猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验（Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）,用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%（52/56）,对照组猪血清抗体检测均为阴性（33/33）。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

国内5种猪圆环病毒PCV2抗体检测试剂盒的比较试验

为了解国内PCV2灭活疫苗效力检验用PCV2抗体检测试剂盒的质量,参照农业部第683号公告有关规定,对国内5个厂家生产的5种PCV2抗体检测试剂盒进行了敏感性、特异性和符合率测定,并比较了试剂盒间的符合率。结果表明：5个PCV2抗体检测试剂盒特异性检测结果均在90%左右,但敏感性差异较大（57.7%～100%）,且各试剂盒间检测结果的符合率较差（仅为63.2%）。总体来看,国产PCV2抗体检测试剂盒质量参差不齐,仅2个试剂盒适合用于PCV2抗体检测。     

国内5种猪圆环病毒PCV2抗体检测试剂盒的评价

为了解国内PCV2灭活疫苗效力检验用PCV2抗体检测试剂盒的质量,参照农业部第683号公告有关规定,对国内5个厂家生产的5种PCV2抗体检测试剂盒进行了敏感性、特异性和符合率测定,并比较了试剂盒间的符合率。结果表明：5个PCV2抗体检测试剂盒特异性检测结果均在90%左右,但敏感性差异较大（57.7%~100%）,且各试剂盒间检测结果的符合率较差（仅为63.2%）。总体来看,国产PCV2抗体检测试剂盒质量参差不齐,仅2个试剂盒适合用于PCV2抗体检测。     

免疫小鼠血清中猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒的研究

为研制一种小鼠血清中猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）抗体检测试剂盒,以PCV2 Cap蛋白兔多抗作为包被用抗体,捕获纯化的PCV2 Cap蛋白,制备抗原检测板,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠IgG作为二抗,建立检测小鼠血清中PCV2抗体ELISA检测方法并制备试剂盒。采用所制备的ELISA试剂盒对50份已知阴性血清样本进行检测,临界OD450nm值为0335;采用ELISA试剂盒与IFA分别对100份血清检测,总符合率为96%,检测小鼠血清敏感性效价达1∶16000,与其他常见的猪病毒小鼠阳性血清无交叉反应,2～8 ℃保存15个月稳定,批内变异系数为2.28%～4.17%,批间变异系数为4.27%～6.02%,具有良好的敏感性、特异性、稳定性及重复性;采用ELISA试剂盒对不同来源疫苗免疫组小鼠血清进行检测,均显示良好效果。研究表明,本研究制备的ELISA试剂盒可用于小鼠血清中PCV2抗体效价检测。     

猪瘟病毒5种ELISA抗体检测试剂盒的比较

[目的]比较猪瘟病毒（CSFV）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果。[方法]利用细胞中和试验制备的标准质控血清,制备不同猪瘟抗体效价的阳性血清70份和阴性血清20份,对5种试剂盒的敏感性、特异性和符合率进行比较。利用该5种试剂盒对不同年龄段猪群血清中猪瘟抗体水平进行检测。[结果] 5种试剂盒的敏感性为85.7%-100%,特异性均达到100%,符合率为88.9%-100%。不同年龄段猪血清样品中,5种试剂盒检测结果不尽相同。[结论]猪瘟抗体效价的高低对5种试剂盒检测结果的一致性有一定影响,尤其是针对弱阳性样品时,IDEXX猪瘟抗体试剂盒和荷兰赛迪公司的猪瘟抗体试剂盒检测效果相对较好,为猪瘟免疫检测工作提供了一定依据。     

克仑特罗酶联免疫试剂盒的比较评价

考察了市售18个厂家生产的克仑特罗酶联免疫试剂盒,对其用于猪尿中克仑特罗残留检测的可操作性、灵敏度、准确度、精密度等参数进行比较,试验表明目前市售的部分克仑特罗酶联免疫试剂盒可用于猪尿中克仑特罗残留的筛选监测,检测限为1 μg/L.     

猪病酶联免疫诊断试剂盒简介

1 猪瘟病毒抗体酶联免疫诊断(ELlSA)检测试剂盒 猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒.     

猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型（PCV1）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20 ℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。     

两种蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为验证昆明海关检验检疫技术中心等单位联合研发的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTVB-ELISA)的临床适用性,将YN BTV B-ELISA检测试剂盒与法国ID.VET公司研制的蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒(ID.VET C-ELISA)进行比对检测试验。本试验对1 278份牛羊血清进行比对检测,另外对1份已知背景的阳性血清倍比稀释后进行检测,比较两种试剂盒的敏感性。结果显示:YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性分别是99.92%、99.63%、100%;将两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0. 998;YN BTV B-ELISA、ID.VET C-ELISA检测阳性血清效价的最低稀释倍数分别是1:128、1:16。试验表明,YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA检测试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性均较高,并且YN BTV B-ELISA检测试剂盒敏感性更高,在蓝舌病病毒抗体检测中具有良好的实用价值。     

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。     

非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制

针对非洲猪瘟病毒（ASFV）P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。     

Retrospective Study Evaluating Seroprevalence of Hepatitis E Virus in Blood Donors and in Swine Veterinarians in Italy (2004)

Hepatitis E is an emerging viral disease in developed countries, with sporadic cases occasionally linked to the consumption of raw or undercooked pork, wild boar or deer meat. Cases due to transfusion or transplantation have also been reported. In developed countries, hepatitis E is considered a zoonosis and pig is the main reservoir. In the last few years, several studies conducted in Europe reported variable seroprevalence rates among the general population, ranging between 0.26% and 52.5%. A higher seroprevalence was described among workers who come in contact with pigs. The aim of this retrospective study was to evaluate the seroprevalence of anti‐HEV IgG and IgM antibodies in blood donors (170) and in pig veterinarians (83). Archival sera were collected in Italy in 2004. The observed seroprevalence was 9.64% and 8.82% in veterinarians and blood donors, respectively. Overall, only three sera from blood donors were positive for IgM, but no HEV‐RNA was detected.     

2015年-2016年度南宁部分地区猪戊型肝炎病毒基因型分析

为了解广西猪群中戊型肝炎病毒(HEV)基因型,利用套式RT-PCR用对南宁周边猪场采集到的104份新鲜猪粪便进行HEV检测、分离并成功扩增和克隆了11株阳性毒株的ORF2基因部分保守片段.序列测定结果表明,11株HEV ORF2序列自身核苷酸同源性为97.7%~100%,推导编码的氨基酸同源性为97.9%~100%;与4型HEV代表毒株Ch-S-1、Ch-T11、swGX40等的核苷酸同源性为84.6%~90.6%,而与其他各型之间的同源性较低.系统发育进化树结果表明,11株HEV广西株为基因4型,其中,10株HEV为4a亚型,1株毒株为4e亚型.结果表明,广西猪群中流行的HEV均为基因4型,且以4a亚型为优势流行毒株.     

几种检测猪弓形虫病ELISA诊断试剂盒的对比

以人工感染弓形虫的猪阳性血清及感染前的阴性血清为样品,比较3个国产(A、B、C)和2个国外(D、E)ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。用这5种ELISA试剂盒,检测人工感染弓形虫的猪阳性血清42份及感染前的阴性血清45份,并参考PCR扩增结果,比较这5种ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。5种试剂盒中,1种国产试剂盒的检测结果与PCR结果完全一致,其余4种试剂盒的检测结果都与PCR检测结果差别较大。结果表明,国产试剂盒A的检测效果最佳,国外试剂盒与部分国内试剂盒的检测结果相当,临床选用试剂盒时,可选择检测效果最佳的试剂盒A,不必盲目选择国外试剂盒。     

夏盛复合酶对荣昌生长猪生产性能的影响

本试验通过U5（5^2)均匀设计，将夏盛复合酶和低聚果糖组合添加在荣昌生长猪饲料中进行饲喂，试验组分5组，添加的夏盛复合酶和低聚果糖的组合分别为0．15％＋0．05％，0．35％＋0．10％，0．05％＋0．15％，0．25％＋0．20％，0．45％＋0．25％，与空白组进行了为期35天的试验，统计结果表明，最适两因素组合水平为：夏盛复合酶0．112％－0．150％，低聚果糖0．081％－0．090％。     

Quantitative and Qualitative Study of Enzyme-linked Immunosorbent Assay to Detect IgG against Japanese Encephalitis Virus in Swine Sera

This study was designed to investigate the application of indirect enzyme-linked immunoassay (ELISA) in detecting IgG against Japanese encephalitis virus in swine sera and the qualitative nature of this test. The attenuated strain SA14-14-2 of Japanese encephalitis virus (JEV) was inoculated into 9-day-old chicken embryos and virus was harvested, purified and suspended in 0.9% saline as JEV antigen. The control antigen was prepared by the same method as for the antigen. In the ELISA, the optimal concentrations of antigen coated and dilution factor were selected using chi2 test. Ninety-two swine sera negative to haemagglutination inhibition (HI) were tested by this assay and the positive threshold was determined. The results of this study indicate that indirect ELISA has high specificity, sensitivity and reproducability. Simultaneous testing of 74 serum samples from nine pig farms was carried out to compare the existing HI test and the indirect ELISA. The coincidence rate of the two assays was 85.1% (63/74) and no significant difference was observed between them (p > 0.05). This ELISA test can detect 46 swine serum samples qualitatively and the titre of eight swine serum samples through endpoint dilution quantitatively within one 96-well plate.     

化学发光直接竞争免疫分析法检测猪尿中莱克多巴胺残留

本试验研究建立了猪尿中莱克多巴胺（Ractopamine, RAC）残留的直接竞争化学发光免疫检测方法。合成了莱克多巴胺和辣根过氧化物酶的偶联物（RAC-HRP）,方法的检测限为0.09 ng/mL,空白猪尿中添加浓度为0.5、10和100 ng/mL RAC时,检测范围为0.3～157.0 ng/mL;回收率为76.3%～87.6%,批内变异系数为10.0%～12.2%,批间变异系数为14.2%～15.2%。     

两种不同猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果比较

为比较猪瘟疫苗E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活疫苗对育肥猪免疫效果和生产成绩的影响,以便为规模猪场在选择猪瘟疫苗时提供参考。本试验从汉中某代养场选取了一批健康的断奶仔猪分成三组,A组免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗（简称E2亚单位疫苗）,B组免疫猪瘟活疫苗（脾淋源）,C组为对照组不做猪瘟疫苗免疫。免疫60 d后各组随机抽取10、15和12份血样用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测猪瘟抗体水平。结果表明接种的两种猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果差异极显著（P<0.01）,其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥猪抗体阻断率和降低离散度,并且有助于育肥猪的健康生长。     

检测鸡肉中甲羟孕酮酶联免疫试剂盒的研制

试验旨在利用酶联免疫技术研制一种快速检测鸡肉中甲羟孕酮的试剂盒。经测试,该试剂盒对鸡肉样本的检测限为1 μg/kg,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能在4℃保存12个月;交叉反应率结果表明,单克隆抗体特异性良好。该试剂盒的操作时间仅需45 min,适合现场大量样本的快速检测。     

猪瘟病毒3种检测方法的比较

本研究旨在比较3种检测猪瘟病毒方法的优缺点。应用反转录—复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)、荧光抗体法、胶体金免疫层析试纸条3种方法,分别对 30份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒进行检测。试验结果显示,RT-nPCR方法检出阳性样品数为11份,荧光抗体法为13份,胶体金免疫层析试纸条为8份;3种方法检测全为阳性8份,全为阴性17份。试验结果表明,荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果, 敏感性比较差;胶体金免疫层析试纸条诊断方法最大的优点就是简便快速,且适合基层的应用,该方法的不足之处就是敏感性较低;RT-nPCR检测法具有快速、敏感等优点,但需一定仪器设备及成熟的技术方法。RT-nPCR还能区分待检样品为疫苗毒株(弱毒)还是野毒株感染(强毒),这是其他2种方法所不可比拟的。