不同方法对牛舍气载魏氏梭菌型别的研究

分别采用ELISA、多重PCR方法对从一个犊牛舍分离到的魏氏梭菌进行型别研究,结果显示:ELISA检测结果为88%的菌种属于A型,3.4%为C型,8.6%是D型;而多重PCR结果均为A型。     

家兔魏氏梭菌病的防制

家兔魏氏梭菌病是由A型魏氏梭菌引起家兔的一种急性下痢性传染病。病兔以消瘦,眼球下陷,急性血痢或水样腹泻,急性死亡为主要特征,死亡率高达70%以上。该病在养兔场和农村散养户中时有发生,严重威胁着养兔业的发展。近年来,笔者在主持并参加重庆市《优质肉兔生产综合技术推广》和《璧山县百万只商品肉兔基地县》项目建设中,与国家疫情测报站璧山分站的同事一道,对农村散养户规模化养兔场的病兔进行临床诊断、死兔尸体解剖和实验室细菌检查,确诊为家兔魏氏梭菌病,随即采取病、健兔隔离饲养,兔舍严格消毒和免疫接种等综合防制措施,收到了满意…     

一株腹泻兔魏氏梭菌的分离鉴定及诊断研究

从山东青岛某兔场病死兔中分离到一株致病菌,经厌氧培养、菌落形态学观察、培养特性、生化反应、小白鼠毒力试验、分子生物学试验,结果表明,该病原菌为A型魏氏梭菌,对小白鼠具有较强的致病力。研究表明,利用多重PCR方法诊断兔魏氏梭菌病,具有很高的特异性和敏感性,可作为一种快速、简便的鉴定方法。     

ELISA对动物舍气载魏氏梭菌型别的研究

采用ELISA方法对从一个犊牛舍空气中分离到的魏氏梭菌进行型别的鉴定。结果显示：88％的菌种属于A型，3.4％为C型，8.6％是D型，B型未能确认。     

一起羊A型魏氏梭菌病的诊治

2000年夏，盐池县部分乡镇发生以在放牧中，突然倒地死亡或晚上没有任何症状而次日晨死于羊圈为特征的疾病，经诊断为羊A型魏氏梭菌病。现将诊断和防治情况报告如下。     

腹泻兔魏氏梭菌的分离鉴定及诊断研究

对山东省泰安等地的4起兔的腹泻疫情进行临床诊断，根据初步诊断结果进行了病原的分离培养，可疑菌经多重PCR鉴定为A型魏氏梭菌.结合病理组织学变化、动物实验结果，证实A型魏氏梭菌为引起上述4起兔的腹泻疫情的病原。     

谈谈兔的A型魏氏梭菌感染

近年来,我国不少养兔地区发生一种以急性下痢为主要特征的兔病,有的养兔场发率病达90%,死亡率常高达100%,而且用各种抗菌药物治疗无效,造成很大的经济损失.我国早在1984年就已确诊兔急性下痢的主要病原是A型魏氏梭茵,并研制出了有效的菌苗和高免血清,但许多基层兽医工作者对此尚无深入的了解和认识.现将本病的流行特点、症状、防治等介绍如下,供参考.     

A型产气荚膜杆菌产毒条件的测定

以肉肝胃酶消化汤作为培养基,对同一A型产气荚膜杆菌分离株在33℃、35℃、37℃、39℃下培养,每个温度分别培养6h,7h,8h,10h,之后提取出每组的毒素,分别测定小白鼠的最小致死量,以确定最佳产毒条件,其中在35℃、7h产毒最强。按不同剂量进行接种,发现接种剂量对产气荚膜梭菌产毒也有较大的影响。     

多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。     

规模羊场环境气载产气荚膜梭菌耐药性及其ERIC-PCR分型

为监测不同规模羊场空气中分离的气载产气荚膜梭菌耐药性变迁及不同菌株间的遗传相似性,从而为临床治疗和控制感染提供依据,收集了2016—2017年来自不同规模羊场分离的气载产气荚膜梭菌30株,采用K-B法进行药敏试验,应用基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR),对菌株进行DNA分型及同源性分析。结果显示:30株气载产气荚膜梭菌在监测的9种药物中,对庆大霉素的耐药性最强(86.7%),其次为青霉素(43.3%),对头孢噻肟耐药率最低(1%),对其他药物耐药率在3.3%~36.7%之间;ERIC-PCR谱型表现为14个基因型(Ⅰ~XIV),其中大部分来源于不同的克隆株,且有2个克隆株的相似度为99.0%。本研究结果表明:规模羊场的气载产气荚膜梭菌多重耐药较严重,分子多样性复杂;气载产气荚膜梭菌来源广泛,不同地区、环境和条件下,同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个基因型;同一个规模羊场的基因型也不同,不同羊场之间也存在相同的基因型。     

山东疫区魏氏梭菌血清型的多重PCR检测

采用多重PCR对从流行过魏氏梭菌病的牧场粪便样品中分离魏氏梭菌的α、β、ε、ι毒素基因进行了检测,确定了血清型。电泳成像显示,仅魏氏梭菌扩增出了特异性条带,其他对照菌株无,说明该方法具有很高的特异性。通过对山东德州、枣庄、泰安、临沂、青岛等地养殖场的418个样品分离的62个菌株的检测,检出率为14．8％,均为A型。研究确认,多重PCR是魏氏梭菌血清型鉴别的一种快速、简便的研究方法,山东省流行型别与国外报道不完全一致。     

山东疫区魏氏梭菌血清型的多重PCR检测

采用多重PCR对从流行过魏氏梭菌病的牧场粪便样品中分离魏氏梭菌的α、β、ε、ι 毒素基因进行了检测,确定了血清型。电泳成像显示,仅魏氏梭菌扩增出了特异性条带,其他对 照菌株无,说明该方法具有很高的特异性。通过对山东德州、枣庄、泰安、临沂、青岛等地养殖场 的418个样品分离的62个菌株的检测,检出率为14．8％,均为A型。研究确认,多重PCR是 魏氏梭菌血清型鉴别的一种快速、简便的研究方法,山东省流行型别与国外报道不完全一致。     

多重聚合酶链反应检测环境中产气荚膜杆菌

产气荚膜杆菌根据产生4种主要毒素（α－β、ε、τ－毒素）可分为5种类型A－E型。在该研究中依据产气荚膜杆菌的5种毒素基因的序列，设计了5对PCR引物，建立了多重PCR方法，该方法可以快速区分5种类型的产气荚膜杆菌。并对68份环境样品（生活污水、生物肥料）进行检测和基因分型，共检出55株产气荚膜杆菌，其中A型产气荚膜杆菌50株，占总数的90％以上，B型、C型、D型只占5％，未检出E型产气荚膜杆菌，所有的分离株没有发现带有肠毒素。结果表明，目前环境中主要存在的菌型为A型菌，其他菌型的产气荚膜杆菌很少，而多数是非致病性产气荚膜杆菌。     

牛舍空气微生物及向环境传播的研究

采用４ 台 Ａ Ｎ Ｄ Ｅ Ｒ Ｓ Ｅ Ｎ微生物空气样品收集器对一个犊牛舍内及环境空气细菌含量进行了测量, 需氧菌总数分别为８５３６ ～４６６９１ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ３ 和２６４９ ～２４７７５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ３ , 厌氧菌浓度计３０１７ ～２４７７５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ３ 和６６１ ～４１２２ Ｃ Ｆ Ｕ／ ｍ３ 。根据 Ｈ Ｅ Ｓ Ｋ Ｅ Ｔ Ｈ （１９７４） 计算公式和 Ｋ Ｌ Ｕ Ｇ （１９６９） 气溶胶颗粒扩散模式, 得出犊牛舍菌源强度, 即向环境排放需氧菌为１１００００ ～１４００００ Ｃ Ｆ Ｕ／ｓ , 厌氧菌在２７０００ ～１７５０００ Ｃ Ｆ Ｕ／ｓ 之间。细菌浓度实际测量值与估算一致, 该公式和扩散模式适合于动物舍菌源强度和舍外环境不同距离空气微生物浓度的估算。距离犊牛舍１００ ｍ 下风处, 需氧菌高达６５０ ～８３９ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ３ , 厌氧菌１６０ ～１０３４ 细菌／ｍ ３ , 各项均超过正常值１０ ～１５ 倍。     

产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体,再辅以氢氧化铝胶制成抗原,免疫小鼠３０ｄ后,用产气荚膜梭菌强毒株培养物上清及培养菌体攻击,结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击,证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。