獭免A型魏氏梭菌病的诊治

魏氏梭菌又称魏氏梭菌性肠炎或兔肠毒血症，主要是由A型魏氏梭菌及其毒素引起的以急性水样腹泻和高死亡率为特征。     

A型魏氏梭菌α毒素羧基端蛋白基因表达与结构分析

利用PCR技术将α毒素羧基端基因CPA251-370克隆到pET-32a载体上,构建了重组表达质粒pXETCPA-C,酶切鉴定和序列分析证实其含有CPA251-370基因且序列和阅读框架均正确。对重组菌株BL21(DE3)(pXETCPA-C)表达的蛋白质进行SDS-PAGE分析,结果表明CPA251-370蛋白表达量占菌体总蛋白质相对含量的16.43%。SOPMA法预测表明CPA251-370蛋白二级结构主要由β折叠和无规则卷曲组成,其3D结构与α毒素羧基端部分相似。CPA和CPA251-370蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现两者的CD光谱仅有一些微小变化。免疫攻毒试验表明CPA251-370蛋白免疫的小鼠能抵抗最小致死剂量(MLD) 0.5 mL·只~(-1)(活菌数约为5×10~9 cfu)的A型魏氏梭菌标准株C57-1毒素攻击。该研究深入阐释了A型魏氏梭菌α毒素的分子结构,为揭示其作用的分子机制奠定了坚实基础。     

产气荚膜梭菌α-β融合基因的构建与表达研究

应用PCR技术,首先从A型产气荚膜梭菌菌株NCTC64609中扩增出α-毒素保护性抗原基因片段,然后从C型产气荚膜梭菌C58-1染色体基因组中扩增了930 bp的β-毒素基因,并将α-毒素基因和β-毒素基因插入融合表达载体pBV221中,获得了重组质粒pMCPAB,转化受体菌BL21(DE3),得到重组菌株BL21(DE3)(pMCPAB)。对重组菌株诱导的表达产物进行ELISA检测和SDS-PAGE分析,结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合蛋白。免疫实验表明,表达产物免疫的小鼠可抵抗α-毒素和β-毒素的攻击。     

产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1 194 bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET\|28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET\|28a\|CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。     

魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条的研制

【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06 μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸条重复检测结果无差异,表明试纸条具有较高的特异性和重复性;该试纸条最低可检测1.40 mg/mL的毒素量,与PCR方法测得结果符合率为80.77%,基本能满足实际应用要求。【结论】成功研制了魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,该试纸条具有快速、特异、敏感、稳定等优点,适用于对魏氏梭菌病进行普查和检疫,具有良好的应用前景。     

梅花鹿魏氏梭菌病的诊断与防治

为了诊断多个养殖场梅花鹿发病原因,并找到快速有效的防治措施。试验采用流行病学调查、临床症状、病理解剖、细菌分离鉴定和动物实验等方法对多个养殖场患病梅花鹿进行确诊,对分离病原菌进行药敏试验,并采取相应防治措施。结果表明,通过临床症状观察和病理解剖变化,初步诊断是魏氏梭菌引起梅花鹿死亡。分离得到的菌株,其菌落形态和革兰氏染色结果与以往报道的魏氏梭菌相符。对16S rRNA基因及毒素基因进行PCR扩增,测序结果发现,分离菌株与GenBank中魏氏梭菌16S rRNA同源性为98%,使用魏氏梭菌的5种主要毒素基因进行PCR扩增,只有Alpha基因有目的条带,测序结果发现,分离菌株与GenBank中魏氏梭菌Alpha基因同源性为99%,可确定是A型魏氏梭菌。将分离得到的魏氏梭菌接种小鼠,发现小鼠在短时间内全部死亡,且从小鼠体内分离到相同病原。综合以上结果得出,这些鹿场是A型魏氏梭菌感染引发的疾病。     

兔魏氏梭菌病的防治

兔魏氏梭菌病，又称兔魏氏梭菌性肠炎，是由A型魏氏梭菌所引起的肠毒血病，以家兔急性水泻为特征，发病兔致死率高，给养兔业带来严重的损失。     

兔魏氏梭菌病的防治

兔魏氏梭菌病,又称兔魏氏梭菌性肠炎,是由 A 型魏氏梭菌所产外毒引起的肠毒血病,引起家兔急性水泻的一种急性传染病,发病兔致死率很高,给养兔业带来严重的损失。㈠临床诊断2004 年4月上旬,在江西农业工程职业学院的特种经济动物养殖场内,所养的獭兔中发现一种以急性下痢为特征的病症。根据该病流行特点、临床症状、病因调查、实验室检查等诊断为兔 A 型魏氏梭菌病。㈡流行特点病原菌在自然界分布很广,存在于土壤、蔬菜、饲料、污水、动物的乳汁、粪便和健康动物的肠管中。病兔和带菌兔及其排泄物,含有病原菌的土壤和水源是主要的传染来源。…     

浅谈猪梭菌性肠炎的防治

梭菌性肠炎又称仔猪传染性坏死性肠炎,俗称仔猪红痢,是由C型产气荚膜梭菌引起的一周龄仔猪高度致死性的肠毒血症,以血性下痢,病程短,病死率高,小肠后段的弥漫性出血或坏死性变化为特征。1病原病原体为C型产气荚膜梭菌,亦称魏氏梭菌。革兰氏阳性,有荚膜不运动的厌氧大杆菌,芽胞呈卵圆形,位于菌体中央或近端,但在人工培养基中则不容易形成。根据产生毒素分为A、B、C、D、E共五个血清型,C型毒株主要是α、β毒素,特别是β毒素,它可引起仔猪肠毒血症、坏死性肠炎。形成芽孢后,对外界抵抗力强,80℃15~30min,100℃则几分钟才能杀死。2流行病学     

产气荚膜梭菌α毒素基因的定点突变与表达

选择可能影响α毒素生物活性的氨基酸相关碱基位点进行定点突变,构建α毒素基因的突变体并在大肠杆菌中表达。利用PCR定点突变技术,进行第68位组氨酸→亮氨酸的定点突变,构建含α毒素突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)。结果表明,α毒素突变基因第287位核苷酸由A→T,经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pXMCPA02含有α毒素突变基因,且基因序列和阅读框架正确;重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的33.82%。因此,已成功构建了α毒素基因突变体,并实现了在重组大肠杆菌中的表达。     

气肿疽梭菌细胞毒素CctA基因的克隆及生物信息学分析

根据GenBank中气肿疽梭菌细胞毒素CctA基因的参考序列,采用PCR方法扩增细胞毒素CctA基因。在将该基因进行克隆和测序后利用生物信息学方法,对细胞毒素CctA蛋白的理化性质、结构功能域、蛋白质二级结构和三级结构及抗原表位等重要参数进行了预测和分析。结果表明:与参考序列(JQ692583)相比,存在3处突变,核苷酸序列的同源性和氨基酸序列的同源性均为99.4%;CctA蛋白的理论等电点为8.00,不存在跨膜区和信号肽序列,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,主要有4个抗原表位区域。本研究为CctA蛋白功能的深入研究提供了参考,并为气肿疽梭菌单克隆抗体的制备及合成肽疫苗的研发奠定了基础。     

地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆与表达

产淀粉酶高温菌在淀粉酶的生产中具有重要意义。从温泉中分离到1株可在60℃快速生长的淀粉酶产生菌A12，经16SrDNA序列比较和丙酸盐利用等实验将其鉴定为地衣芽孢杆菌。构建了地衣芽孢杆菌A12基因库，并从中克隆到一个α-淀粉酶基因amyA1，对其进行了测序分析，并在大肠杆菌中实现了表达。本研究为构建一个耐高温淀粉酶生产用工程菌奠定了基础。     

牛产气荚膜梭菌分离株毒素基因的检测与分析

为了解黑龙江省牛源产气荚膜梭菌分离株的基因型,检测β2和CPE两种次要毒素因子在牛源产气荚膜梭菌分离株中的携带情况。通过PCR方法检测了产气荚膜梭菌13个野毒株的cpa、cpb、etx、itx四种分型毒素、cpb2、cpb2的两个等位基因突变体(atypical cpb2和consensus cpb2)及肠毒素(cpe)基因。结果表明:92.3%(12/13)的产气荚膜梭菌分离株为A型,检测到1株D型;A型菌中β2毒素基因检出率为66.7%(8/12);β2毒素基因阳性菌株中75%(6/8)携带非典型cpb2基因,50%(4/8)携带典型cpb2基因,非典型突变体占优势。动物致病性试验发现β2毒素阳性菌株(8株)与β2毒素基因阴性菌株(4株)各有2株分离株具有致病性。所有菌株CPE毒素基因PCR检测均为阴性。研究为产气荚膜梭菌病的发病机理和疫苗开发提供了理论依据。     

獭兔A型魏氏梭菌下痢的诊治

A型魏氏梭菌下痢是由A型魏氏梭菌所产外毒素引起的肠毒血症,以急剧腹泻、排黑色水样或带血胶冻粪便,盲肠浆膜出血斑和胃粘膜出血、溃疡为特征。兔场一旦感染此病,其发病率可达90％以上,病死率高达100％,严重危害着养兔业的发展。     

头功铁药散对A型魏氏梭菌α毒素的mRNA表达及损伤小鼠免疫功能的影响

探讨自拟处方头功铁药散对A型魏氏梭菌α-毒素损伤小鼠免疫功能的影响,并检测了α毒素mRNA表达的情况.检测小鼠部分免疫功能;荧光定量RT-PCR法检测α毒素基因mRNA表达的变化.结果显示,与模型组相比,头功铁药散能拮抗α-毒素对小鼠的损伤,极显著提高小鼠免疫器官指数及巨噬细胞的吞噬能力(p0.01);与细菌模型组相比,头功铁药散能极显著降低α毒素基因表达(p0.01).推测头功铁药散可通过提高小鼠免疫功能,并下调α毒素基因表达,从而减少α-毒素对小鼠的损伤.     

头功铁药散对 A 型魏氏梭菌α毒素的 mRNA表达及损伤小鼠免疫功能的影响

探讨自拟处方头功铁药散对 A 型魏氏梭菌α毒素损伤小鼠免疫功能的影响,并检测了α毒素 mRNA 表达的情况．检测小鼠部分免疫功能;荧光定量 RT‐PCR 法检测α毒素基因 mRNA 表达的变化．结果显示,与模型组相比,头功铁药散能拮抗α毒素对小鼠的损伤,极显著提高小鼠免疫器官指数及巨噬细胞的吞噬能力（p ＜0.01）;与细菌模型组相比,头功铁药散能极显著降低α毒素基因表达（p ＜0.01）．推测头功铁药散可通过提高小鼠免疫功能,并下调α毒素基因表达,从而减少α毒素对小鼠的损伤．     

A型产气荚膜梭菌α毒素的基因扩增和提纯鉴定

为了对A型产气荚膜梭菌α毒素快速准确地做出检测,本实验利用厌氧肉肝汤培养A型产气荚膜梭菌,经革兰染色观察以及含铁牛奶培养基观察其生化特性.然后使用饱和度为60％的硫酸铵粗提其α毒素蛋白,进行透析纯化并应用SDS - PAGE方法鉴定A型产气荚膜梭菌的α毒素,鉴定之后将纯化的α毒素给小鼠腹腔注射来检测其活性.结果表明,厌氧肉肝汤培养基变浑浊且产生大量气体,含铁牛奶培养基发生爆烈发酵现象,SDS - PAGE检测结果,α毒素分子量为43.6kDa,小白鼠出现梭菌病的典型临床症状.本实验为α毒素的鉴定及大量快速提取提供了一种参考方法,为进一步开展梭菌毒素的致病机理及制备类毒素疫苗奠定重要的实验基础.     

贵州黑山羊猝死症的病原学研究--魏氏梭菌的分离与鉴定

魏氏梭菌是一类温和厌氧菌,据对１９９１年以来各地的调查资料和本实验室细菌学检查的研究,结果表明,魏氏梭菌与家畜猝死症的发生有着密切的病原学关系。通过对魏氏梭菌的分类地位、分离培养基、厌氧培养方法、形态、染色、特殊结构、生理和生化反应进行总结与讨论,提出了魏氏梭菌的细菌学鉴定程序。从发生猝死症的黑山羊病例中分离出１４株细菌,经鉴定１１株为魏氏梭菌,占分离菌析的７８．６％;２株为革兰氏阳性的厌氧性梭菌和１株葡萄球菌。     

鹿魏氏梭菌病的病因及防治措施

鹿魏氏梭菌病俗称肠毒血症或血灌肠病,多发于膘情好、吃口性强的成年鹿,该病呈散发性流行,一年四季均可发生：我区自1990～2000年该病呈上升趋势,其中1990-1995年由该病死亡的马鹿达100头,占疾病死亡的50％;1995年至2000年由该病死亡的达120头,占疾病死亡的60％;2001年至今,由于采取了一系列管理措施,大大降低了该病的发生率,减少了鹿的死亡。     

鸡坏死性肠炎的诊治

鸡坏死性肠炎又称肠毒血症,是由魏氏梭菌引起的急性传染病。近年来,该病在养鸡生产中发生较多,但由于养鸡户和部分兽医临床人员对该病认识不足,常造成误诊,耽误治疗时机,从而造成一些不必要的经济损失。现结合我县张家寨养殖场鸡坏死性肠炎病诊治情况,谈一下鸡坏死性肠炎的防疫措施。