嘧霉胺对梨黑斑病菌(Alternaria alternata)的毒力及其药效评价

采用菌丝生长速率法测定了嘧霉胺对梨黑斑病病原菌链格孢菌(Alternaria alternata)的毒力,并进行其对梨黑斑病的田间药效试验。结果表明：嘧霉胺对梨黑斑病菌菌丝生长抑制的EC50为0.126 8 μg/mL ;40%嘧霉胺可湿性粉剂250～500 mg/L对梨黑斑病的防效为66%～82%,且该药剂在本试验剂量范围内对梨树安全。     

梨黑斑病菌丙酸热空气联合处理技术研究

为了开发安全环保的梨黑斑病采后处理技术,满足出口国检疫要求,本文测定了不同浓度丙酸浸泡联合热空气处理对梨黑斑病菌发病和鸭梨品质的影响。结果表明,联合处理能有效抑制梨黑斑病发病,丙酸浓度越高,达到99%抑制率所需热处理时间越短,然而3%丙酸处理组有药害发生。进一步的验证实验表明,2%丙酸结合45℃热空气处理200 min以上,可完全抑制接种鸭梨发病,对鸭梨的硬度、糖度、酸度等品质指标无明显影响,且能显著降低鸭梨的呼吸速率和失重率,有利于保持鸭梨品质,可作为出口鸭梨黑斑病的采后处理技术指标。     

苹果梨黑斑病的发生及侵染过程

苹果梨果实的黑斑病为典型的潜伏侵染性病害,采后冷藏60天,表面光滑无任何症状,采后90天开始,皮孔或萼筒伸出黑灰色菌丝,进而其周围组织坏死形成黑斑.采后100天,黑斑病的发病率达28.86%.黑斑病是由链格孢Alternaria alternata（Fr.）Keissl.侵染引起的,链格孢在采前可经两条途径侵入苹果梨果实.一是在花朵开放时经花柱侵入,花后50天定殖于花柱的病原菌通过萼室间组织陆续进入心室,至采收时,心室中链格孢出现率可达45%;二是自果实膨大期开始侵入果皮,潜伏于皮下组织,至采收时萼端、胴部、梗端链格孢的带菌率分别为40%、24%和42.8%.     

库尔勒香梨贮藏研究

库尔勒香梨是新疆的著名特产水果之一,皮薄多汁,有浓郁香味,采后经一段时间贮藏则更为可口;品质之佳可与国内最优良的梨相媲美。但在贮藏期间存在绉缩、腐烂等问题,影响商品价值。为了延长市场供应时间,改善贮藏香梨质量,近几年来,我们对香梨进行了不同贮藏条件,不同包装方法及果实采后生理变化规律的研究,现将结果介绍如下。     

梨黑斑病菌遗传操作体系的建立与RFP标记转化子的致病性分析

由链格孢(Alternaria alternata)引起的梨黑斑病是我国梨生产上的主要病害之一,导致梨叶与果实产生黑斑症状及早期落叶,对我国梨产业的健康发展构成严重威胁。本实验在前期获得强致病性梨黑斑病菌菌株HN-5基础上,建立该病菌的遗传转化体系。通过优化原生质体制备过程以及转化体系发现梨黑斑病菌HN-5原生质体制备的最优条件为:菌丝在M R液体培养基中培养36 h;以0.7 M NaCl+0.8 M Mannitol为稳渗剂,配置复合细胞壁裂解酶(1%崩溃酶+1%裂解酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶),酶解菌丝3 h,原生质体的产量可达0.5×10~7个·mL~(-1)。通过PEG介导的原生质体遗传转化体系,将含有RFP基因的质粒p KD7转入链格孢菌HN-5中,转化效率为6个·μg~(-1)DNA。PCR检测和转化子荧光观察均表明RFP基因整合到了HN-5基因组中并成功表达。致病性分析发现RFP (Red Fluorescent Protein)标记转化子致病性未发生变化。本研究成功建立了PEG (Polyethylene glycol)介导的梨黑斑病菌遗传转化体系,构建了RFP标记菌株,为研究该病菌的致病机理奠定基础。     

南疆骏枣黑斑病症状表现及病原菌鉴定

为明确南疆骏枣黑斑病的症状表现及病原菌种类,2013—2014年在新疆建设兵团第一师选取具有代表性的5个骏枣园,对枣叶、花、果等组织上黑斑病的症状进行了系统调查,采用组织分离法和回接试验分离病原菌及测定其致病性,并根据病菌形态特征、ITS序列和β-tubulin序列分析对病原菌进行了鉴定。结果表明:枣叶、花和果均可感染黑斑病菌,室内接种和田间骏枣黑斑病症状相同,叶、花和果中的病原菌可以相互侵染,并在枣果上均表现出黑斑病典型症状;不同发病组织中分离纯化得到357株菌株,形态观察表明,侵染叶、花和果的菌株均为链格孢属链格孢菌Alternaria alternata(Fr.)Keissler;通过ITS序列和β-tubulin序列分析,并结合形态学特征进一步确定引起骏枣不同组织的黑斑病病原菌为链格孢菌A.alternata。     

鸭梨包装环节和出口前检验对链格孢菌侵染的影响

用梨果实上分离的链格孢(Alternaria alternata)接种的方法验证了鸭梨包装过程的不同环节和出口前检验造成果实表面伤口,从而导致A.alternata侵染的可能性。试验结果显示,这些环节造成果实伤口的可能性不大。试验同时进一步证实了A.alternata是一个引起果实贮藏期腐烂的病原。     

2株枯草芽孢杆菌对太子参4种病原真菌的抑菌效果研究

采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株GH18和GH19对贵州省黔东南州太子参(Pseudostellaria heterophylla)的病原真菌互隔交链孢霉菌(Alternaria alternata)、博宁刺盘孢(Colletotrichum boninense)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)进行了抑菌效果研究。结果表明,菌株GH18和GH19对4种病原真菌都有抑菌效果,菌株GH18无细胞滤液对互隔交链孢菌孢子的抑菌效果优于GH19。菌株GH18高温杀死菌体发酵液在浓度为2.0×10~8 cfu/L和2.0×10~7 cfu/L分别处理,对互隔交链孢霉菌、博宁刺盘孢抑菌率相近。处理3d的抑菌效果优于4 d;其发酵液的抑菌率高于无细胞滤液。菌株GH18高温杀死菌体发酵液在浓度为2.0×10~8cfu/L对互隔交链孢霉菌、博宁刺盘孢抑菌效果较好,胶孢炭疽菌效果次之。因立枯丝核菌气生菌丝生长旺盛,抑菌率较低,故不适合采用生防菌GH18和GH19进行生防。     

云南、广西三七黑斑病病原链格孢菌的鉴定

正黑斑病是三七栽培生产中常见的一大病害,叶片受害产生近圆形或不规则水浸状病斑,常导致成株落叶、幼苗生长点及茎秆顶端腐烂枯死。其病原一般认为是链格孢属真菌人参链格Alternaria panax Whetzel~([1,2]),也有相关研究证明黑斑病病原为细链格孢Alternaria tenuis Nees~([3]),后定名为链格孢Alternaria alternata Keissl~([4])。本研究利用ITS序列和histone 3部分编码序列的PCR鉴定,结合形态学鉴定,分析三七主产区黑斑病菌的组成和分布情况及几种病原菌的致病力差异,以期为三七黑斑病防治提供理论依据。     

水稻新病害叶鞘黑斑病的病原鉴定

 2011年7月,在湖南省花垣县水稻上发现一种新的病害,症状表现为叶鞘上出现长椭圆形黑斑,病健交界模糊。分离到的4隔孢弯孢霉(HNHY001)经离体和活体人工接种均可产生黑斑;另一种黑孢霉菌株(HNHY002)不引致叶鞘黑斑。从湖南省栽培水稻150份种子样本中共分离到弯孢霉菌株27个,其中4个菌株具有4隔孢子。这4个菌株中1个菌株不产生子座,其余3个均产生分枝子座。经人工接种除不产生子座的外,其余3个菌株均能产生典型的叶鞘黑斑。HNHY001的rDNA-ITS序列(GenBank登录号JQ360963)经BLAST搜索,与之最接近的几个序列为膝曲旋孢腔菌(Cochliobolus geniculatus)及其有丝分裂产孢种—4隔孢弯孢霉。鉴于单独以及与其它4隔孢弯孢霉菌株进行对峙培养均未产生有性阶段,建议根据此菌无性阶段特征即分生孢子较直、4横隔、子座分枝等特征,鉴定为膝曲旋孢腔菌有丝分裂产孢种之一的假弯孢(C.fallax)。水稻叶鞘黑斑病系国内外首次报道。     

樱桃黑斑病菌对氟唑菌酰羟胺的敏感性

采用菌丝生长速率法测定了樱桃黑斑病菌交链格孢Alternaria alternata群体(n=103)对新型琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)氟唑菌酰羟胺的敏感性，评价了该药剂对A. alternata菌株孢子萌发的抑制活性及其对樱桃黑斑病的保护和治疗作用。结果表明：氟唑菌酰羟胺对103株A. alternata菌株群体的EC₅₀值在0.027～1.175μg/m L之间，平均EC₅₀值为(0.236±0.101)μg/m L，敏感性频率分布呈现单峰曲线，该平均EC₅₀值可作为樱桃A. alternata菌株对氟唑菌酰羟胺的敏感性基线；进一步分析发现，琥珀酸脱氢酶中的铁硫蛋白(SDHB)和两个嵌膜蛋白(SDHC和SDHD)亚基未发现与敏感性差异有关的氨基酸突变。氟唑菌酰羟胺对樱桃A. alternata的孢子萌发也有较强的抑制活性，并且对樱桃黑斑病的保护作用防治效果强于治疗作用防治效果。这些结果可为氟唑菌酰羟胺在樱桃黑斑病及其他病害管理上的推广和科学用药提供依据。     

杏采后病害病原拮抗菌的分离筛选及鉴定

针对杏采后主要病害病原菌细交链孢(Alternaria tenuis Nees)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.ex Fr.)进行拮抗菌的分离筛选及鉴定,分别采用组织分离法、表面分离法和土壤稀释分离法从杏果实、叶片及根围土壤中进行了分离并采用离体和活体筛选,对拮抗效果好的菌株JK-14和JK-11进行形态学、生理生化及分子生物学鉴定.共分离到14株对这两种病原菌都具有抑制效果的菌株,占分离总数的13.5％,离体筛选结果表明:JK-14和JK-11能明显抑制病原菌的菌丝生长,对细交链孢和灰葡萄孢的抑制效果R分别为0.74和0.68,0.74和0.73.活体筛选结果表明,JK-14和JK-11对杏采后黑斑病和灰霉病的防治效果显著,处理果实的发病率和病斑直径明显小于对照.经鉴定,JK-14和JK-11分属芽胞杆菌属(Bacillus)和类芽胞杆菌属(Paenibacillus).     

采前喷施洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia contaminans对草莓采后腐烂和品质的影响

为明确采前喷施洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia contaminans B-1对草莓采后贮藏期的腐烂和品质的影响,采用洋葱伯克霍尔德菌菌悬液喷施草莓植株,检测草莓采后腐烂率及硬度、色泽、可滴定酸、抗坏血酸及失重率等指标,并统计草莓表面菌落生长情况。结果表明,采前喷施浓度为1×10~(10)CFU/m L的洋葱伯克霍尔德菌B-1菌悬液,可显著降低草莓采后腐烂的发生,而且喷施3次贮藏效果优于喷施1次。在16℃下贮藏7 d,喷施3次处理在接种灰葡萄孢菌和自然条件下的抑制率分别达到67.33%和58.45%。采前喷施洋葱伯克霍尔德菌菌悬液可有效提升草莓品质,延缓果实硬度、可溶性固形物、可滴定酸,降低Vc含量,一定程度上可保持果实亮度。洋葱伯克霍尔德菌可在果实表面定殖,且抑制果实表面病原菌的生长。菌悬液喷施3次,16℃贮藏7 d后,果实表面拮抗菌数量达到贮藏前的4.79×10~4倍,同时,病原菌在果实表面的菌落数也大大减少。洋葱伯克霍尔德菌可引起灰葡萄孢菌菌丝畸形,内含物外渗。此外,洋葱伯克霍尔德菌对草莓植株白粉病有抑制作用,并促进植株生长,株高、单株鲜重和单株叶片分别比对照增加19.39%、28.13%和36.04%。研究表明该菌株在草莓生产和贮藏领域具有较大潜力。     

引起乙烯褪绿蜜橘果实腐烂的主要致病真菌分离及鉴定

为明确贮藏过程中乙烯褪绿蜜橘果实腐烂的主要致病真菌,以重庆市北碚产区无核蜜橘为研究材料,利用乙烯利对其果实进行褪绿处理,观察贮藏期间褪绿蜜橘果实的发病症状,确定病害种类,统计发病率;并从发病果实中分离主要致病真菌,采用形态学特征观察和ITS序列分子生物学分析对其进行鉴定。结果表明,乙烯褪绿加剧贮藏蜜橘果实病害的发生。从发病果实中共分离出5株主要致病真菌菌株,分别编号为A、B、C、D、E;结合形态学特征和5株致病真菌的ITS序列分析结果,A、B菌株均被鉴定为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides,但这2株菌株具有不同的菌落形态及致病特性;C菌株被鉴定为焦腐病菌Lasiodiplodia theobromae;D菌株被鉴定为交链格孢菌Alternaria alternata;E菌株被鉴定为棘孢曲霉Aspergillus aculeatus。A、B菌株引起的果实腐烂占乙烯褪绿蜜橘总腐烂果实的81.96%,是引起贮藏过程中乙烯褪绿蜜橘果实腐烂的主要致病真菌,其次为C菌株,D、E菌株为次要致病真菌。     

梨黑斑病菌抗药性检测及其对啶酰菌胺的敏感性基线

黑斑病是梨的主要病害之一,近年来不少地区反映多菌灵等传统常用杀菌剂对其防治效果已出现下降。作者从浙江、江苏和安徽3省分离了252株梨黑斑病菌Alternaria kikuchiana,采用菌丝生长速率法检测了其抗药性发生情况。结果发现:所检测的黑斑病菌群体(n=252)对苯并咪唑类杀菌剂多菌灵的抗性频率为57.1%,且全部为高水平抗性(HR);对二甲酰亚胺类杀菌剂异菌脲的抗性频率为46.8%,全部为低水平抗性(LR);对甾醇脱甲基抑制剂类杀菌剂苯醚甲环唑的抗性为低水平(LR)及中等水平(MR),抗性频率均为28.6%;表明梨黑斑病菌对常用杀菌剂已产生较为严重的抗性。供试252株梨黑斑病菌对琥珀酸脱氢酶抑制剂啶酰菌胺的EC50值分布在0.12~3.85μg/m L之间,平均EC50值为(1.21±0.12)μg/m L,且其分布呈近似正态的单峰曲线。研究表明,啶酰菌胺可作为潜在的梨黑斑病防治替代药剂,其平均EC50值(1.21±0.12)μg/m L可作为梨黑斑病菌对啶酰菌胺的敏感性基线。     

6种梨果实对轮纹病的抗性差异及4种杀菌剂对轮纹病菌的抑菌作用

由葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea引起的梨轮纹病是梨生产中重要的真菌性病害,主要造成树势早衰和果实腐烂,严重影响梨的产量和品质。本研究选取市售的6个品种的梨果实,用分离自梨枝干的轮纹病菌进行了离体果实接种,测定不同品种果实对梨轮纹病的抗性差异。接种后6 d,按照病斑直径从大到小的顺序,品种排序依次为‘丰水梨’>‘南果梨’>‘库尔勒香梨’>‘皇冠梨’>‘雪花梨’>‘砀山酥梨’,随病斑减小抗性依次增强。测定了4种杀菌剂对梨轮纹病菌菌丝生长的抑制作用,结果表明,咯菌腈、氟啶胺和咪鲜胺对梨轮纹病菌的菌丝生长有很强的抑制作用,EC 50分别为0.010 3、0.022 4μg/mL和0.034 3μg/mL;代森锰锌的EC 50为3.860 7μg/mL,也有较好的抑菌效果。本试验结果为了解不同梨品种对轮纹病的抗性及杀菌剂的选用提供了依据,具有一定的指导意义。     

病菌侵染对番茄果实乙烯生成,ACC合成酶和脂氧合酶活性的影响

 本文以红熟期的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)果实为材料,主要研究病菌侵染与果实中乙烯生成,ACC合成酶和脂氧合酶(LOX)的关系,以及不同乙烯处理对感病果实ACC合成酶和脂氧合酶(LOX)活性的影响。结果表明:用葡萄孢菌(Botrytis cinerea)接种采后番茄果实在25℃下存放7d后,感病果实的乙烯释放量显著增加,ACC合成酶和脂氧合酶(LOX)活性也明显提高。在贮藏环境中增加乙烯吸收剂可明显地延缓葡萄孢菌的发病,而且ACC合成酶和LOX酶的活性也相对较低。由此证明病菌侵染与果实乙烯释放量,以及与ACC合成酶和LOX酶之间存在明显的正相关     

麦冬主要病害病原菌巢式多重PCR检测方法的建立

为准确快速地诊断浙江省慈溪市麦冬常见真菌病害——炭疽病和黑斑病,基于巢式多重PCR技术,针对核糖体内转录间隔区(ITS)序列分别设计特异性引物,并优化巢式多重PCR反应条件,建立可同时快速准确检测炭疽病病原菌山麦冬炭疽菌Colletotrichum liriopes和黑斑病病原菌互隔交链孢菌Alternaria alternata的方法。结果表明,建立的巢式多重PCR检测体系特异性好,同时检测2种病原菌的灵敏度高达100 pg DNA/μL,对10个田间病样进行检测,有5个病样检测到2种病原菌,3个病样检测到其中1种病原菌,2个样品未检测到目标病原菌,验证了该体系的可行性与准确性。表明所建立的巢氏多重PCR技术可用于快速准确检测麦冬2种主要病害的病原菌。     

链霉菌XG40的鉴定及其对琯溪蜜柚黑斑病的防效

为筛选出对琯溪蜜柚黑斑病菌有拮抗效果的生防菌株,本研究采用平板对峙法和牛津杯法分离筛选植物根际土壤放线菌,共分离纯化得到12株能够拮抗蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana的放线菌菌株,其中菌株XG40对蜜柚黑斑病菌的拮抗能力最强,抑菌带宽度为16.3 mm。根据形态特征、生理生化特征以及16S rDNA、recA、rpoB、gyrB序列分析,将菌株XG40确定为小串链霉菌Streptomyces catenulae。抗菌谱试验结果表明,菌株XG40的发酵液对番茄叶霉病菌、蜜柚炭疽病菌、蜜柚黑点病菌等12种植物病原真菌和2种植物病原细菌也有较好的拮抗作用,抗菌性能广谱高效。菌株XG40对黑斑病菌的抑菌机制表现为受抑制菌丝发生畸变、粗细不均匀、大量断裂,其发酵液能使黑斑病菌孢子内含物消解并产生液泡。防效测定结果表明,菌株XG40发酵液对室内离体果实黑斑病的预防效果和治疗效果分别为83.52%和78.87%;对田间果实黑斑病的预防效果和治疗效果分别为78.91%和71.15%。因此,菌株XG40可作为防治蜜柚黑斑病的生防材料,具有良好的开发价值和应用前景。     

5种链格孢属植物病原真菌对10种杀菌剂的敏感性比较

离体条件下测定并比较了10种杀菌剂对番茄早疫病菌、苹果斑点落叶病菌、梨黑斑病菌、烟草赤星病菌和甘蓝黑斑病菌等5种链格孢属植物病原真菌的抗菌活性。结果表明,不同种的链格孢属病菌对同一药荆的敏感性相近;咪鲜胺、啶菌恶唑、苯醚甲环唑、异菌脲、腐霉利等5种杀菌剂对供试病菌菌丝生长的抑制活性最好,其EC50在0．01～1．28μg／mL之间;百菌清对病菌分生孢子萌发的抑制活性最高,其次是醚菌酯和嘧菌酯。