文昌鸡促卵泡素受体基因多态性分析

以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序对编码FSHR胞外区部分的第1外显子(exon1)至第9外显子(exon9)共9个外显子区域进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,寻找与鸡繁殖性能相关的遗传标记,为高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。结果表明:在exon2、exon4、exon6、exon8区域存在SNPs位点,分别在exon2片段中编码区5′端-49 bp处的C→T突变;exon4片段中编码区43 bp处的T→C突变,但未引起氨基酸的改变;exon6片段中编码区3′端+12 bp处的A→G突变;距exon8编码区3′端+38 bp处的G→T突变。经适合性检验,各基因的基因频率在群体内的分布均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。FSHR是促卵泡素的特异性受体,这些位点的多态为进一步研究FSHR基因多态性对文昌鸡繁殖性能的遗传效应奠定了基础。     

长顺绿壳蛋鸡FGF23基因遗传变异分析

为进一步了解长顺绿壳蛋鸡FGF23基因的遗传效应,试验随机抽取同日出雏、健康无病、同等管理条件下饲喂10周龄的100只长顺绿壳蛋鸡,翅静脉采血,提取DNA,采用混合基因池进行PCR扩增,结合直接测序法对FGF23基因进行单核苷酸多态性(SNP)筛查。结果表明,在长顺绿壳蛋鸡FGF23基因启动子区共筛查到3个SNP突变位点(g.73424388,TC;g.73424577,TC;g.73424660,GC),其中,g.73424388和g.73424660两个突变位点呈中度多态,g.73424577呈低度多态,说明长顺绿壳蛋鸡在自然群体中的遗传多样性较为丰富。     

乙型肝炎患者外周血IL-2、可溶性IL-2受体、IFN-γ检测的意义

目的：探讨乙型肝炎患者外周血白细胞介素2（IL-2）、可溶性IL-2受体（sIL-2R）和γ-干扰素（IFN-γ）变化与肝功能的关系。方法：测定乙型肝炎患者72例（肝功能正常者33例,异常者39例）和健康成年人35例血清IL-2和sIL-2R及IFN-γ。结果：乙型肝炎患者肝功能异常组和对照组的IL-2、sIL-2R、IFN-γ差异有统计学意义（P〈0.01）,而肝功能正常组与健康对照组比较,差异无统计学意义。结论：乙型肝炎肝功能异常患者存在一定程度的T细胞功能障碍与缺陷,这种障碍与缺陷与其肝功能状态有密切关系。     

鸡白细胞介素-1β基因内含子1、2多态与部分免疫性状的相关性分析#br#

 【目的】以白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）基因为候选基因,研究其单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）,及其与部分免疫性状的关系。【方法】根据红色原鸡IL-1β基因序列设计引物一对,利用PCR-SSCP方法检测了如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡IL-1β基因内含子1、2的SNP,同时检测了56日龄的血清IL-1浓度、异嗜性粒细胞/淋巴细胞（heterophil/lymphocyte,H/L）值、绵羊红细胞（sheep red blood cell,SRBC）抗体滴度、新城疫（newcastle disease,ND）抗体滴度、禽流感（avian influenza,AI）抗体滴度5个免疫性状, 并进一步分析了SNP位点与免疫性状的关系。【结果】共检测出6个SNP位点,分别为T107G突变、T130A突变、C143T突变、A208C突变、T241G突变及T274C突变。经关联分析,发现107、208、241及274位点存在显著的基因型效应（P＜0.05或P＜0.01）,基因型组合对H/L值及ND抗体滴度两个性状上存在显著效应（P＜0.05）。【结论】241位点突变型个体3个免疫性状均优于野生型,有望在鸡的抗病育种中筛选为新的标记位点。利用基因型组合选择效果优于对单个位点的选择。     

子午流注蜂针对强直性脊柱炎的 疗效及机制研究

目的观察子午流注蜂针对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的疗效、安全性及对患者血清白细胞 介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、性激素水平的影响,探讨其产生疗效的机制。方法将120 例AS 患者随机分 为3 组,治疗组40 例采用子午流注加辨证取穴蜂针治疗,对照1 组40 例用辨证取穴蜂针治疗,对照2 组40 例用柳氮 磺胺吡啶(sulfasalazine,SSZ)、双氯芬酸钠治疗;3 组均以4 周为1 个疗程,3 个疗程后观察疗效,观测患者Bath 强直性 脊柱炎病情活动性指数(Bath AS disease activity index, BAS-DAI)、Bath 强直性脊柱炎功能指数(Bath AS functional index,BASFI)、晨僵时间、全身疼痛和脊柱疼痛Likert 4 级积分、患者和医生的总体评价积分,测定血沉(erythrosedi mentation,ESR)、C 反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血清IL-6、TNF-α、性激素水平,同时观察药物的不良反应。结 果治疗组和对照1 组、对照2 组总有效率分别为82.5%和72.5%、70.0%,对照组与治疗组比较差异有统计学意义(P< 0.05);3 组治疗前后BAS－DAI、BASFI、晨僵时间、全身疼痛和脊柱疼痛Likert 4 级积分、患者和医生的总体评价积分等 观察指标有明显改善,ESR、CRP、IL-6、TNF-α、睾酮(T)明显下降,治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);治疗组的指标 下降值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),3 组治疗前后雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)均有上升趋势,3 组泌乳 素(PRL)、孕酮(P)、促黄体生成素(LH)治疗前后比较有下降趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。不良反应的发生率治 疗组为10%,对照1 组为12.5%,对照2 组为30%。结论子午流注蜂针治疗AS 疗效显著,且不良反应较少。其疗效可 能与其抑制患者血清IL-6、TNF-α、T 有关。     

紫苏PfPDAT基因单核苷酸多态性分析

[目的]磷脂:二酰甘油脂酰转移酶(PDAT)是植物油脂合成最后一步酰基化反应的关键酶之一,研究紫苏PfPDAT基因单核苷酸多态性,旨在分析该基因多态性与紫苏种子油脂含量之间的关系。[方法]以脂肪酸含量不同的7个紫苏品种为试材,通过直接测序法分析PfPDAT基因cDNA全长序列的单核苷酸多态性及其与油脂含量的关系。[结果]在所测总长度为14 679bp的核苷酸序列中,共检测到9个SNP和2个InDel,单核苷酸多态性频率分别为1/1 631bp和1/7 340bp,其中编码区含2个SNP,非编码区为7个。编码区和非编码区发生SNP的频率分别为1/5 439bp和1/543bp。根据PfPDAT基因序列多态性将供试紫苏材料分为不同的单倍型,单倍型H1和H2中都包含有油脂含量较高和含量较低的材料。[结论]PfPDAT基因的单倍型分类与紫苏油脂含量之间没有显著相关性,同时也反映了植物种子油脂合成的复杂性。     

鹅PRLR基因外显子10单核苷酸多态性分析

运用PCR-SSCP法,检测了皖西白鹅和莱茵鹅PRLR基因外显子10的单核苷酸多态性。结果表明：在皖西白鹅群体中存在多态性,10-2位点的A-181G和10-3位点的-/22A缺失突变;而在莱茵鹅群体中则不存在多态性。     

猪IGF2R基因多态性及其遗传印记

【目的】在猪IGF2R基因的外显子内寻找SNP,以SNP为遗传标记研究IGF2R基因的印记表达特征。【方法】选取3个品种243头瘦肉型商品猪为试验材料,以IGF2R基因为候选基因,通过PCR-SSCP对IGF2R基因多态性进行检测;选取IGF2R基因外显子48的SNP杂合子仔猪3头和成年猪1头,对脑、心脏、肝脏、脾、肾、肺、胃、胰、胸腺、膀胱、肌肉、舌、胎盘的组织器官mRNA产物分别进行RT-PCR-RFLP电泳和RT-PCR-SSCP电泳。【结果】IGF2R基因外显子48中有一个单核苷酸多态性位点,384位碱基由G突变为A,该位点为NspⅠ酶切位点;IGF2R的外显子48在3头仔猪和1头成年猪的主要组织器官仅表达母亲来源的等位基因。【结论】猪IGF2R基因呈母方表达、父方印记的遗传特征。     

急性胰腺炎患者血清IL-15、IL-18和TNF-α的表达及意义

目的观察白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在急性胰腺炎(AP)发病机制中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测21例轻型急性胰腺炎(MAP)患者和8例重症急性胰腺炎(SAP)患者血清中IL-15、IL-18和TNF-α的含量,分析它们之间含量表达的相关性。结果血清SAP组和对照组的IL-15、IL-18和TNF-α的含量分别为(57.13±5.03)(、68.41±6.14)、(36.13±3.87)ng/L和(53.05±5.12)、(64.71±6.01)、(35.5±3.02)ng/L,均明显高于MAP组[(5.69±1.61)、(27.91±3.13)、(7.71±1.71)ng/L],差异有统计学意义(P<0.01),SAP组与对照组之间则无明显差异(P>0.05)。血清IL-15、IL-18在MAP和SAP组中均呈正相关:r分别为0.95、0.91,均P<0.01。结论血清IL-15、IL-18和TNF-α等细胞因子均参与了急性胰腺炎的炎症反应过程,显示这3种细胞因子的变化对预测急性胰腺炎病情发展及治疗均有较好的指导意义。     

蓖麻LPAAT基因序列的SNPs及与油脂的相关性

LPAAT对蓖麻储存油脂（triacylglycerols,TAG）的合成调控具有重要作用。为了研究蓖麻LPAAT的多态性,参考GenBank中编码蓖麻LPAAT的基因组序列设计引物,对来自32个不同地区蓖麻种质的LPAAT进行测序,获得长约804bp的基因组序列。多态分析表明：在804bp的区间内共发现2个SNP和3个InDel,SNP频率为1／161bp,多样性指数Pi为0．00067。在外显予区域,有1个SNP和2个InDel,其中2个为同义突变,1个为错意突变。结果表明,基因删丁的exon10与种子油脂含量有明显相关性。     

猪RTL1基因多态性及其与胴体、肉质性状的关联分析

旨在研究反转录转座子1基因(retrotransposon-like-1,RTL1)潜在的变异与猪胴体和肉质性状的相关性。测序发现在猪RTL1基因编码区1 209 bp处存在G/A突变,利用PCR-Fnu4H I-RFLP方法在9个猪种中进行了基因分型,并且在360头大白猪×梅山猪F2代群体中进行性状关联分析。结果表明,该位点与皮率、内脂率、6-7腰椎间膘厚、胸腰椎间膘厚、背最长肌pH、股二头肌肌肉色值呈显著相关(P0.05),与骨率、肩部膘厚、臀部膘厚、平均背膘厚、背最长肌失水率、背最长肌系水力、背最长肌肌肉色值呈极显著相关(P0.01)。     

ABCA1基因I883M在广西汉族和壮族人群中的多态性分布

为探讨ABCA1基因I883M多态性在广西汉族和壮族人群中的分布,采用PCR-RFLP技术对121例无血缘关系的健康汉族人和100例无血缘关系的健康壮族人的ABCA1基因I883M位点A→G(Ile883Met)进行检测分析,发现ABCA1基因I883M基因型频率在汉族分别为:II=0.074,IM=0.380,MM=0.545;壮族分别为:II=0.130,IM=0.350,MM=0.520;两组人群的基因多态性分布差异无统计学意义(P>0.05),但与德国人群相比差异有统计学意义(P<0.01)。ABCA1基因I883M位点多态性在汉族与壮族中的分布可能没有差异,而有别于西方人种,暗示该基因多态性可能存在种族和个体差异,该数据可以很好地应用于群体遗传学的研究。     

3个鸡种A-FABP基因单核苷酸多态性的研究

利用PCR—RFLP技术(限制性内切酶为TaqⅠ)检测尤溪麻鸡、鹿苑鸡、隐性白羽鸡3个鸡种的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A—FABP)基因第1和第3外显子的单核苷酸多态性(SNP)。结果表明：在该位点上,3个鸡种的A—FABP基因均存在SNP,外来品种隐性白羽鸡以杂合子cc居多,地方鸡种以cc居多,3个鸡种均含有较高频率的等位基因c,其中以尤溪麻鸡最高,而以隐性白羽鸡最低;对第3外显子扩增片段(375bp)进行回收测序,发现在第3外显子1805位存在SNP,尤溪麻鸡与鹿苑鸡c突变为r,的频率(分别为0．7344、0．7188)明显高于隐性白羽鸡c突变为71的频率(0．5156)。A—FABP第1外显子(85位点)的SNP不影响A—FABP的氨基酸序列变化,而第3外显子(1805位点)的SNP影响A—FABP的氨基酸序列变化,由脯氨酸转变为丝氨酸,说明该多态性可能通过A—FABP基因表达水平而影响鸡的肉质。     

虾夷马粪海胆溶菌酶基因SNP标记的开发及多态性分析

采用高分辨率熔解曲线分析技术（HRM）对虾夷马粪海胆溶菌酶基因进行突变扫描,筛选出26个SNP候选位点。其中,碱基置换类型位点16个,占位点总数的61.54%;碱基插入或缺失的位点6个,缺失的碱基数为1~4个不等,占位点总数的23.08%;碱基置换类型模糊以及三态位点4个,占位点总数的1538%。SNP在虾夷马粪海胆溶菌酶基因的cDNA中的分布频率约为2.85%,位于编码区的位点有18个,其中2个为错义突变。应用小扩增子基因分型法对5个SNP位点在2个不同地域群体的60个样本中进行分型分析,结果显示：5个SNP位点均含有2个等位基因,次等位基因频率分布范围为0.150 0~0.500 0,位点SILyz-7、SILyz-15和SILyz-20在两个群体间的次等位基因频率相差较大。研究结果表明,HRM是一种高效便捷的SNP分析方法,所筛选出的SNP标记可用于虾夷马粪海胆遗传育种的研究。     

类风湿关节炎患者关节液中IL-17的定量检测

目的探讨类风湿性关节炎（RA）患者关节液中IL-17的含量与关节炎症损伤的相关性,为研究RA的关节损伤机制提供科学依据.方法应用ELISA方法定量检测RA组40例和对照组40例关节液中IL-17的含量,应用t检验比较两组差异性.结果 RA组关节液中IL-17的含量显著高于对照组（P〈0.01）.结论 RA组关节液中具有较高的IL-17检测值,证实IL-17是RA患者关节滑膜损伤的重要因素之一.     

大麦糯性相关基因Wx单核苷酸多态性分析

【目的】大麦Wx是控制直连淀粉合成相关的糯性基因,研究大麦糯性相关基因Wx单核苷酸多态性,并分析其与籽粒直链淀粉含量的关系。【方法】以2个国外糯大麦品种为对照,对30份高、中、低直链淀粉含量的中国大麦进行Wx的克隆和测序,分析Wx的单核苷酸多态性(SNP)及其与籽粒直链淀粉含量之间的关系。【结果】在对32个大麦品种的核苷酸序列多态性鉴定中,共检测到了169个多态性位点,平均每26bp检测到一个多态性位点。在所有检测到的多态性位点中,包括143个SNP和26个InDel,二者的频率分别为1/310和1/169。Wx的内含子1、3、5、8区,外显子2、5和5′-UTR及3′-UTR区域为变异富集区,其它区域变异较小。外显子2和内含子1区域所承受的选择压力较小。单倍型分析表明,第1种单倍型中包括所有低直链淀粉含量的材料。【结论】大麦Wx的多态性与直链淀粉含量之间存在明显的对应关系。     

鹌鹑MC4R基因编码区群体遗传变异检测分析

 根据GenBank数据库提供的鹌鹑黑素促黑素受体4（MC4R）基因序列,设计出5对扩增引物,采用PCR SSCP分段检测方法对朝鲜鹌鹑MC4R基因外显子区域的多态性进行了检测,并对存在多态性的DNA片段进行了序列测定。SSCP分析的结果显示,第4号引物扩增的基因片段具有明显的多态性,并检测到了3种基因型（AA型,AB型,BB型）。将测序结果与GenBank数据库中鹌鹑MC4R基因序列进行比对,发现了一个单核苷酸多态性（SNP）位点：855bp位点存在一个T→C同义转换突变。基因型AA,AB和BB的频率分别为0.1933,0.6867和0.1200;等位基因A和B的频率分别为0.5367和0.4633;多态信息含量（PIC）和杂合度（H）分别为0.3736和0.4974;χ2检验的结果表明,该突变位点的基因频率未处于Hardy Weinberg平衡状态（P<0.01）。     

高灌蓝莓CBF基因的单核苷酸多态性分析

本研究以21个高灌蓝莓品种为试材,克隆VcCBF基因,测序后分析其单核苷酸多态性(SNP),共克隆到123个非重复序列,发现120个SNP位点,单核苷酸多态性发生频率为1/695bp,核苷酸多态性值(Pi)为0.01251。在120个SNP位点中,单态突变位点62个;简约信息位点58个,其中双突变55个,三突变3个。对其碱基替换方式进行分析发现,转换91个,颠换26个,转换与颠换的发生比率为3.5∶1。通过单倍型分析发现,21个蓝莓品种的VcCBF基因存在5种单倍型。