鸡痘病毒载体研究进展

本文就鸡痘病毒作为基因工程重组疫苗的重要载体研究的进展作以综述，主要包括鸡痘病毒表达载体的构建，外源基因在重组鸡痘病毒中的表达及免疫效果，并对鸡痘病毒载体的研究及开发应用前景加以展望。     

鸡痘病毒分子生物学研究进展

鸡痘病毒是痘病毒科禽痘病毒属的代表种，鸡痘病毒可以作为病毒载体表达外源基因。许多研究者致力于研究其生物学特性和应用研究，本文就鸡痘病毒的分子生物学研究进展加以综述。     

一起麻鸡皮肤型鸡痘的诊断及病原分离鉴定

采用PCR检测、动物回归试验、病原分离鉴定、病理组织学观察和间接免疫荧光检测等方法,对一起疑似鸡痘病毒(FPV)感染的临床病例进行了系统的分析.结果表明:PCR扩增结果为阳性;将病料处理上清液经尿囊膜途径接种SPF鸡胚,可见尿囊膜上形成有灰白色突起的痘斑;将分离获得的病毒以背部接种1月龄的SPF雏鸡,感染雏鸡表现精神萎靡,食欲减退,在接种部位出现典型的痘疹,出现与自然感染病例相类似的临床症状;采集攻毒感染SPF雏鸡各组织器官进行病理组织学观察和IFA检测,仅在感染部位皮肤的胞浆内见有特异性的嗜酸性病毒包涵体及绿色荧光信号,而其他组织脏器未见有阳性反应.确诊该起病例为鸡痘病毒感染所致的皮肤型鸡痘.     

开产蛋鸡要防鸡痘病

鸡痘病的病原体是孢疹病毒，无论鸡的大小都易被感染，育成鸡患了鸡痘病会影响生长，产蛋鸡感染鸡痘病毒，就会影产蛋，严重的痘疹会使体温升高，喉头阻塞，继发感染，造成鸡的死亡．有关防治措施介绍如下．     

H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。     

表达马立克氏病病毒gI基因的重组鸡痘病毒的构建

以马立克氏病病毒 (MDV) 648株基因组DNA为模板 ,用PCR方法扩增 gI基因 ,将其插入到鸡痘病毒转移载体pFG1 1 75 1 ,通过脂质体方法转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用蓝斑筛选方法纯化 4次 ,得到重组FPV ,用PCR方法证实 gI已插入到FPV基因组中 ,以间接免疫荧光试验鉴定重组FPV在CEF中表达了 gI基因 ,重组FPV命名为rFPVMDV648gI。     

鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达

利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质 粒pVAX-env。将质粒pVAX--env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧光检测体内质粒表达。结果表明,成功构建了真核表达质...     

表达马立克氏病病毒gI基因重组鸡痘病毒的免疫原性

以鸡痘病毒为载体，构建含马立克氏病病毒（MDV）gI基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，并在鸡胚成纤维细胞（CEF）中表达gI基因，用重组FPV（命名为rFPV-MDV648gI）感染CEF，结果显示：rFPV-MDV648gI能在CEF中稳定复制。进一步用rFPV-MDV648gI接种无特定病原（SPF）鸡皮下组织，结果表明：鸡对rFPV-MDV648gI具有抗体反应性。     

猪瘟病毒E2基因重组鸡痘病毒的构建及免疫保护试验

应用PCR从pMD18-T-E2质粒中扩增编码猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白的基因片段,定向克隆到重组鸡痘病毒表达载体FPV-P11上,构建出重组鸡痘病毒转移载体FPV-pSY-E2.用脂质体将该质粒转染至鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,通过蓝斑纯化试验筛选出重组鸡痘病毒FV282-CSFV-E2.PCR证实E2基因已整合至鸡痘病毒基因组中.重组鸡痘病毒3次腹腔接种小鼠,ELISA检测血清猪瘟病毒抗体滴度为1:4096.给猪颈部和腹股沟皮下分点注射免疫3次,4周后用CSFV石门强毒株以100 LD<,50>接毒量攻击,结果保护率为75%.本试验为猪瘟重组鸡痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础.     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d，重组鸡痘病毒免疫组仅有13％～20％鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后，重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100％的保护率，而未免疫组全部死亡。结果表明：重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答，但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击，保护效果达到或优于目前应用的灭活苗，显示出良好的应用前景。     

共表达猪瘟病毒E0、E2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性

【目的】研究共表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2的遗传稳定性。【方法】将重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,取第5、10、15和20代重组病毒进行以下检测:用蓝斑试验鉴定各代重组病毒纯度;用PCR方法扩增猪瘟病毒E0、E2基因,进行基因序列分析;用间接免疫荧光实验检测各代重组病毒中猪瘟病毒E0、E2基因的表达。【结果】各代次重组病毒产生的蚀斑均为蓝色,表明病毒纯度稳定。从各代重组病毒DNA中均扩增出了约700 bp和1 200 bp的条带,分别与E0和E2基因片段长度一致,基因序列分析发现,第5、10、15代重组鸡痘病毒中的E0、E2基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有2处发生了点突变(即E0基因139位A→G,E2基因413位A→G),其编码的氨基酸也发生了相应变化(即E0蛋白47位Thr→Ala,E2蛋白138位Glu→Gly),但蛋白抗原表位未发生明显的变化。间接免疫荧光实验检测到各代重组病毒均能正常表达目的蛋白。【结论】重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上传20代以内,具有良好的遗传稳定性,插入的猪瘟病毒E0、E2基因能够正确稳定表达。     

鸡痘病毒和葡萄球菌混合感染的病原分离与鉴定

通过对四川雅安市某肉鸡场疑似鸡痘病毒与细菌病混合感染的病鸡材料进行病毒和细菌的分离,获得一株病毒和一株细菌。分离的病毒毒株通过半套式PCR鉴定为鸡痘病毒,细菌菌株通过革兰氏染色和生化试验鉴定为葡萄球菌。药物敏感性试验筛选出此葡萄球菌的敏感药物为丁胺卡那霉素。结合此病爆发的临床症状和流行病学特征,诊断为鸡痘病毒与葡萄球菌的混合感染。     

鸡痘的类型及治疗

<正>鸡痘又称鸡白喉,是由禽痘病毒引起的一种高度接触性传染病,一年四季均有发生,蚊蝇猖獗的季节尤甚,对幼鸡危害极大,死亡率达50%左右,主要通过皮肤或黏膜的伤口感染。根据其发病部位不同,应采取不同的治疗方法。     

鸡痘的防治技术

鸡痘是由痘病毒引起的鸡的一种急性、接触性传染病。主要发生于幼鸡．病情严重、死亡率高。本病主要是通过皮肤或伤口感染．蚊虫是造成鸡痘广泛流行的传染媒介。     

一例鸡痘的诊治报告

鸡痘是由鸡痘病毒引起的,在各个季节均有发生。健康鸡往往是因为与病鸡接触或啄食病鸡脱落的痂皮而被感染。患病鸡群病程长,免疫力下降,产蛋率下降,容易感染其他疾病,不仅影响生长,死亡率、淘汰率也高,给养鸡行业带来很大的经济损失。     

鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律

采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1～8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安伞性进行初步评价.在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化:抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同.表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好.     

传染性法氏囊病鸡各脏器组织含毒量的测定

采用反向间接血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验中方法对法氏囊病自然和人工感染病鸡各脏器、组织中含毒量进行检测。结果表明，反向间接血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ两种方法测得的结果呈正相关，法氏囊中含毒量最高，脾，肾次之，心脏，肌肉中较少。夹心ＥＬＩＳＡ能测出的最小限量为０．１μｇ，反向间接血凝试验的限量为１ｎｇ，人工口服感染３２ｈ就能在鸡法氏囊中检测到高滴度病毒。     

重组病毒环境安全试验

为检测重组病毒的环境安全性,将构建的重组病毒免疫小鼠、豚鼠、仔猪、犊牛,通过PCR、中和抗体、病毒分离培养等方法,对接种动物饲养环境中的水、土壤及粪便进行基因检测和病毒分离培养;将重组病毒分别与粪便、土壤、水等比混合后分别置于37℃、4℃、-20℃下,研究其存活能力.结果表明:重组鸡痘病毒饲养环境中的水、土壤、粪便中未检测出病毒基因,重组鸡痘病毒在自然条件下存活时间短,免疫重组鸡痘病毒的动物不能将病毒传染给亲密接触的同居动物,不会污染环境和威胁人类健康.     

浅谈鸡痘的防治

鸡痘是由鸡痘病毒引起的一种病毒性疾病。由于近年来鸡痘疫苗使用较好。本病毒属散发，很少有爆发型，本病发病率高，但死亡率低，常并发葡萄球菌等细菌型疾病。鸡痘病毒抵抗力较强，在上皮细胞屑中的病毒，完全干燥和阳光照射数周后仍能保存活力．冷冻干燥和50％甘油可使病毒长期保持活力，达数年之久。但游离的病毒在1～2％氢氧化钠或10％醋酸或0．1％汞中很快被灭活．在腐败环境中病毒迅速死亡。     

鸡痘与其他传染病混合感染的诊治

鸡痘是由痘病毒科的禽痘病毒引起,主要表现有皮肤型、粘膜型(白喉型)及两者混合感染型等。现将笔者在长春市吉林大学动物医院门诊中所接触到的鸡群爆发皮肤型、粘膜型