葡萄灰霉病优势拮抗细菌的筛选与鉴定

以葡萄灰霉病病菌为供试菌,采用平板对峙法,研究了葡萄果穗附生细菌对葡萄灰霉病的拮抗效果。同时,进行生理生化、16S r DNA序列鉴定与同源性分析。结果表明,在分离得到的13株附生细菌中,其中11株对葡萄灰霉病有不同程度的拮抗作用,且拮抗菌的保护作用优于治疗作用。其中,B5和B12对葡萄灰霉病病菌孢子的抑菌率均为100%,对葡萄灰霉病病菌菌丝的抑菌率分别为14.49%和15.17%,显著高于其他拮抗菌(P0.05)。B5、B12菌株具有良好的拮抗和离体抑制效果,拮抗菌鉴定与同源性分析结果表明,B5属于芽孢杆菌属,B12属于枯草芽孢杆菌。     

酵母菌0939-5对葡萄灰霉病菌抑制作用研究

采用双皿对扣法和平板隔离对峙法研究了酵母菌0939-5对葡萄灰霉菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,并根据其产生的挥发性物质,以活性炭处理检验其对葡萄灰霉病菌丝和分生孢子的抑制作用。结果表明,酵母菌0939-5产生的挥发性物质对葡萄灰霉病菌的生长(抑制率为71.59%)及其分生孢子(抑制率为99.33%)的萌发具有显著的抑制作用;添加活性炭吸附后,葡萄灰霉病菌菌丝的生长及分生孢子的萌发恢复了活性,显著降低了抑制作用。同时,酵母菌0939-5产生的挥发性物质对7种病原真菌也具有明显的抑制作用,尤其对棉花立枯丝核菌病菌(Rhizoctonia solani Kühn)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahlia)的抑菌效果较好,其抑菌率达90.93%~94.00%。     

淡紫紫孢菌防治采后番茄果实灰霉病

本文通过孢子萌发检测、平板生长抑制法和果实病害防治试验,测定了淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinus PL36-1防治储藏期番茄果实灰霉病的效果。结果表明,菌株PL36-1发酵滤液不仅能够抑制灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长,而且可以抑制灰葡萄孢菌丝生长。对峙培养的菌株PL36-1显著抑制灰葡萄孢的菌丝生长,菌丝生长抑制率可达到74.45%,菌株PL36-1产生的挥发性物质也对灰葡萄孢菌丝生长有一定的抑制作用。菌株PL36-1发酵液处理樱桃番茄果实后,能有效控制番茄果实灰霉病的发生,含有2×10~8孢子/m L的发酵液10 d的防治效果达70.64%。     

武夷菌素防治葡萄灰霉病的作用及机理

为了探讨武夷菌素对葡萄灰霉病的防治效果及作用机理,本文通过菌丝生长速率测定、分生孢子萌发抑制测定、胼胝质沉积测定、离体叶片和果实防治等试验,发现武夷菌素可以抑制灰霉病菌的菌丝生长,浓度达到120μg/mL时,对菌丝的抑制作用达到94.3%;当浓度达到100μg/mL时,武夷菌素对葡萄灰霉病菌的孢子萌发抑制率可达到96.0%;通过离体叶片及果实防效试验发现,武夷菌素浓度达到120μg/mL时,防治效果分别为87.5%和96.6%。武夷菌素可以显著降低灰霉病菌的草酸合成能力,导致其致病力减弱,从而减轻灰霉病菌对寄主的侵染。武夷菌素能够通过诱导葡萄叶片的胼胝质沉积,增加葡萄组织的防御能力,从而起到有效防治灰霉病的作用。综上所述,武夷菌素对葡萄灰霉病具有良好的防治效果,可以作为生物防治药剂进行应用推广。     

淡紫拟青霉QLP12对感染灰霉病后番茄植株的促生作用及抗病相关酶活性变化

为探究淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus菌株QLP12对番茄植株促生作用及番茄灰霉病的防治效果,采用平板对峙法测定菌株QLP12对番茄灰霉病菌即灰葡萄孢Botrytis cinerea的抑制作用,用离体叶片、果实、植株接种法研究其对番茄灰霉病的防效,并对盆栽番茄的促生效果、防御酶活性、丙二醛(MDA)和脯氨酸含进行测定。结果表明,菌株QLP12发酵滤液对灰葡萄孢菌丝生长的抑制率为58.97%,对分生孢子萌发的抑制率为89.28%;盆栽试验结果显示,菌株QLP12发酵液对番茄灰霉病的防效为50.20%;在灰葡萄孢胁迫下,菌株QLP12处理可诱导植株叶片组织防御酶活性和脯氨酸含量升高,丙二醛含量降低,同时促进番茄幼苗生长,株高、茎粗、干鲜比和叶绿素含量与对照相比均有显著提高。表明生防菌QLP12可通过诱导植株防御酶活性的提高,有效抑制番茄灰霉病发生,并促进番茄幼苗生长。     

番茄灰霉病菌拮抗放线菌的筛选、鉴定及其活性评价

从安徽省寿县农田土壤中分离筛选到1株对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea有强拮抗作用的放线菌菌株HNU-1。根据菌体形态特征、培养特征、细胞壁组分、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析,将该菌株鉴定为吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。菌株HNU-1发酵滤液可抑制灰霉病菌菌丝生长和分生孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强;当发酵滤液稀释6.67倍时则完全抑制灰霉病菌菌丝生长和分生孢子萌发。盆栽试验结果表明,菌株HNU-1发酵滤液6.67倍稀释液对番茄灰霉病的预防与治疗效果分别为87.8%和77.9%,均显著高于50%多菌灵可湿性粉剂500倍稀释液。     

生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果

本研究以葡萄灰霉病菌Botrytis cinerea为靶标菌，通过抑菌圈试验、分生孢子萌发抑制试验、离体果实接种试验，将枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis GLB191和短小芽胞杆菌Bacillus pumilus GLB197生防菌株单独或混合接种，初步探究了单菌株和两菌株混合对葡萄灰霉病菌的抑制效果。试验结果表明，各处理抑菌圈大小达30 mm以上，灰霉孢子萌发抑制率达94%以上，其中两菌株混合500倍稀释液对孢子萌发抑制率高于单菌株处理；离体果实接种试验表明，两菌株混合处理病斑抑制率高达70.89%，高于单菌株GLB191和GLB197的病斑抑制率55.48%和52.91%。田间防效试验表明，两菌株混合防效与化学药剂无显著差异，防效为70.02%。因此，两菌株混合接种可更有效地防治葡萄灰霉病的发生。     

海洋生境贝莱斯芽孢杆菌TCS001的鉴定及抑真菌活性

为研究海洋生境芽孢杆菌TCS001的分类地位和抑菌活性,通过形态和生理生化特征观察,并结合gyrA序列同源性分析对菌株进行了鉴定;通过平板对峙培养法测定了菌株TCS001对多种植物病原真菌的抑菌谱;采用菌丝生长速率法和凹玻片法,测定了不同浓度TCS001菌株发酵滤液对靶标菌黄瓜灰霉病菌Botrytis cinerea菌丝生长和孢子萌发的影响。结果显示:该菌株为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis,其对6种供试病原菌均有一定的抑制效果,其中对黄瓜灰霉病菌的抑制率最高,达87.66%。不同稀释倍数下,TCS001发酵滤液对黄瓜灰霉病菌均有一定的抑制作用,其中,稀释5倍时对菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,分别为96.24%和98.05%,稀释20倍时抑制率也均达90%以上。形态学观察发现,TCS001发酵滤液可导致黄瓜灰霉病菌孢子萌发芽管中间或顶端膨大畸形。研究表明,海洋生境贝莱斯芽孢杆菌TCS001极具开发为微生物农药的潜能。     

拮抗菌P1、P5对葡萄灰霉病菌的抑制作用及其抗真菌谱的测定

从葡萄果穗附生微生物区系分离获得的拮抗细菌P1、P5,对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)具有很强的拮抗作用。通过对其抑菌效果、机制和抗真菌谱进行测定,结果表明,P1、P5和葡萄灰霉病菌对峙培养5 d后,均产生明显的抑菌带,抑菌带宽度为6.90～9.67 mm,培养10 d后,仍然保持稳定的抑菌效果;P1、P5的发酵原液对葡萄灰霉病菌孢子萌发具有显著的抑制作用,抑制率为97.51%～98.12%;P1、P5对病菌的作用机制表现为使病菌菌丝畸形、原生质浓缩、菌丝断裂、抑制病菌分生孢子的萌发、导致孢子芽管扭曲。对峙培养表明,P1、P5均具有较广的抗真菌谱,对10种供试病原真菌的菌丝生长抑制率都在50%以上。     

几种药用植物杀菌活性的初步研究

以茄链格孢（Alternaria solani）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（F. solani）、出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）为供试真菌,用生长速率法和孢子萌发法对8种药用植物提取物的离体活性进行测定。结果表明：在生药质量浓度为0.1 g/mL时,党参和黄芩对5种供试菌菌丝的抑制率达78%以上,苦参和地黄对5 种供试菌菌丝的抑制率达65%,苦参、党参和黄芩对5 种供试菌的孢子萌发抑制率大于70%。尤其是党参、黄芩和苦参的提取液对5 种供试菌的菌丝生长和孢子萌发抑制率均大于65%,值得进一步研究开发。     

我国葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性测定

灰霉病是葡萄生产上的重要病害之一,严重影响葡萄果实的品质和产量。为明确葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性,本研究分别采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了四霉素和啶酰菌胺对采自云南省宾川县、湖北省武汉市和辽宁省北镇市60株葡萄灰霉病菌的有效抑制中浓度EC₅₀,建立了敏感性基线,并分析了二者之间的交互抗性。结果显示,葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感基线分别为0.245和1.115 μg/mL;上述葡萄灰霉病菌均对四霉素敏感,而11.7%的菌株表现为啶酰菌胺抗性。并且四霉素与啶酰菌胺之间不存在交互抗性(r=-0.040,P>0.05)。因此,四霉素可作为防治葡萄灰霉病的候选药剂,研究结果对两种杀菌剂的科学使用以及葡萄灰霉病的可持续防控具有重要的理论和实践意义。     

卡利比克迈耶氏酵母对水果采后病害的抑制及对展青霉素的降解机制

为了明确拮抗酵母卡利比克迈耶氏酵母Meyerozyma caribbica对果实采后病害的抑制效果及其对毒素的降解机制, 本文研究了卡利比克迈耶氏酵母结合辅助因子褐藻寡糖(alginate oligosaccharide, AOS), 对草莓、梨、苹果、番茄的青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果, 以及拮抗酵母不同处理液对展青霉素(patulin, PAT)体外降解的机制。结果表明, 浓度为1×108 cfu/mL的M. caribbica可有效抑制草莓、梨、苹果青霉病, 草莓、番茄、葡萄灰霉病以及番茄、梨、葡萄黑斑病的发生, 添加5 g/L的AOS能显著增强M. caribbica的抑制效果; M. caribbica发酵液可以有效降解苹果伤口处的PAT, 处理后8 d其降解率为30.35%, 经AOS诱导后, 其对PAT的降解效率达到39.15%。体外条件下, 接种M. caribbica后27 h可将10 μg/mL的PAT完全降解; M. caribbica主要是通过活细胞代谢降解PAT, 同时AOS可显著增加M. caribbica 的降解能力, 说明卡利比克迈耶氏酵母是一株生防潜力较好的菌株, 本研究为该生防菌株的进一步应用奠定了基础。     

黑龙江和云南葡萄产区灰霉病菌对多菌灵和异菌脲的抗性检测

为明确黑龙江省和云南省葡萄灰霉病菌对多菌灵和异菌脲的抗性频率, 从两省分别采集?分离到葡萄灰霉病菌 Botrytis cinerea 39株和38株, 利用菌丝生长速率法测定其对多菌灵和异菌脲的敏感性, 并分别检测上述菌株两种药剂靶标基因 β-tubulin 和 Bos1 的突变情况?结果表明, 黑龙江省葡萄灰霉病菌对多菌灵和异菌脲的抗性频率以及对两种杀菌剂的多药抗性频率分别为100.0%?51.3%和51.3%; 云南省葡萄灰霉病菌对多菌灵和异菌脲的抗性频率以及对两种杀菌剂的多药抗性频率均为97.4%?两地区的多菌灵抗性菌株的 β-tubulin 基因上均发生了E198A或E198V突变?异菌脲抗性菌株的 Bos1 基因存在I365N?I365S?Q369P+N373和Q369P等4种突变类型?研究结果表明, 在上述两个地区不宜单独使用多菌灵和异菌脲防治葡萄灰霉病, 应使用其他作用机制不同且抑菌效果好的杀菌剂?     

出芽短梗霉对苹果采后灰霉病的防治

通过稀释平板法和离体果实接种法从苹果表面分离筛选到1株对苹果采后灰霉病Botrytis cinerea具有显著防治效果的酵母菌株2SP,该酵母菌孢子悬浮液对苹果灰霉病的防治效果为78.45%,对灰霉菌孢子的萌发抑制率为90.0%,而过滤上清液和离心灭菌上清液对灰霉病菌防治效果较差,表明营养和空间竞争可能是该酵母菌抑制灰霉病发展的主要机制。该酵母菌在苹果伤口接种后置于4℃低温条件下,30 d后仍能存活,且酵母菌的数量高于起始值。通过26S rDNA D1/D2序列分析,将该酵母菌株初步鉴定为出芽短梗霉Aureobasidium pullulans。     

链霉菌SS9-1发酵条件优化及其对番茄灰霉病的防治效果研究

本实验室前期从铁棒锤根际土壤样品中分离到一株高加索链霉菌Streptomyces ciscaucasicus SS9-1,抗菌活性试验发现其对番茄灰霉病原菌灰葡萄孢Botrytis cinerea具有较好的抑制作用。为进一步提高其对番茄灰霉病的抑菌效果,采用单因素试验、正交试验对SS9-1进行发酵培养基配方和发酵条件优化,并对其发酵滤液进行了番茄灰霉病的抑菌作用试验及盆栽防治效果试验。结果表明,菌株SS9-1最佳发酵配方为：可溶性淀粉4%、KNO₃ 1%、酵母浸粉0.25%、NaCl 0.2%、MnCl₂·4H₂O 0.002%;最佳发酵条件为：装液量150 mL、接种量3%、初始pH 8.0、发酵温度28℃、发酵时间7 d。平板对峙试验发现,番茄灰霉病菌丝受发酵滤液影响后,出现膨大畸变现象;菌株SS9-1对番茄灰霉菌孢子的萌发也具有很强的抑制作用,处理12、24h后萌发抑制率分别为97.83%和96.07%。盆栽试验中,菌株SS9-1发酵滤液原液防治效果达到了98.43%,明显高于药剂对照40%嘧霉胺SC 500倍稀释...     

福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺敏感基线建立及与不同杀菌剂的交互抗性

为明确中国福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感性及其与不同杀菌剂的交互抗性,采用菌丝生长速率法测定了106株采自福建省主要番茄产区的番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感性。结果表明,氟啶胺对福建省番茄灰霉病菌菌丝生长的EC50值在0.0037～0.0452 μg/mL之间,平均值为（0.0221 ±0.0098）μg/mL,其敏感性频率分布呈连续单峰曲线,符合正态分布,因此可将该EC50平均值（0.0221±0.0098）μg/mL作为福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感基线,用于其田间抗药性监测。从106株菌株中选择15株对氟啶胺敏感性不同的菌株,测定了其对嘧霉胺、异菌脲、腐霉利和啶氧菌酯的敏感性。结果表明,供试5种杀菌剂对15株番茄灰霉病菌菌丝生长的平均抑制活性依次为氟啶胺 >异菌脲 >腐霉利 >啶氧菌酯 >嘧霉胺,氟啶胺与异菌脲、腐霉利、啶氧菌酯和嘧霉胺之间均不存在交互抗性。     

一株平沙绿僵菌的鉴定及生防应用潜力评价

利用大蜡螟诱集法,从黑龙江地区不同类型土样中筛选分离到一株虫生真菌FZZ菌株,经形态学及18SrDNA ITS序列分析鉴定为平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense(KY419576)。通过对平沙绿僵菌FZZ菌株的生物学特性、其对小菜蛾Plutella xylostella 2龄幼虫的致病性及对7种植物病原菌的抑菌活性的研究结果表明,FZZ菌株菌丝生长的最适温度为25℃,产孢的最适温度范围为20~25℃,30℃孢子萌发率最高,但48h也仅为48%。浓度为1.0×109个/mL的孢子悬浮液处理小菜蛾2龄幼虫,5d后校正累计侵染率为78.33%。FZZ菌株对7株植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,对水稻稻瘟病菌Magnaporthe oryzae菌丝抑制率最高,达45.45%,对大豆根腐病菌Fusarium oxysporum的抑制率最低,为36.31%。FZZ菌株发酵滤液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea有较强抑菌活性,抑菌带宽直径达2.93cm,对其余6种病原菌未表现出抑制效果。此结果对筛选高效平沙绿僵菌及扩大其生防范围具有重要意义。     

伯氏嗜线虫致病杆菌娩norhabdus bovienii YL002对4种抗生素抗性突变株的筛选及抑菌活性分析

为了提高伯氏嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus bovienii YL002抑菌活性,采用紫外线照射和吖啶橙复合诱变的方法,对其进行诱变改良,并在抗生素最小抑制浓度选择压力下筛选对4种抗生素具有抗性的突变菌株.以枯草芽孢杆菌为指示菌,得到了 17 株抑菌活性有显著变化且遗传稳定的突变菌株.其中菌株L0420-3对枯草芽孢杆菌的抑制活性最强,连续转接 5 次的抑菌圈直径增大率均在 80%以上;菌株Q025-1和L0314-4对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率为 75.66%和 73.41%,分别是野生菌株的 1.35 倍和 1.31 倍;接种灰霉病菌后 5 d对番茄果实灰霉病的防效为 95.74%和 93.62%,分别是野生菌株的 1.71倍和 1.67 倍.     

拟康宁木霉Tk1的分离鉴定、拮抗作用及其生物学特性

为了分离利用高效植物病害生物防治菌株,从广东药用植物金丝皇菊根部分离获得一株木霉菌株Tk1。经过形态观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析明确其为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。用平板对峙培养法测定,该菌株对金丝皇菊枯萎病菌（尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum）和柑橘炭疽病菌（胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides）的抑制率分别为68.5%和77.1%,且在后期能完全覆盖或部分覆盖病原真菌。其无菌发酵液对金丝皇菊枯萎病菌的抑制率为45.55%。该菌株营养生长和产孢的最适碳源分别为乳糖和葡萄糖,最适氮源是酵母膏;在pH 4~11的培养基上均可生长、产孢,最适pH为7;12 h交替光照条件下菌丝的生长速度最快,全光照条件下产孢数量最大;该菌株的致死温度为73℃处理10 min。     

格氏沙雷菌CNY-04对灰霉病菌作用机制及抑菌物质理化性质研究

从蔬菜根际土壤中筛选到一株生防格氏沙雷菌(Serratia grimesii)CNY-04,利用抑菌圈法测定其对灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.ex Fr.)的抑制效果,通过抑制孢子萌发、影响菌丝正常生长试验对CNY-04的作用机制进行研究,并对CNY-04菌株相关性状及抑菌物质的理化性质进行了研究.结果表明,CNY-04菌株对灰霉病菌拮抗能力强且遗传稳定,抑菌圈直径达到34 mm; CNY-04可对灰霉病菌菌丝结构造成破坏;可显著抑制灰霉病菌分生孢子萌发,抑制率为99％;CNY-04菌株不产生硝吡咯菌素、氢氰酸及水解酶类,可产生嗜铁索和蛋白酶;抑菌物质具有较好的热稳定性和酸碱稳定性.抑菌物质由灰霉病菌诱导产生,与已报道的沙雷菌属的作用机理完全不同.