米尔贝霉素类似物的合成及杀螨杀蚜活性

为寻找高活性的米尔贝霉素衍生物,以伊维菌素为原料,经脱糖、羟基保护、氧化、还原胺化、脱保护等将其转变为13-氨基米尔贝霉素类似物,通过三组分反应设计合成了一系列米尔贝霉素磺酰脒类化合物(7a~7i),并初步测定了其对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus和豆蚜Aphis craccivora的室内活性。结果表明:各衍生物对朱砂叶螨和豆蚜均有较好的触杀活性,其中7f、7h和7i对朱砂叶螨24 h的LC50值分别为1.04×10–2、9.60×10–4和1.44×10–2 mg/L;7i对豆蚜24 h的LC50值为7.81 mg/L。米尔贝霉素13位氨基上磺酰化的结构修饰有助于提高米尔贝霉素类化合物的杀螨、杀蚜活性。     

梅岭霉素检测方法的研究

本文通过对梅岭霉素(Meilingmycin)的高效液相色谱法(HPLC)、紫外检测法(UV)和杀蚕生物活性检测法(BA)的研究,分别建立了梅岭霉素HPLC法、UV法和BA检测方法。通过三种检测法之间的相关性回归分析,三种检测方法相互呈直线关系。12个不同发酵单位的梅岭霉素发酵样品,分别采用HPLC法、UV法和BA法进行梅岭霉素发酵单位检测,对结果的进一步分析表明:UV法与HPLC法相比测定误差6.28%;BA法分别与HPLC法和UV法检测结果相比,其误差分别为10.48%和3.95%。     

AdpAsd对于淀粉酶产色链霉菌1628的形态分化和丰加霉素合成的影响

为阐明AdpA与淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628形态分化和合成丰加霉素（Toyocamycin，TM）的相关性。本研究设计简并引物成功克隆了来源于淀粉酶产色链霉菌1628大小为1263 bp的adpA_sd基因（GenBank登录号：JX847412）。结果发现，AdpA_sd的氨基酸序列与灰色链霉菌Streptomyces griseus的AdpA_g及天然色链霉菌Streptomyces coelicolor的AdpA_c的同源性分别为80.7%和78.9%。将adpA_sd基因置于载体pIB139启动子PermE^*下游，构建了重组质粒pIB139-adpA_sd，将其通过接合转移法分别转入菌株1628-T15（高产TM）和1628-T62（低产TM，孢子合成受阻）中，获得重组菌1628-T15A和1628-T62A。结果表明，与出发菌株1628-T62相比，重组菌1628-T62A产孢能力得到一定程度的恢复；重组菌1628-T15A与出发菌株1628-T15相比，整体形态无明显变化。摇瓶发酵试验表明，重组菌1628-T62A较出发菌株1628-T62的TM合成能力显著提高，最终TM产量提高了近3倍，而重组菌1628-T15A的TM产量比出发菌株1628-T15仅有小幅提升。以上结果证实adpA_sd参与淀粉酶产色链霉菌1628形态分化以及TM合成，为今后深入理解adpA_sd的分子调节机制奠定了基础。     

产纳他霉素生防菌A01和A02与已知产生菌的RAPD比较

为了明确自主分离的天然抗真菌活性产物——纳他霉素产生菌A01和A02与已知纳他霉素产生菌的遗传相似性,采用RAPD技术对这2株菌和3个产纳他霉素的标准菌株进行了比较分析。利用筛选出的7个随机引物对5个菌株的PCR扩增共得到154条清晰稳定的DNA条带,其中同源性条带86条,多态性条带68条,分别占总条带数的55.8%和44.2%,平均每个引物扩增出9.7个多态性条带,得到了丰富的DNA指纹图谱。所得数据经NTSYS pc 2.10e软件聚类分析,表明5个菌株间的遗传距离为0.0991~0.4738,其中A02与其它菌株间的遗传距离均较远。结合前期的分类研究结果,确证了菌株A02为新的纳他霉素产生菌。     

分批发酵和补料分批发酵生产木霉素的研究

为了提高木霉素的发酵产量,以哈茨木霉Trichoderma harzianum Rifai菌株LC2为生产菌,在10L发酵罐中对分批发酵和补料分批发酵工艺进行了研究。结果表明,在分批发酵工艺中,在8%接种量、4L/min通气量和200r/min搅拌转速条件下,发酵72h时木霉素产量达到最大值149.6mg/L。在间歇补料分批发酵工艺中,分6次补料,使培养基中各成分的终浓度与分批发酵相同,木霉素的发酵产量提高到182mg/L,比分批发酵提高21.7%。     

哌珀霉素防治草莓炭疽病的研究

采用菌丝生长速率法,用橘绿木霉Trichoderma citrinoviride TR673在液体发酵过程中产生的一种次级代谢物——哌珀霉素（Peptaibols）,对多种植物病原菌进行了抑菌活性测试。结果显示,哌珀霉素对草莓炭疽病的病原菌胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides有较高的抑菌活性,其EC₅₀和EC₉₀分别为1.480和22.193 mg/L。将含有哌珀霉素的发酵粗提物制成含12%哌珀霉素可湿性粉剂,在上海青浦和金山2个地区,进行防治草莓炭疽病的药效试验。当12%哌珀霉素的施用量≥450 g/hm²时,对草莓炭疽病的防治效果显著高于其他施用量处理和50%多菌灵可湿性粉剂的化学对照处理。在进行“安全性评价”测试时发现,用浓度为900、1800、3600 g/hm²的12%哌珀霉素可湿性粉剂对3个草莓品种进行施药,不仅对生长无影响,也无药害产生。     

丰加霉素对黄瓜立枯丝核菌的拮抗作用

采用菌丝生长速率法和盆栽试验法,研究了淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes胞外代谢产物丰加霉素（toyocamycin）对黄瓜立枯丝核菌Rhizoctonia solani的拮抗作用。结果表明：丰加霉素对立枯丝核菌菌丝生长和菌核形成有明显的抑制作用,抑制菌丝生长的EC50值为1.67mg.L-1,浓度为2.20mg.L-1时能完全抑制菌核形成。盆栽试验结果表明,丰加霉素对黄瓜苗立枯病有明显的保护和治疗作用。喷施19.54mg.L-1丰加霉素14d后,对黄瓜苗立枯病的治疗效果为71.91%,显著高于对照霉灵1000倍液的治疗效果（35.83%）;喷施19.54mg.L-1丰加霉素14d后,预防效果为51.06%,与对照无显著差异。施药后21d和14d的治疗效果和保护效果均相当;同时19.54mg.L-1和9.77mg.L-1的丰加霉素对黄瓜立枯病的作用效果相当。     

淀粉酶产色链霉菌1628中toyF基因的克隆与丰加霉素合成相关性

为考察编码腺苷琥珀酸裂解酶toyF基因对淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes 1628合成丰加霉素的影响,本研究设计简并引物,首次克隆获得了菌株1628的toyF基因,并构建了敲除质粒pKC1132-toyF',通过接合转移转入菌株1628,获得toyF基因缺失株1628-ΔTOYF。结果表明,与原始菌株1628相比,缺失株1628-ΔTOYF中TOYF的酶活和丰加霉素产量分别降低66.7%、87.5%。在缺失株1628-ΔTOYF中回补表达toyF基因构建了重组菌1628-ΔTOYF/toyF。重组菌1628-ΔTOYF/toyF中的TOYF酶活和丰加霉素产量,较缺失株1628-ΔTOYF分别提高了2.7和8.3倍。由此可见,toyF基因是参与菌株1628生物合成丰加霉素的关键酶基因。本文toyF基因的克隆及其功能研究,为克隆完整的丰加霉素生物合成基因簇及其丰加霉素生物合成机制的研究奠定了基础。     

嘧肽霉素高产菌株的选育

以不吸水链霉菌辽宁变种为出发菌株,经紫外线、亚硝酸诱变和紫外线与嘧肽霉素复合诱变,选育出了嘧肽霉素的高产菌株,抑菌圈直径由原来的20.5mm提高到36.4mm。传代培养5代表明,该高产菌株遗传特性稳定。     

拮抗链霉菌R15β-葡萄糖苷酶的纯化及特性研究

 从山东泰安郊区大白菜植株根际土壤中分离筛选获得一株拮抗链霉菌(Streptomyces spp. )R₁₅菌株。采用固体发酵、粗酶液 (NH₄)₂SO₄分级沉淀、DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephadex G75凝胶柱层析等步骤从链霉菌(Streptomyce spp.)R₁₅中分离纯化获得β-葡萄糖苷酶。结果表明, 纯化倍数16.28, 回收率为14.59％, SDS-PAGE电泳测得相对分子量为63.89 kDa。经TLC分析酶解产物, β-葡萄糖苷酶与水杨苷反应生成D-葡萄糖和水杨醇。以水杨苷为底物时, 该酶的Km值为10.644 mmol/L, Vmax为0.525 μmol·L^-1·min^-1。该酶的最适温度为65℃, 70℃以下相对稳定;最适pH为5, pH 3~7之间相对酶活在75％以上。Cu²⁺、Hg²⁺和Fe²⁺对酶有抑制作用, 其中Hg²⁺和Cu²⁺的抑制作用最强, 酶活力完全丧失;而Ca²⁺, Mn²⁺对酶均有激活作用, 相对酶活分别高达137.18%和119.52%。     

外源GA3与ABA对烤烟茎尖内源激素调控及生长的影响

以烤烟基因型8277与农大202为材料,研究外源激素GA3与ABA对茎尖处内源激素GA、ABA、IAA含量以及株高、节间距伸长的影响.结果表明,外施一定浓度的GA3(100 mg/L)能使烟株茎尖内源激素GA与IAA含量提高,显著地促进烟草株高与节间距的增长;喷施一定浓度的ABA(20 mg/L)在一定程度上抑制了烟株的生长,其作用时间较短,只是在激素ABA使用前期有一定的效果,但是ABA使烟株在地上部干物质积累得到提高.     

稻瘟病菌MoCOS1基因调控MoCMR1基因表达的研究

 以往研究证明MoCOS1可能是一个新型的转录因子,其突变体不产生分生孢子,黑色素合成明显减少。经过RNA-Seq分析,发现受MoCOS1调控的基因达到442个,其中MoCMR1的表达水平受到MoCOS1的下调。本研究中通过实时定量PCR进一步证实MoCOS1基因突变导致MoCMR1基因表达水平下降。基因MoCMR1突变后,黑色素产量略有减少,但分生孢子形态及产量和MoCOS1的表达量没有发生变化。     

增效浏阳霉素防治叶螨的效果和对智利植绥螨影响的研究

在实验室内用5％增效浏阳霉素乳油1000倍液防治截形叶螨,24小时后的死亡率为95.5％。对三氯杀螨醇有较强抗性的二斑叶螨和朱砂叶螨,48小时后的死亡率也达90％左右。浏阳霉素对3种叶螨均无杀卵作用,但施药5～6天后,对初孵幼螨仍能杀死90％以上。低温能降低浏阳霉素的药效。在温室中施药一周后。对二斑叶螨的雌成螨无残效,但幼螨和前若螨的死亡率可达97.4％。以磷酸兰苯酯作增效剂的浏阳霉素比亚磷酸三苯酯作增效剂的药效好。在同一剂量下,对二斑叶螨的死亡率分别为98.2％和53.4％。5％浏阳霉素的1000倍液对智利植绥螨成螨的生存率、在叶上的定居率及着卵量均无影响。在温室栽培月季上喷药1次防治二斑叶螨,36天后防治效果仍保持在99％,而用三氯杀螨醇和敌敌畏防治,施药一周后需再次防治。     

膜下滴灌水分调控对番茄产量影响和经济效益评价的研究

通过膜下滴灌条件下不同灌水定额对番茄生长及产量的研究,分析了充分灌水和不同水分胁迫下土壤水分动态变化规律,进而讨论了在不同水分处理和不同灌水方式下番茄的营养生长、产量、水分利用效率以及经济效益的差异。结果表明:(1)膜下滴灌不同水分处理的土壤各层水分变幅不同,重度胁迫的变幅最大,各次灌水均比充分灌溉大4%~5%;(2)水分对番茄株高的影响成正效应,对茎粗的影响不明显,充分灌溉株高、茎粗分别比重度胁迫分别大44.7%和18.5%,各胁迫处理在灌水后表现出不同的补偿生长效应;(3)滴灌充分供水处理条件下的水分利用效率、产量、经济效益为别为26.64 kg·m-3、75 349 kg·hm-2、49 747元·hm-2,均比沟灌高37.1%、3.8%、3.7%。     

纳米TiO2 光催化降解毒死蜱的影响因素研究

以高压汞灯为光源,采用高效液相色谱法研究了纳米TiO2光催化降解毒死蜱的影响因素。结果表明:纳米TiO2的最佳质量浓度为50～100 mg/L;毒死蜱初始质量浓度影响其降解效果,相对较低的质量浓度(5～20 mg/L)下初始浓度与降解率成正相关,相对较高质量浓度(20～80 mg/L)下初始浓度与降解率成负相关;初始质量浓度为10 mg/L时,毒死蜱的降解符合一级反应动力学方程;不同初始pH值的反应溶液经光催化反应后均表现为酸性,碱性条件有利于降解反应的进行。     

营养对生防菌株BH1芽孢产量的影响研究

 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) BH₁是本实验室筛选出来的用于防治大豆根腐病的优良菌株,田间小区防治效果平均达到56.1%^[1]。用该菌制成的固体菌剂防治三七根腐病也得到较好的防治效果(未发表资料)。     

外源Ca2＋和H2O2对NaCl 胁迫下枸杞离体叶片叶绿体中活性氧代谢的影响研究

以枸杞离体叶片为材料,研究NaCl胁迫下外源Ca2+和H2O2对枸杞离体叶片叶绿体中O2·产生速率、丙二醛(MDA)含量及抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响.结果表明:在NaCl胁迫下O2·产生速率呈上升趋势,丙二醛含量增大,保护酶APX、CAT、POD活性较对照升高.在NaCl胁迫下,加入外源Ca2+和H2O2时丙二醛(MDA)含量和O2·产生速率较单纯NaCl胁迫下降低;保护酶APX、CAT、POD活性较单纯NaCl胁迫下升高.表明外源Ca2+和H2O2在一定程度上可以缓解NaCl胁迫对植物体造成的伤害.