蛹虫草活性成分分析

本研究对实验室分离的虫草菌种进行了鉴定,确定其为蛹虫草,经测定其主要活性成分为虫草多糖11．870g／100g、虫草素0．33g／100g、虫草酸9．9g／100g,含量均高于天然冬虫夏草。     

蛹虫草新型菌粉活性成份含量的测定

虫草是一类具有优良医疗保健功效的药用真菌,其中最著名的是冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.],其次是蛹虫草[Cordceps militaris(Fr.)Link.].冬虫夏草因资源紧缺、需求旺盛,加之生境特殊、寄主单一,人工栽培尚无突破性进展,以致市场价格一路飚升.蛹虫草是冬虫夏草的近缘种,也是虫草属的模式种[1],与冬虫夏草在药化和药理上十分相似,在功能食品、医药产品和生物技术方面有很高的实用价值[2],已能进行规模化人工培养,是替代冬虫夏草的首选菌种.     

加硒对蛹虫草主要活性成分含量的影响

[目的]明确不同加硒量对蛹虫草主要活性成分含量的影响。[方法]向固体培养基中加入不同含量的亚硒酸钠,接种培养后用高效液相色谱法测定虫草素和腺苷,用高碘酸钠法测定虫草酸,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖。[结果]虫草素在加硒量为5.5mg/kg时达到4.50mg/g,虫草酸在加硒量为4.0mg/kg时达到30.06mg/g,腺苷和虫草多糖含量与加硒量无明显相关性。[结论]加硒可显著提高蛹虫草固体培养物中虫草素和虫草酸含量,但医疗保健功效的提高还需通过动物试验加以验证。     

不同配方下固体培养蛹虫草活性成分含量比较

以蚕蛹、黄豆、玉米糁、蛋白胨为原料固体栽培蛹虫草,研究不同配方培养基对蛹虫草虫草素、腺苷、多糖、虫草酸含量的影响。结果表明,配方5下蛹虫草虫草素含量最高,配方1下腺苷含量最高,配方4下多糖、虫草酸含量最高,在纯蛹培养基中添加适量黄豆、玉米糁、蛋白胨有利于蛹虫草活性物质的提高。     

8种物质对蛹虫草液体发酵中虫草素及多糖含量的影响

【目的】研究不同前体物及营养物对蛹虫草液体发酵中虫草素和虫草多糖含量的影响,筛选提高虫草素及虫草多糖的最适添加物及其添加质量浓度。【方法】将不同质量浓度的腺苷、核糖、次黄嘌呤、谷氨酰胺、甘氨酸、核黄素、苯丙氨酸及甲硫氨酸8种物质添加到蛹虫草液体发酵培养基中,提取菌丝体中的虫草素与多糖,分别用HPLC法、硫酸-苯酚法对其含量进行检测。【结果】在8种添加物中,腺苷、核糖、谷氨酰胺、甘氨酸均能明显提高虫草素及虫草多糖的含量,其最适添加量分别为4.0,2.0～3.0,0.5～1.0,0.5mg/mL;苯丙氨酸、甲硫氨酸、次黄嘌呤对蛹虫草液体发酵中虫草素和多糖含量的促进作用不明显;核黄素对虫草素与多糖合成有抑制作用。【结论】蛹虫草发酵过程中添加腺苷合成途径中的前体物能明显提高其中的虫草素与虫草多糖含量。     

蛹虫草菌丝液体培养基中适宜碳源和氮源的研究

以蛹虫草斜面固体菌种为试验材料,研究了5种碳源（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖和可溶性淀粉）和4种氮源（蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏和柠檬酸氢二铵）对蛹虫草菌丝产量的影响,以确定培养基的最佳碳源和氮源种类;同时分别研究了不同浓度的最佳碳源和氮源对蛹虫草菌丝产量的影响。结果表明：最适宜碳源为可溶性淀粉,适宜浓度为20 g/L;最佳氮源为酵母膏,适宜浓度为5 g/L。     

不同培养基对蛹虫草子实体甘露醇、多糖和矿质元素含量的影响

采用大米培养基、小米培养基和大米猪血混合培养基培育蛹虫草,探索营养成分对蛹虫草子实体中的甘露醇、虫草多糖和矿物质元素的含量影响.结果表明:大米培养基培育的子实体中D-甘露醇含量最多,为13.9mg·g-1;猪血大米混合培养基培育的子实体中虫草多糖含量最高,为13.9mg·g-1;小米培养基培育的子实体所含的矿物质元素Cu、Zn、Mg、Na的含量最高,分别为13.65mg.kg-1、107.05mg·kg-1、31.95mg·kg-1和398.85mg·kg-1;而大米猪血混合培养基培育的子实体中Fe、Mn、K的含量最高,分别为75.20mg·kg-1、3.80mg·kg-1和12.28g·kg-1.     

蛹虫草培养基碳源和氮源对菌丝生长量的影响

采用菌丝重量法研究了蛹虫草培养基的碳源与氮源,比较了不同碳、氮源品种间的差异,筛选出较佳的碳源与氮源,并对二者的含量进行了研究。结果表明在0~5%之间,菌丝生长量随碳、氮源含量的增加而增加;同时碳氮比的研究也从另一侧面证实了以上结论。     

不同氮源对蛹虫草菌丝及子实体生长状况的影响

为研究蛹虫草液体菌种制备及发菌出草等人工栽培全过程中所必需的适宜氮源,比较观察了常见无机氮源硝酸钾、尿素及常见有机氮源蚕蛹粉、蛋白胨、蛋清液、鱼粉对菌种质量、菌丝生长状况、发菌及出草情况的影响。结果表明,各种氮源对蛹虫草菌丝体生长均有一定的促进作用,有机氮源显著优于无机氮源,液体菌种生长以蛋白胨为佳;发菌出草培养基最佳氮源依次为蚕蛹粉、蛋白胨、鱼粉、蛋清液等有机氮源,其中,蚕蛹粉具有较好的促进出草作用,但抗感染能力弱于其他有机氮源。蛋白胨、蛋清液、鱼粉等有机氮源氮素营养全面、丰富,营养容易被菌丝吸收,菌丝生长健壮;制备液体菌种氮源以蛋白胨为佳,发菌出草以包括蚕蛹粉的复合氮源为佳。     

蛹虫草菌液体培养基配方优化研究

利用L9(34)正交试验设计,研究了蛹虫草菌液体培养基不同营养成分对蛹虫草菌丝生长干质量的影响,以对蛹虫草液体培养基配方进行优化。结果表明,蛹虫草液体培养基最佳配方为:玉米粉1%、麦麸1%、葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg·L-1。蛹虫草菌最终菌体总干质量达到14.85g·L-1。     

蛹虫草菌液体发酵工艺的研究

通过恒温振荡液体培养法,研究了蛹虫草菌合理的发酵条件及其对各营养物质的利用情况。采用正交实验,应用方差分析法,确定了合理的发酵条件:22℃、150 r/m in、pH 6~7、接种量10%、培养时间6d;筛选出合理的液体培养基:蔗糖4.0%、玉米汁3.0%、麸皮3.0%、全脂牛奶粉1.0%、蛋白胨0.5%、VB10.01%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%。     

蛹虫草菌丝体液体发酵培养条件的优化研究

以蛹虫草菌丝体发酵液中的菌丝体干重和粗多糖产量为指标,筛选出液体培养基的最适碳源为蔗糖,最适氮源为黄豆粉。通过四因素三水平的正交试验,优化出液体发酵培养基的最佳配方为马铃薯20%,蔗糖5%,黄豆粉2%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.1%,维生素B10.01%。并确定了摇瓶最优发酵工艺条件为装液量100 mL·250mL-1三角瓶,菌龄为72 h,接种量为15%,起始pH 6.0,温度24℃,摇床转速150 r·min-1,最适发酵周期为120 h。     

蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究

采用以大米、蚕蛹为主原料的培养基培养蛹虫草子实体。通过正交实验对蛹虫草水溶性多糖的提取工艺进行了研究,利用蒽酮-硫酸法来测定多糖含量。发现90℃、加水20倍、分3次提取、每次3 h为最佳提取条件。同时考查了不同除蛋白方法对虫草多糖的蛋白去除效果。     

蛹虫草深层发酵富集微量元素锌的研究

以蛹虫草为材料,在温度为22℃,摇瓶转速为120r/min条件下,研究了锌浓度对菌丝体生长的影响;并通过锌浓度、培养时间、pH值、培养基等4因素正交试验组合,研究了菌丝体生长量、菌体产胞内外多糖量、有机锌转化率的最佳条件。结果表明,低浓度的锌可以促进虫草菌丝体生长,而高浓度的锌则抑制菌丝体生长,虫草菌丝体生长的最适锌浓度为100～150μg/ml;虫草菌丝体生长的最佳条件组合为锌浓度100μg/ml,培养6d,pH值7,培养基选用麸皮培养基;产胞外糖最佳条件组合为锌浓度100μg/ml,培养4d,pH值8,培养基选用马铃薯培养基;产胞内糖及锌转化率最佳条件组合为锌浓度100μg/ml,培养时间为6d,pH值7,培养基选用马铃薯培养基,该条件下产胞内糖达24.264mg/100ml,有机锌率转化最高为18.4%。     

北虫草液体菌种的最佳培养时间

为了探究北虫草液体菌种培养过程中相关酶活性与其生长发育及菌种活力之间的关系,确定较佳液体菌种培养时间,进行北虫草液体菌种培养过程中淀粉酶活性、纤维素酶活性、还原糖含量和菌丝干重等的研究。结果表明:北虫草培养第5天时菌丝增重速率达最大;培养前7d还原糖代谢基本平衡,7d后下降加快;纤维素酶活性在第3天时达到最大;淀粉酶活性在第4天时达到最大。北虫草较佳液体菌种培养时间为5d。     

北虫草栽培技术研究

[目的]探讨栽培技术对尖头北虫草产量的影响。[方法]设置液体培养基、菌种代数、栽培培养基养分和VB1含量、菌液接种量、补充液体成分等不同处理,按照常规方法栽培北虫草,测定子实体产量,用SPSS软件对数据进行统计分析。[结果]液体培养基成分对子实体产量有显著性影响(P0.05);F1代和F2代产量没有显著性差异(P0.05);不同栽培培养基养分和VB1含量处理产量之间没有显著性差异(P0.05);接种5 ml菌液的处理产量极显著高于接种2 ml菌液的处理产量(P0.01);补充清水和营养液子实体产量之间没有显著性差异(P0.05)。[结论]液体培养基中添加一定天然有机物可以提高子实体产量;尖头北虫草菌种继代1～2次对产量没有明显影响,栽培培养基营养液成分和VB1含量对产量没有明显影响,足够的菌液接种量可以提高产量;培养过程中补充清水即可。     

蛹虫草发酵菌丝体培养条件研究

[目的]对蛹虫草菌丝生长条件进行优化,为发酵工业中液体深层发酵生产蛹虫草的药用有效成分提供参考。[方法]通过单因素试验,改变碳源、氮源、接种菌龄、培养基起始pH、培养周期、培养温度、摇床速度、接种量和装液量来确定蛹虫草菌丝生长最佳条件。[结果]最佳发酵条件为：碳源为蔗糖,浓度为2％,氮源为蛋白胨,浓度为1％,接种菌龄为36h,培养基起始pH值为6．5,培养周期为6d,培养温度为24℃,摇床速度为200r／min,在250ml锥形瓶中的装液量为150ml;在此条件下,菌丝体干重最大。[结论]该方法获得了蛹虫草C-7发酵菌丝体的最佳培养条件,为蛹虫草的进一步开发利用提供依据。     

蛹虫草多糖配合果蔬酵素对抗氧化作用的研究

[目的]研究蛹虫草多糖与复合果蔬酵素的复合物对动物细胞的抗氧化性。[方法]试验将蛹虫草多糖与复合果蔬酵素的复合物分别饲喂和注射给小鼠,观察该复合物在小鼠体内的作用和在小鼠体外对超氧阴离子自由基、羟自由基的清除作用。[结果]试验表明,该复合物在小鼠体内可使SOD明显增加,在体外可有效清除超氧阴离子自由基、羟自由基,具有较强的抗氧化性作用。[结论]研究可为含有虫草多糖的新型复合果蔬酵素新品规模化生产提供理论依据。