不同培养基对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响

采用不同种类培养基栽培蛹虫草,以虫草素和腺苷含量为指标,筛选出培养蛹虫草的最优培养基。结果表明,最佳栽培培养基配方为3号培养基(大米40 g+纯柞蚕蛹),以3号培养基栽培获得的蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量均为最高,分别达到15 986.3 mg/kg和2176.5 mg/kg,与其它实验组结果的差异达到极显著水平。     

光条件对人工培养蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以蛹虫草菌株CM-16为研究对象,小麦为主要栽培基质,研究不同的光条件对蛹虫草的子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明,当光照度为150lx时,子座产量及2种有效成分质量分数均较高,此时子座产量(以干质量计)达到每盒52.66g,虫草素和腺苷的质量分数分别为4.56mg/g和2.11mg/g;光照时间为8h/d时,子座产量及虫草素质量分数较高,此时子座产量达到每盒54.30g,虫草素质量分数为4.41mg/g,光照时间对腺苷的积累影响不大;蓝光有利于蛹虫草生长和子座积累虫草素,但其他光质对子座中的腺苷的作用没有太大差异。     

加硒对蛹虫草主要活性成分含量的影响

[目的]明确不同加硒量对蛹虫草主要活性成分含量的影响。[方法]向固体培养基中加入不同含量的亚硒酸钠,接种培养后用高效液相色谱法测定虫草素和腺苷,用高碘酸钠法测定虫草酸,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖。[结果]虫草素在加硒量为5.5mg/kg时达到4.50mg/g,虫草酸在加硒量为4.0mg/kg时达到30.06mg/g,腺苷和虫草多糖含量与加硒量无明显相关性。[结论]加硒可显著提高蛹虫草固体培养物中虫草素和虫草酸含量,但医疗保健功效的提高还需通过动物试验加以验证。     

以虫草素和腺苷含量为指标优化蛹虫草人工栽培

为提高人工栽培蛹虫草中主要活性成分的含量,以虫草素和腺苷含量为检测指标进行蛹虫草优化栽培研究,在采用Cm-1菌株、以20%豆粕为氮源、水料比为1.4的条件下,可获得子实体产量为每瓶42.2 g、子实体中虫草素含量为4.46 mg.g-1的栽培效果,虫草素含量超过了以蚕蛹为寄主的蛹虫草(2.83 mg.g-1),表明植物蛋白完全可以用作栽培蛹虫草的氮源,同时证实采收子实体后的培养基中仍含有大量虫草素,可作为提取虫草素的原料。     

不同配方下固体培养蛹虫草活性成分含量比较

以蚕蛹、黄豆、玉米糁、蛋白胨为原料固体栽培蛹虫草,研究不同配方培养基对蛹虫草虫草素、腺苷、多糖、虫草酸含量的影响。结果表明,配方5下蛹虫草虫草素含量最高,配方1下腺苷含量最高,配方4下多糖、虫草酸含量最高,在纯蛹培养基中添加适量黄豆、玉米糁、蛋白胨有利于蛹虫草活性物质的提高。     

蛹虫草主要成分虫草素、腺苷提取方法对比

利用前期加速溶剂萃取法提取腺苷、虫草素的优化结果,分别挑选最优处理进行试验,即提取腺苷最适条件为温度70℃、时间10 min、乙醇含量20%、循环2次,提取虫草素最适条件为温度100℃、时间15 min、乙醇含量0%、循环2次。并将该方法与水热回流法、醇热回流法、超声水提法、超声醇提法4种传统方法进行比较,结果表明,加速溶剂萃取法明显优于其他传统4种方法,各个方法之间差异达显著水平(P<0.05);加速溶剂萃取法提取腺苷效果最好,提取量为2 118.07μg/g,提取效果最差的是超声波醇提法,提取量仅有180.72μg/g;加速溶剂萃取法提取的虫草素量为19 678.70μg/g,超声波醇提法提取虫草素效果最差,提取量仅有4 108.27μg/g;加速溶剂萃取法有其明显的优势,操作简单、方便快捷。     

不同种类氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响

[目的]研究液体培养基中添加氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响,并确定8种氨基酸最佳添加浓度。[方法]考察24种氨基酸(添加浓度为1 g/L)对虫草素含量的影响,采用DPS V18.10软件进行差异显著性分析,并对促进虫草素合成作用显著的8种氨基酸添加浓度进行研究。[结果]L-赖氨酸、L-半胱氨酸、L-精氨酸、L-天门冬酰胺、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、肌氨酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量具有不同程度的提高作用;4 g/L的L-甘氨酸对虫草素的合成促进作用最强,发酵液中虫草素含量为1 022.25 mg/L。[结论]该研究为蛹虫草液体发酵生产虫草素提供参考依据。     

蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培的探索

以不添加废弃培养基的普通栽培的蛹虫草为对照,研究蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培对于蛹虫草子实体鲜质量、虫草素及腺苷含量的影响。结果表明:与对照组相比,废弃培养基添加量为10%、20%、30%时,蛹虫草子实体鲜质量高于对照组,但无显著差异;废弃培养基添加量大于30%时,蛹虫草子实体鲜质量则低于对照组,差异显著;虫草素含量则随废弃培养基添加量的增加而逐渐提高,腺苷含量与对照组相比也有所升高,当废弃培养基添加量为100%时达到最高;虫草素含量比对照组提高2.10倍,腺苷含量比对照组提高1.75倍。     

蛹虫草活性成分分析

本研究对实验室分离的虫草菌种进行了鉴定,确定其为蛹虫草,经测定其主要活性成分为虫草多糖11．870g／100g、虫草素0．33g／100g、虫草酸9．9g／100g,含量均高于天然冬虫夏草。     

不同添加物对蛹虫草液体发酵虫草素的影响

为探讨8种微量添加物(维生素B1、核黄素、烟酰胺、腺嘌呤、D-泛酸钙、叶酸、钴胺素以及甘氨酸与腺嘌呤混合物)对蛹虫草菌发酵液虫草素产量的影响,筛选提高虫草素产量的最佳方法,将不同质量浓度的微量添加物单独加入蛹虫草液体发酵培养基中,以HPLC法测定发酵液的虫草素产量。结果表明:甘氨酸和腺嘌呤的混合物、腺嘌呤、核黄素、D-泛酸钙均能显著促进虫草素的生物合成,适宜添加质量浓度为:甘氨酸14g/L和腺嘌呤2g/L的混合物、腺嘌呤2g/L、核黄素1g/L、D-泛酸钙2g/L;维生素B1和钴胺素均能促进虫草素的生物合成,适宜添加质量浓度均为2和2g/L;而烟酰胺和叶酸均抑制虫草素的生物合成。其中,添加甘氨酸14g/L和腺嘌呤2g/L的混合物对发酵液虫草素产量的提高作用最显著,比对照提高了103%。当甘氨酸与腺嘌呤的质量浓度比为7∶1时,两者通过协同互补过程促进虫草素合成的作用最为显著;此外,本研究认为甘氨酸和腺嘌呤分别由从头合成和补救合成途径共同促进了虫草素的生物合成。     

人工栽培蛹虫草虫草素含量HPLC检测方法研究

应用高效液相色谱法检测蛹虫草子实体及其固体培养基中的虫草素含量,优化了样品前处理条件,色谱柱为MP-C18 (4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为V(甲醇):V(水)=15:85,流速1 ml/min,柱温25 ℃,样品回收率范围为95.1%～104.2%;同时对比使用3种不同的培养基(大米、小麦、蚕蛹粉)栽培的蛹虫草子实体中虫草素的含量,结果表明生长在大米培养基上的蛹虫草子实体中虫草素含量最高.     

8种物质对蛹虫草液体发酵中虫草素及多糖含量的影响

【目的】研究不同前体物及营养物对蛹虫草液体发酵中虫草素和虫草多糖含量的影响,筛选提高虫草素及虫草多糖的最适添加物及其添加质量浓度。【方法】将不同质量浓度的腺苷、核糖、次黄嘌呤、谷氨酰胺、甘氨酸、核黄素、苯丙氨酸及甲硫氨酸8种物质添加到蛹虫草液体发酵培养基中,提取菌丝体中的虫草素与多糖,分别用HPLC法、硫酸-苯酚法对其含量进行检测。【结果】在8种添加物中,腺苷、核糖、谷氨酰胺、甘氨酸均能明显提高虫草素及虫草多糖的含量,其最适添加量分别为4.0,2.0～3.0,0.5～1.0,0.5mg/mL;苯丙氨酸、甲硫氨酸、次黄嘌呤对蛹虫草液体发酵中虫草素和多糖含量的促进作用不明显;核黄素对虫草素与多糖合成有抑制作用。【结论】蛹虫草发酵过程中添加腺苷合成途径中的前体物能明显提高其中的虫草素与虫草多糖含量。     

蛹虫草新型菌粉活性成份含量的测定

虫草是一类具有优良医疗保健功效的药用真菌,其中最著名的是冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.],其次是蛹虫草[Cordceps militaris(Fr.)Link.].冬虫夏草因资源紧缺、需求旺盛,加之生境特殊、寄主单一,人工栽培尚无突破性进展,以致市场价格一路飚升.蛹虫草是冬虫夏草的近缘种,也是虫草属的模式种[1],与冬虫夏草在药化和药理上十分相似,在功能食品、医药产品和生物技术方面有很高的实用价值[2],已能进行规模化人工培养,是替代冬虫夏草的首选菌种.     

Na2SeO3对药食用真菌蛹虫草子实体生长及功能成分腺苷、虫草素的影响

【目的】研究分析Na₂SeO₃对药食用真菌蛹虫草子实体生长及功能成分腺苷、虫草素的影响,大面积人工栽培富硒蛹虫草提供理论依据和技术支持。【方法】以新疆本地蛹虫草菌种作为富硒载体,采用瓶栽法,系统分析不同浓度亚硒酸钠处理对蛹虫草菌丝、子座、子实体生长,产量、生物转化率、总硒及其功能成分腺苷、虫草素含量的影响。【结果】处理1(硒浓度20 mg/L)和处理2(硒浓度40 mg/L)与对照相比其蛹虫草的菌丝体生长、子座生长、子实体出草长度、鲜重、干重、生物转化率等无影响,其子实体中总硒含量最高,功能成分腺苷、虫草素含量明显增加;从处理3(硒浓度60 mg/L)至处理7(硒浓度200 mg/L)与对照相比,其蛹虫草的菌丝体生长、子座生长受到抑制,其子实体出草长度、鲜重、干重、生物转化率等呈显著性差异(P<0.05),呈降低趋势,并随着硒浓度增加,抑制越明显;其子实体中总硒含量逐渐降低,功能成分腺苷、虫草素含量逐渐下降。【结论】以亚硒酸钠作为外源硒,硒浓度20~40 mg/L效果最好,可作为进行蛹虫草富硒栽培较为理想的浓度。     

蛹虫草子座培养剩余基质中虫草素提取工艺的优化

【目的】优化蛹虫草子座培养剩余基质中虫草素的提取工艺。【方法】以蛹虫草子座培养剩余基质为材料,采用二次通用旋转组合设计,研究提取温度、提取时间、液料比及提取液pH对虫草素提取得率的影响,建立虫草素提取得率与4个因素间的关系模型,分析其单因子和交互影响效应,通过参数优化得到虫草素的最佳提取工艺条件。【结果】4个因素对虫草素提取得率的影响大小依次为液料比>提取温度>提取液pH>提取时间。在最佳提取工艺条件下,即提取温度为63.3℃、提取时间为4.8h、液料比为36.8、提取液pH为6.7时,虫草素得率可达1.32‰。【结论】获得了从蛹虫草子座培养剩余基质中高效提取虫草素的优化工艺。     

磁处理对蛹虫草菌丝生长的影响

[目的]明确磁处理对蛹虫草[Cordyceps militaris （L.） Link.]菌丝生长的影响,为磁处理在蛹虫草菌丝生产中的应用提供理论依据和参数。[方法]设置不同磁场强度和不同处理时间的组合条件,采用菌丝重量法研究磁处理对菌丝生长量的生物学效应,并筛选出最佳的磁场处理组合。[结果]不同处理条件对蛹虫草菌丝生长量的生物学效应不同,产生正生物学效应的最佳磁处理条件为1.250T/10 min。[结论]得出蛹虫草最佳的磁处理条件,为磁处理在蛹虫草菌丝生产中的应用提供了理论依据。     

高效液相色谱法检测蛹虫草胶囊中腺苷含量的方法研究

建立了蛹虫草胶囊中腺苷含量检测的色谱优化方法。在260 nm的检测波长下,采用外标法对腺苷含量进行定量分析,在0.4～60μg/mL线性范围内拟合线性回归方程:y=25.496 x+1.025,相关系数为0.999 7。方法的检测限为0.06μg/mL,定量限为0.14μg/mL。加标回收试验显示,回收率在96.9%～104.1%之间,RSD为3.43%。方法的精密度为1.02%。对试验结果进行统计分析,结果表明,260nm的检测波长能显著提高样品中腺苷含量测定值,结果更为准确、可靠。     

加速溶剂萃取法提取蛹虫草主要成分工艺优化分析

【目的】蛹虫草(Cordyceps militaris)成分内含有大量的核苷类、多糖、虫草酸、甾醇、糖醇、酶和色素等多种活性物质,其中对虫草素(cordycepin)、腺苷(adenosine)、多糖等研究广泛。【方法】目前提取虫草素、腺苷常用超声法、回流法、渗漉提取法等。采取加速溶剂萃取法,从蛹虫草子实体中获取虫草素、腺苷活性物质,并进行四因素(温度、静态萃取时间、乙醇浓度和循环次数)三水平正交试验设计,明确其最优组合条件。【结果】通过试验得到了加速萃取法提取虫草素、腺苷的最佳组合条件。【结论】加速萃取法提取虫草素的最适条件是:温度70℃,时间5 min,乙醇浓度20%,循环次数2次;提取腺苷的最适条件是:温度100℃,时间10 min,乙醇含量0,循环次数2次。     

蛹虫草中虫草素提取工艺的优化

该实验利用响应面方法优化蛹虫草中虫草素的提取工艺,选择料液比、功率和时间为自变量,虫草素的提取率为响应值,利用Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析法,研究各自变量交互作用及其对虫草素提取率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定虫草素最佳提取工艺∶料液比1.00∶26.84,功率329.57W,时间40.25min,在此条件下,虫草素的提取率可达4.58000%。