鸡痘病毒分子生物学研究进展

鸡痘病毒是痘病毒科禽痘病毒属的代表种，鸡痘病毒可以作为病毒载体表达外源基因。许多研究者致力于研究其生物学特性和应用研究，本文就鸡痘病毒的分子生物学研究进展加以综述。     

鸡痘病毒载体研究进展

本文就鸡痘病毒作为基因工程重组疫苗的重要载体研究的进展作以综述，主要包括鸡痘病毒表达载体的构建，外源基因在重组鸡痘病毒中的表达及免疫效果，并对鸡痘病毒载体的研究及开发应用前景加以展望。     

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽提，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲＩ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因筛选出３个复制非必需片     

表达MDV gB基因的重组鸡痘病毒的免疫效果研究

将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV疫苗免疫组比攻毒对照组病毒血症持续时间短 ;上述 3种疫苗免疫后用京 1株MDV(vMDV)攻毒 ,脾脏T淋巴细胞增殖反应处于较高水平 ,而攻毒对照组脾脏T淋巴细胞增殖反应减弱 ,两者差异显著(P <0 0 5 ) ;用HVT +rFPV二价疫苗免疫雏鸡 ,其抵抗vMDV攻击的免疫保护力高于HVT和rFPV单价苗 ,HVT +rFPV、rFPV、HVT免疫保护指数分别为 81 7% ,6 3 4 %和 6 4 1%。以上结果表明 ,表达MDVgB基因的重组鸡痘病毒疫苗在一定程度上能保护鸡体抵抗vMDV的攻击 ,并且HVT和rFPV具有免疫协同作用。     

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽捉，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲｌ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因（Ｐ１１一ＩａｃＤ筛选出３个复制非必需片段。为进一步构建表达外源片段重组质粒载体创造了良好的条件。     

表达马立克氏病病毒gI基因的重组鸡痘病毒的构建

以马立克氏病病毒 (MDV) 648株基因组DNA为模板 ,用PCR方法扩增 gI基因 ,将其插入到鸡痘病毒转移载体pFG1 1 75 1 ,通过脂质体方法转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用蓝斑筛选方法纯化 4次 ,得到重组FPV ,用PCR方法证实 gI已插入到FPV基因组中 ,以间接免疫荧光试验鉴定重组FPV在CEF中表达了 gI基因 ,重组FPV命名为rFPVMDV648gI。     

表达马立克氏病病毒gI基因重组鸡痘病毒的免疫原性

以鸡痘病毒为载体，构建含马立克氏病病毒（MDV）gI基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，并在鸡胚成纤维细胞（CEF）中表达gI基因，用重组FPV（命名为rFPV-MDV648gI）感染CEF，结果显示：rFPV-MDV648gI能在CEF中稳定复制。进一步用rFPV-MDV648gI接种无特定病原（SPF）鸡皮下组织，结果表明：鸡对rFPV-MDV648gI具有抗体反应性。     

用间接免疫荧光技术检测水稻细菌性条斑病菌的研究

本文报道了用于检测Xanthomonas campestris pv.oryzicola的间接免疫荧光技术。用兔抗X.c.pv.oryzlcola IgG处理标本,用羊抗兔免疫球蛋白荧光抗体染色,在荧光显微镜下观察。来自四川7个有代表性的X.c.pv.oryzicola菌株均为阳性反应,检测灵敏度为103～10~4个/ml。供试的X.c.pv.oryzae和X.1eersiae为阴性反应。检测四川40份稻种,选14份用间接法酶联吸附试验进行验证,结果趋向一致,证明间接法免疫荧光技术可以快速准确地检测稻种中的X.c.pv.oryzicola。     

鸡痘病毒和葡萄球菌混合感染的病原分离与鉴定

通过对四川雅安市某肉鸡场疑似鸡痘病毒与细菌病混合感染的病鸡材料进行病毒和细菌的分离,获得一株病毒和一株细菌。分离的病毒毒株通过半套式PCR鉴定为鸡痘病毒,细菌菌株通过革兰氏染色和生化试验鉴定为葡萄球菌。药物敏感性试验筛选出此葡萄球菌的敏感药物为丁胺卡那霉素。结合此病爆发的临床症状和流行病学特征,诊断为鸡痘病毒与葡萄球菌的混合感染。     

鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律

采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1～8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安伞性进行初步评价.在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化:抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同.表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好.     

鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致。克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白。     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d，重组鸡痘病毒免疫组仅有13％～20％鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后，重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100％的保护率，而未免疫组全部死亡。结果表明：重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答，但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击，保护效果达到或优于目前应用的灭活苗，显示出良好的应用前景。     

鸡传染性喉气管炎的研究：Ⅰ.应用间接ELISA法检测鸡传染性…

采用原代鸡胚肾细胞增殖鸡传染性喉气管炎病毒用ＰＥＧ－２００００粗提病毒蛋白抗原，建立了用来检测抗ＩＬＴＶ抗体的间接酶联免疫吸际试验。应用该法检测从广西９个大、中型鸡场采集的２３９份未免疫鸡血清样品，结果血清样品阳性率为４５．１９％，各个鸡场无     

健康鸡与病鸡识别法

在农贸市场选购鸡,如何识别健康鸡与病鸡,对避免经济损失十分重要,现介绍几种识别方法如下:一、看羽毛:健康鸡毛色光亮、鸡冠和肉垂鲜艳红润,全身羽毛柔滑紧贴匀称,触摸有柔软油滑之感觉。病鸡羽毛松乱、粗糙、无光泽、无柔软感,鸡冠和肉垂呈暗红色、苍白色或紫黑色。二、看神态:健康鸡精神充沛,体态丰匀、头脑灵活、声音宏亮、昂首挺立、动作敏捷、双脚暖和、食欲旺盛。病鸡精神萎顿、声音嘶哑、不吃食或少吃食、呆立、不愿行走,有的另蹲一边,头、翅     

用PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验诊断鸡传染性贫血的初步研究

利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针, 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性,阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增, 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）, 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性, 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明, 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。     

治疗鸡痘36法

鸡痘又称禽白喉，病原是禽痘病毒，为一种高度传染性常见多发病。一年四季均可发生，但蛋用鸡以秋冬两季最为流行。秋季皮肤型鸡痘居多，冬季白喉型常见。而肉用仔鸡以夏季为多见。病鸡因发病部位的不同，可分为痘疹型(也叫皮肤型)，白喉型(也叫粘膜型)和混合型。     

鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较

【目的】比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法（细胞爬片法和细胞滴片法）,以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法。【方法】以鸡胚为试验素材,分离原代细胞,定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞,并利用新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）lasota 株激活细胞。监测内源性蛋白 ROBO2（Roundabout）和外源性蛋白 NDV 表达情况,鸡源 NDV 抗体与小鼠源 ROBO2 单克隆抗体混合孵育,结合荧光素二抗进行标记。应用激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy, LSCM）对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据,多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法。【结果】细胞滴片制作过程繁琐且耗时长;细胞爬片则操作简单可缩短实验时间。两种制片方法的 NDV 和 ROBO2 单阳性和阴性分别存在极显著差异,双阳性存在荧光反应性显著差异。【结论】滴片法蛋白免疫反应性更优,适合标记目的蛋白进行亚细胞定位。爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性,利于两抗体荧光重叠,综合显色性更强。     

MDV感染鸡羽毛根病毒抗原和DNA的动态检测

１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。