鸡柔嫩艾美尔球虫秦皇岛株的效果评价

为评价球敌对鸡柔嫩艾美耳球虫秦皇岛株的效力,选择68只海兰褐公雏随机分成阳性对照组,阴性对照组,球敌1组(0.2mL/L水)和球敌2组(0.4mL/L水),每组17只鸡.在14日龄,除阴性对照组外,每只鸡接种1.2×105个柔嫩艾美耳球虫.结果表明,球敌1组和2组鸡的ACI分别为186.63和187.06,表明球敌属高效抗球虫药,且促生长作用显著,整个试验期内的增重分别比阳性对照组、阴性对照组提高65.16%(P＜0.01)、55.20%(P＜0.01),6.63%(P＞0.05)、0.21%(P＞0.05),并能显著缓解因球虫感染引起的Hb含量的下降,提高胸腺和法氏囊指数.     

NO对柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠粘膜大细胞及组胺的影响

将试验鸡分为5组，每组18只，除空白对照组外，其他组鸡均用柔艾美耳球虫（E.tenella)进行免疫和攻毒接种，其中3组分别给予氨基胍（AG），N^W-硝基－L－精氨酸甲酯（L－NAME）和L-精氨酸（NOS底物，L－Arg）处理，结果表明，血清中NO^-2浓度以AG处理组最低，L－NAME处理组和L－Arg处理组比空白对照组明显升高，但都显著低于免疫攻毒组（P＜0．05），AG处理组盲肠肥大细胞（MC）数与空白对照组无明显差异，而极显著地高于其他组（P＜0．01），免疫攻毒组盲肠MC数明显高于L－NAME处理组和L－Arg处理组，而L－NAME处理组与L－Arg处理组之间则没有明显差异，AG处理组鸡盲肠组胺（HT）含量极显著高于其他组（P＜0．01）；LAME处理和L－Arg处理组的HT含量差异不显著，但都高于空白对照组而你于免疫攻毒组。体外试验明，磷酸组织胺能够明显抑制伴刀豆球蛋白A对鸡外周血淋巴细胞的诱导增殖作用（P＜0．01），结果提示，E.tenella感染鸡盲肠MC数与HT含量之间未见明显的相关性，活化的MC或其分泌物HT和NO产生有一定抑制作用，另一方面，NO也可能抑制MC的增殖。     

鸡感染柔嫩艾美尔球虫后某些血清生化指标变化的研究

23日龄AA鸡36只均分为3组，第一组和第二组分别经口感染E.tenella卵囊35万／只和7万／只，第三组为对照组，对病鸡10项血清生化指标进行检测，结果如下：（1）血清葡萄糖含量在感染后5天（5天）和8天与感染前（0天）无显著差异（P＞0．5）。（2）血清总蛋白、白蛋白、甘油三酯的含量，天冬氨酸氨基转移酶、酸性磷酸酶的活性在5天均显著低于0天（P＜0．5），第一组所降的幅度较第二组大，其中总蛋白和甘油三酯含量在两组间的差异达到显著水平（P＜0．5）；甘油三酯含量和磷酸磷酸酶活性在8天继续下降，其他指标在8天都有不同程度回升。（3）两感染组的碱性磷酸酶活性和第一组的血清尿酸含量在5天显著高于0天（P＜0．5），到8天又回落。第二组尿酸含量在0天、5天和8天之间无显著差异。（4）球蛋白含量在5天和8天均显著高于0天（P＜0．5）。（5）胆碱酯酶活性在第一组的8天显著高于0天和5天（P＜0．5），在第二组的0天、5天和8天之间无显著差异     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

马杜霉素对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)超微结构的影响

将马杜霉素按 0 .0 0 0 5 %的比例混入饲料 ,作用于鸡体内柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella) ,透射电镜观察 ,发现裂殖体变小 ,内含裂殖子的数目减少 ,裂殖子膨胀变为椭圆 ,裂殖子间 (带虫空泡内 )微管结构模糊、膨胀 ,裂殖体中有髓鞘样结构出现 ;细胞膜外突和细胞质分离形成空隙 ,细胞膜有破损、结构模糊 ;细胞质出现空泡化 ,内部出现附加体和髓鞘样结构 ;少数细胞核的外膜外突和内膜分离 ,有的部位的核膜模糊、破损。裂殖子顶体结构发生异常变化 ,棒状体消失 ,微线数目减少或者消失。线粒体表现为形态改变 ,肿大变圆 ,或者变为马蹄形 ,内膜和嵴脱落 ,内部形成空泡、膜状结构、螺旋状或者髓样结构 ,线粒体的嵴与长轴平行排列 ,且贯穿线粒体。作者推测 ,抗生素类抗球虫药的作用机理可能是 ,通过使虫体结构的完整性受损 ,抑制虫体的物质代谢及能量代谢等生理机能 ,达到杀死虫体或者抑制虫体生长、发育和繁殖的目的。