生殖周期小鼠细胞免疫功能的探讨──外周血T细胞和子宫肥大细胞的观察

本实验用甲苯胺蓝染色法和非特异性酯酶染色法，分别探讨了小鼠生殖周期中子宫肥大细胞和外周血Ｔ细胞的消长情况。结果发现，以间情期为基准，无论是子宫肥大细胞数量，还是外周血Ｔ细胞数量，在发情期明显降低，妊娠期维持较低水平，临产前反弹，分娩后１ｄ减少（与发情期相当），分娩后２～３ｄ恢复间情期水平。发情期、妊娠期肥大细胞和Ｔ细胞的减少，有利于附植、妊娠，也可能是精子和胎儿不被母体排斥的原因之一。临产前反弹，揭示分娩时母体对胎儿可能发生排斥反应。     

猪子宫内膜肥大细胞消涨规律初探

雌性小型猪１５头，分为二月龄、间情期、民情前期、发情期、妊娠期等六组。颈动脉放血处死，取子宫组织，经甲苯胺改良法和免疫组化法染色，观察肥大细胞的动态变化。子宫内膜肥大细胞的数量随个体的生长而增加。在发情周期中肥大细胞的数量呈规律性的变化：在民情前期一时性地剧增，至发情期陡然降至显著低于间情期的水平，在妊娠期也维持低于间情期的水平。本实验的结果提示，子宫内膜肥大细胞的数量可能反映子宫局部的免疫水平。     

生殖周期小鼠子宫内膜上皮淋巴细胞的数量变化

应用甲苯胺蓝染色方法，观察了发情周期、妊娠期和分娩后小鼠子宫粘膜上皮内淋巴细胞的消长情况。与间情期相比，上皮内淋巴细胞的数量在发情前期减少，而发情期和发情后期又增加。妊娠 １ ｄ 数量较少，１４ ｄ 开始回升，１８ ｄ 的数量超过间情期。分娩后 １ ｄ 突然升高，随后又逐渐恢复。这些结果提示，上皮内淋巴细胞可能参与子宫粘膜免疫。     

绵羊妊娠期外周血T细胞及其亚群的观察

应用酸性ａ－萘酯酶（ＡＮＡＥ）组化反应标记绵羊妊娠期外周血Ｔ细胞，与间情期相比，Ｔ细胞总数和辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）无明显变化（Ｐ＞０．０５），而抑制性Ｔ细胞（Ｔｓ）明显增加（Ｐ＜０．０５）。间情期和妊娠期Ｔｈ／Ｔｓ分别为４．６７和２．６。结果提示，妊娠期羊可能通过增加Ｔｓ细胞来压低母体免疫水平。     

母猪性周期和妊娠期中外周血T细胞及其亚群的观察

用酸性α-萘酯酶(ANAE)组化反应标记外周血T细胞。与间情期相比,总T细胞的比率及其两个亚群(辅助性T细胞和抑制性T细胞)的比率在发情前期无明显变化;在发情期和妊娠期,总T细胞的比率显著降低(P<0.05),其中,辅助性T细胞亚群的比率显著降低(P<0.01),而抑制性T细胞亚群的比率显著升高(P<0.01)。表明在发情期和妊娠期,母猪的细胞免疫水平显著地低于间情期。     

绵羊妊娠期外周血T细胞及其亚群的观察

应用酸性α-萘酯酶(ANAE)组化反应标记绵羊妊娠期外周血T细胞,与间情期相比,T细胞总数和辅助性T细胞(Th)无明显变化(P>0.05),而抑制性T细胞(Ts)明显增加(P<0.05).间情期和妊娠期Th/Ts分别为4.6和2.6.结果提示,妊娠期羊可能通过增加Ts细胞来压低母体免疫水平.     

发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成素受体的表达变化

为研究发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成索受体(LHR)的定位及表达变化,笔者利用免疫组织化学SP法分别检测发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中LHR的表达,并进行光密度值分析.结果表明,LHR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和肌层平滑肌细胞中均有表达;腺上皮细胞、基质细胞和肌层平滑肌细胞中LHR在发情前期和发情期表达最弱,发情后期表达增加,间情期表达最强(P＜0.05);子宫内膜血管平滑肌细胞中LHR的表达在发情期最强,间情期最弱(P＜0.05);血管内皮中LHR在发情期和发情前期表达很强,发情后期和间情期显著下降(P＜0.05).结果表明LHR参与了发情周期不同阶段牦牛子宫功能变化的调控.     

犬正常发情期与患子宫蓄脓的子宫和卵巢组织结构及乳铁蛋白表达的对比

本研究旨在探明犬子宫和卵巢在正常发情期与患子宫蓄脓时，其组织结构及乳铁蛋白（lactoferrin，LF）表达的变化特征。应用Masson’s、VVG、PAS组织化学染色方法观察乏情期、发情期、患子宫蓄脓时犬子宫及卵巢的组织结构特点，用免疫组织化学SP法观察LF的分布特征。结果显示，正常发情期犬：乏情期、发情期子宫内膜肌层厚度比分别为0.762 0、0.924 3；乏情期子宫固有层中胶原纤维含量大于发情期，发情期卵巢中胶原纤维含量大于乏情期；子宫血管层及卵巢血管内弹性膜清晰完整；子宫腺在乏情期时浅层管腔小，深层较大、腺管上皮为单层柱状上皮、上皮细胞及管腔内PAS阳性反应较强，发情期子宫腺管腔变大、腺管上皮为单层立方上皮、上皮细胞及管腔内有PAS阳性反应；子宫黏膜上皮在乏情期和发情期均为单层柱状上皮，但胞核位置不同，乏情期胞核位于中央，发情期胞核位于顶部。患子宫蓄脓犬：子宫内膜肌层厚度比为1.615 0；子宫固有层和卵巢中胶原纤维含量少于正常发情期；子宫腺管腔大，且形状不规则，管腔内有炎性细胞浸润，腺管上皮为单层立方上皮，有淋巴细胞位于基膜，上皮细胞及管腔内PAS阳性反应较弱；子宫血管层及卵巢血管内弹性膜较正常发情期变薄，且有断裂现象；子宫黏膜上皮为单层柱状上皮，胞核位于基底。LF在乏情期子宫腺上皮和卵巢中的表达水平高于发情期，而在子宫黏膜上皮中发情期的表达水平高于乏情期。患子宫蓄脓时犬子宫和卵巢中LF的表达水平均较低。综上表明，犬正常发情期与患子宫蓄脓时的子宫和卵巢组织结构特点显著不同，LF的表达水平也存在差异。     

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚…

模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ），５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动，当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这     

雌二醇对大鼠子宫内嗜酸性粒细胞数量分布的影响

采用放射免疫法检测了15只处于发情周期不同时期（发情前期、发情期、间情期）的Wistar雌性大鼠和25只不同处理组（假手术组、卵巢摘除组、卵巢摘除＋20μg／kg雌二醇组、卵巢摘除＋100μg／kg雌二醇组、卵巢摘除＋500μg／kg雌二醇组）的大鼠血清中雌二醇浓度，并采用瑞氏一姬姆萨染色方法计数子宫内嗜酸性粒细胞（EOS）的数量。结果显示，大鼠血清雌二醇浓度在发情期最高，间情期最低。子宫内EOS数量在发情期最高，间情期最低。卵巢摘除后，血清中雌二醇浓度降低；补充雌二醇后，血清雌二醇浓度明显升高（P〈0．05）。卵巢摘除后子宫内EOS数量也明显降低；补充雌二醇后，EOS数量显著增加（P〈0.05）。提示，随着血清雌二醇浓度的升高，子宫内EOS数量呈递增趋势，也就是说，外源性雌二醇对子宫内EOS数量有直接的影响。     

小鼠子宫内膜凝集素结合特性的生殖周期改变

用４种酶标植物凝集素（ＣｏｎＡ,ＷＧＡ,ＳＢＡ,ＲＣＡ）作探针,研究了小鼠发情周期、妊娠期和产后子宫内膜上皮、固有膜细胞和腺上皮凝集素结合特性的变化。子宫内膜与这４种凝集素的结合,随发情周期而波动。与间情期相比,妊娠期子宫内膜上皮与ＣｏｎＡ的结合,由阴性转为阳性,并随妊娠的持续逐渐加强,产后又突然转为阴性。子宫内膜上皮与ＷＧＡ的结合,在间情期和妊娠１ｄ均为阳性,妊娠７ｄ减为弱阳性,继之又加强,产后达最强。无论妊娠期还是产后,子宫内膜上皮与ＲＣＡ的结合均为强阳性,与ＳＢＡ的结合均为阴性。结果提示,生殖周期子宫内膜与凝集素结合特性的规律性变化,可能与激素调节、胚泡的着床和分娩有关     

海南黑毛和牛发情周期中生殖激素分泌规律研究

本试验以发情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛为试验动物,采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定其血清中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)和孕酮(P4)的含量,对这些生殖激素的分泌规律进行研究。结果表明:FSH与LH分泌趋势基本一致,从发情期到妊娠期再到休情期呈现逐渐下降趋势;E2在进入妊娠期后分泌量显著减少,休情期时变化不大;PRL在妊娠期的分泌水平显著高于非妊娠期(P0.05);P4的分泌水平从发情期到妊娠期显著上升(P0.05),进入休情期逐渐下降。     

INHβB、FSHR和LHR在牦牛不同生殖生理阶段卵巢组织中的表达及差异性分析

为了从受体角度研究抑制素(INH)、促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)对牦牛不同生殖生理阶段卵巢发挥的功能,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白印迹技术(Western blot)和免疫组织化学技术(IHC)检测抑制素受体(INHβB)、促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在牦牛发情期、间情期和妊娠期卵巢组织中的表达和定位。结果显示,INHβB在妊娠期牦牛卵巢组织中的表达量显著高于发情期和间情期(P<0.05),而FSHR在发情期的表达量显著高于间情期和妊娠期(P<0.05),LHR则在间情期的表达量显著高于发情期和妊娠期(P<0.05);这3个受体主要分布在卵泡颗粒细胞、卵丘细胞、黄体细胞和卵泡膜上。结果表明,INHβB、FSHR和LHR在牦牛发情期、间情期、妊娠期卵巢组织中均有表达,但其表达量存在一定差异,提示INH、FSH和LH在牦牛不同阶段对卵泡生长发育、卵泡成熟、排卵及黄体的形成发挥着不同的作用,该结果为进一步研究牦牛生殖活动中INH与FSH、LH的互作机制提供参考。     

生殖激素对初情期牦牛子宫生长发育的影响

采用Elisa对10头发情期母牦牛和10头乏情期母牦牛进行24h内血液GnRH、LH、FSH分泌情况检测并对子宫进行组织切片制作,观察各腺体数量,分析生殖激素对初情期牦牛子宫生长发育的影响。结果显示:发情期24h内初情期母牦牛血液GnRH、LH、FSH分泌量明显高于乏情期母牦牛(P0.001)、发情期母牦牛GnRH、LH均呈脉冲式分泌;对子宫进行HE染色后发现,发情期母牦牛子宫内膜中浅层腺体、深层腺体数量均多于乏情期母牦牛(P0.05),但是扩张腺管数量少于乏情期母牦牛(P0.05)。说明GnRH、LH、FSH能够有效的作用于子宫,促进各腺体生长发育。     

小熊猫卵巢肥大细胞与雌性生殖干细胞的初步观察

为了解小熊猫卵巢肥大细胞分布情况,收集15只成体小熊猫的卵巢,按常规组织学技术制作组织切片。根据甲苯胺蓝染色结果,肥大细胞主要分布于血管壁与卵泡动脉外膜的结缔组织中,其数量随着发情周期呈规律性变化,发情期最高,乏情期次之,妊娠期数量最少,不同时期之间肥大细胞数量差异极显著(P0.01);阿尔新蓝-番红花红(AB-S)染色将肥大细胞可分为黏膜型、结缔组织型与混合型。肥大细胞可能对小熊猫的受精,胚胎着床,妊娠有调节作用。免疫组化染色显示,小熊猫卵巢有组胺阳性细胞,这些细胞分布也是随着发情周期呈规律性变化,卵母细胞和生殖上皮细胞呈现小鼠脉管同系物(MVH)阳性反应,说明小熊猫卵巢内存在生殖干细胞。     

精子膜抗原SA-30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响

用牛精子膜抗原SA 30免疫雌性昆明系小鼠 ,取小鼠子宫做常规石蜡切片 ,甲苯胺蓝染色检测子宫内的肥大细胞。结果表明 ,所有肥大细胞均位于子宫肌层 ,间情期时 ,SA 30免疫组和对照组子宫内肥大细胞在数量上无明显差别 (P >0 0 5 ) ;而妊娠第 3天的小鼠子宫中 ,SA 30免疫后肥大细胞显著增多 (P <0 0 5 )。提示SA 30免疫可能诱导妊娠早期小鼠子宫内的细胞免疫反应 ,从而导致生育力的下降。     

母猪围产期外周血LRT与SmIg~ BLP动态

采用ＰＨＡ诱导的淋巴细胞转化试验、葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）与Ｂ淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（ＳｍＩｇ）粘附试验，测定了１１头母猪分娩前后外周血不同时期的淋巴细胞转化率（ＬＴＲ）与ＳｍＩｇ＋Ｂ淋巴细胞百分率（ＳｍＩｇ＋ＢＬＰ）。结果表明，分娩前２１ｄ至分娩前６ｄ，母猪外周血ＬＴＲ一直维持在较低水平，说明妊娠后期母猪细胞免疫功能低下；分娩前１ｄ，母猪外周血ＬＴＲ升高，提示分娩的启动可能与母体细胞免疫功能增强，导致免疫排斥的发生有一定关系。分娩后，母猪外周血ＬＴＲ降低后又逐渐升高，至分娩后１０ｄ，ＬＴＲ已逐渐趋向正常，并一直维持到分娩后２５ｄ。母猪分娩前外周血ＳｍＩｇ＋ＢＬＰ一直维持在较高水平，分娩后逐渐下降，分娩后１５ｄ趋向正常。     

生产母猪助产技术

母猪的饲养管理是养猪产业非常重要的一个环节,关系到经济效益的高低,特别是母猪临产前的饲养管理及母猪的分娩接产更是重中之重。分娩是指母猪怀孕以后,经过一定时期,胎儿发育成熟,在母体各种因素的共同作用下,母体将发育成熟的胎儿及其胎盘、羊水从子宫排出体外的生理活动过程。母猪有双角子宫,产仔率高,是多胎性动物。其发情持续期18~21d,平均21d,每次发情期排出成熟卵泡8~15枚,与精子结合后,形成受精卵,附着子宫,逐渐发育成胎儿。在母猪生产过程中,及时对分娩母猪施行科学接产,有利于避免母猪难产的发生,保护生产母猪的安全与健康;有利于促进生产母猪体能恢复,提高母猪生产性能,促进养猪业的发展。     

瘦素及其长型瘦素受体在雌性小鼠体内的表达

采用免疫组织化学SP染色法对长型瘦素受体在雌性小鼠生殖周期不同阶段的下丘脑、卵巢、子宫中细胞定位和分布进行了研究,并用ELISA方法对小鼠血清中的瘦素浓度进行了检测。结果显示,下丘脑神经元胞质中有棕褐色阳性颗粒,且阳性细胞数量随妊娠日龄增加逐渐增加,妊娠期与间情期阳性细胞数差异显著(P0.05);在卵巢中,卵母细胞胞质中有长型瘦素受体表达,随卵泡的发育,卵泡细胞中免疫反应阳性细胞数量逐渐增加;在胚泡附植期,瘦素受体在子宫腺和子宫内膜上皮细胞中大量表达。妊娠期血清瘦素浓度均高于间情期,且瘦素浓度从间情期到妊娠4日龄,呈上升趋势,妊娠5日龄稍下降,后随妊娠日龄逐渐增加。结果表明,瘦素及其长型受体能够促进卵泡发育,有利于小鼠胚泡的附植。     

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。