非洲猪瘟病毒入胞过程相关蛋白及分子机制的研究进展

非洲猪瘟病毒(ASFV)是非洲猪瘟(ASF)的病原,可引发家猪和野猪急性、传染性出血死亡,目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物。ASFV是囊膜病毒,其囊膜蛋白的结构和功能可能是影响病毒入侵和细胞嗜性的重要因素。病毒入胞是病毒感染细胞的第一步,通常是通过细胞表面特定的分子与病毒蛋白相结合吸附于宿主细胞表面,对ASFV入胞过程的病毒蛋白或宿主因子为靶点或可有效抑制ASFV的复制。本文从ASFV入胞过程中起重要作用的囊膜蛋白出发,对ASFV的入胞分子机制进行综述,为ASFV入胞深入研究以及治疗性药物和疫苗的研发提供参考。     

非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72结构与功能的研究进展

非洲猪瘟是家猪和野猪被非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus, ASFV)感染,引起的高度传染性和致死性的动物疫病,是养殖业重点防控的动物疫病,目前无有效的疫苗和治疗药物。ASFV的结构蛋白p72是ASFV的主要衣壳蛋白和重要抗原蛋白,占病毒颗粒总重33%左右,参与ASFV的形态发生、多聚蛋白组装和病毒复制等生理生化过程。p72结构构象稳定,含多种识别表位,是ASFV疫苗和抗病毒药物分子的重要靶蛋白。探究p72在ASFV感染中的作用机理对于病毒致病机制分析、疫苗开发具有重要意义。本文对p72的结构和生理功能方面的研究进行了综述,对p72的应用研究进行分析和展望,以期为阐明ASFV的致病机理和药物及疫苗研发等提供重要参考和帮助。     

非洲猪瘟病毒拮抗宿主抗病毒免疫分子机制研究进展

非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）是核质巨DNA病毒,它引起的非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是一种高度接触性、致死性传染病。ASF的出现给全球养猪业和整个市场经济带来了巨大威胁和挑战。目前尚无针对ASF的有效疫苗,而对ASFV感染机制和免疫逃逸机制认识的不足是制约商品化疫苗研究的主要因素。本文对ASFV的结构和生命周期进行了总结,并从先天性免疫反应、适应性免疫反应和程序性细胞死亡3个方面,对ASFV调控宿主抗病毒反应的分子机制进行了归纳,以期为ASFV致病机制研究和新型疫苗靶点研究提供参考。     

非洲猪瘟疫苗研究进展

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的,以钝缘蜱为传播媒介的一种急性、广泛出血性、高传染性的猪致命疾病,发病率和病死率可高达100%。ASFV是一种大型的DNA病毒,结构复杂,其基因组编码多种结构蛋白和非结构蛋白。非洲猪瘟是全球养猪业的灾难性疾病,目前,尚未开发出安全有效的商品化疫苗和治疗方法。随着生物技术的发展,ASFV疫苗的研究取得了较大的发展。本研究旨在总结ASF灭活疫苗以及基因工程疫苗如减毒活疫苗、病毒载体活疫苗、亚单位疫苗以及DNA疫苗研究的进展,并对ASFV疫苗的研制进行了展望,以期为ASFV疫苗的研究提供参考。     

非洲猪瘟病原学特征及其疫苗的研究进展

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起家猪或野猪感染的一种高度致死性、急性、出血性传染病。2018年8月,中国首次报道非洲猪瘟疫情,对我国养猪业的危害极其严重。本文以ASFV为研究对象,分别从病毒的结构特点、主要病毒蛋白、传播途径、致病机理等方面归纳总结了ASFV的病原学特点,分析讨论了ASF灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗的研究现状,提出目前我国ASF疫苗研发所面临的各种挑战,为疫苗的研发提供新的认识和途径,为科学防控非洲猪瘟提供参考。     

非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^-1～10⁵ copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%～3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PR...     

如何通过饲料生产防控非洲猪瘟病毒

<正>1非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)1.1非洲猪瘟病毒的分类和命名2005年,国际病毒分类委员会(International Committee Taxonomy of Virus, ICTV)第8次报告将ASFV列为非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的成员,而且是唯一成员[1]。1.2非洲猪瘟病毒的形态结构ASFV具有二十面体结构,直径为175～215 nm,是一种胞内复制的末端共价闭合的单分子线装双链     

鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示：建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10⁰~10⁶拷贝·μL^-1模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL^-1;利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。     

非洲猪瘟病毒载体疫苗研究进展

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的一种烈性传染病，严重影响畜牧业发展，可造成巨大经济损失，目前对其仍缺乏有效的治疗手段，其疫苗也处于研究阶段。病毒载体疫苗作为一种经济省时的新型疫苗，免疫效果稳定且安全，可用于递送ASFV免疫原，对于发展ASF免疫防控技术研究有着重要意义。本文对ASFV病毒载体疫苗研究进展进行综述，重点介绍ASFV现有病毒载体疫苗免疫原选择和各病毒载体抗原递呈效果及其免疫原性，为后续ASFV的免疫学研究和病毒载体疫苗研发提供参考。     

非洲猪瘟病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷申病毒、猪脑心肌炎病毒等,结果只有ASFV能够扩增出552 bp的目的片段。敏感性试验表明纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1 000倍以上,最低核酸拷贝数检出量可以达到10个拷贝。采用该方法对黑龙江、吉林和河南3个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测,检测结果显示均为阴性,在以上3个地区均未发现ASFV感染情况。     

基于E184L基因的非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高度接触性传染病。由于ASFV的感染机制极为复杂,基因型多,至今尚无有效疫苗用于防控,防止该病暴发主要依赖于早期快速诊断和控制。为建立一种高效快速、特异的ASFV检测方法,根据ASFV的E184L基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,建立了检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法设计的引物具有高度特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数为0.992,对ASFV核酸最低检测限为1.51拷贝,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等不存在交叉反应。建立的基于ASFV E184L基因实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异地对ASFV核酸进行定量分析,丰富了ASFV的检测方法。     

非洲猪瘟病毒与猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立

为建立一种同时检测非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的方法,本研究根据GenBank中的ASFV 72基因和PR V UL27基因的保守序列分别设计2对特异性引物,通过对双重PCR反应条件的优化,建立快速检测ASFV和PR V的双重PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。特异性试验结果显示,该方法对ASFV与PRV核酸的扩增能获得246 bp和401 bp的特异性目的片段,而对PRRSV、PEDV和CSFV的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对ASFV和PRV核酸最低检测量分别为0.01 pg和0.12 pg。结果表明：建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性较好、快速简便等特点,可用于这两种病毒的同时检测和鉴别诊断。     

非洲猪瘟病毒p72蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析

为研究真核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白p72,本研究从含ASFV p72基因全序列的重组质粒pGEX-6p-p72中扩增出1 941 bp的p72全长基因,将其插入于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFastBac HTa-p72,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-p72。再将其转染至sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。Western blot和夹心法ELISA分析表明ASFV p72基因在昆虫细胞sf9中获得了正确表达,重组p72蛋白可以被特异性抗ASFV血清、p72单克隆抗体识别,表明该蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性。为进一步研究p72蛋白的结构、功能和免疫学特性奠定基础。     

非洲猪瘟在高加索地区流行与传播现状

引起非洲猪瘟的病原是非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)。ASFV是一种有囊膜的DNA病毒,是非洲猪瘟病毒(Asfarviridae)科,非洲猪瘟病毒(Asfivirus)属的成员。病毒具有高度的基因以及抗原变异性。ASFV的自然宿主是生活在非洲的野猪,但不同品系以及日龄的家猪也对ASFV高度易感。病毒也可以感染各种Ornithodoros属的软蜱,且可以在软蜱体内存活5年以上。     

综述非洲猪瘟病毒

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种具有高度传染性的猪病毒病。在家猪中可导致接近100%的高死亡率。ASF是由ASF病毒(ASFVirus,ASFV)引起,ASFV是一种较大的双链DNA病毒,主要在巨噬细胞的细胞质中复制,ASFV是Asfarviridae科Asfivirus属唯一的成员。ASFV的天然宿主包括野猪和Ornithodoros属的节肢动物媒介。ASFV在其储存宿主的感染通常是无症状的,并且发展为持续感染。相反,ASFV对家猪的感染可导致致命的出血热,目前且无有效疫苗。确定ASFV毒力相关基因,以及探索病毒逃避宿主免疫应答的机制,公认为是影响疫苗开发的关键步骤。此外,病毒产物与宿主的相互作用与病毒复制紧密相关,为寻找防治该疾病的潜在靶标提供有效信息。     

非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。     

非洲猪瘟疫苗研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、烈性传染病。ASFV是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,是目前唯一已知的虫媒DNA病毒[1]。ASFV基因组为线性的双链DNA分子,根据病毒株的不同其大小约为170~190kb,包含151~167个开放阅读框,可编码150~200种蛋白[2]。     

过表达非洲猪瘟病毒D1133L蛋白的MA-104细胞系建立及其初步应用

旨在研究非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASFV)编码的D1133L基因功能,本文利用慢病毒表达系统构建了过表达D1133L的MA-104/D1133L细胞系,分析ASFV在MA-104/D1133L细胞系与MA-104细胞中的复制差异。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染MA-104/D1133L细胞后p30和p72基因的转录和蛋白表达水平,同时测定病毒滴度和病毒拷贝数评价ASFV的复制能力。结果表明：ASFV p30和p72基因在MA-104/D1133L细胞系的转录和蛋白表达水平高于野生型细胞系,ASFV在MA-104/D1133L细胞系的病毒增殖能力高于野生型细胞。本研究成功构建了过表达ASFV D1133L基因的MA-104/D1133L细胞系,与野生型细胞相比,D1133L能促进ASFV增殖,MA-104/D1133L细胞系更利于ASFV的复制,本结果为进一步研究ASFV D1133L基因功能积累了生物材料。     

非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型三重PCR检测方法的建立

为建立可同时鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)以及猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)的三重PCR方法,根据GenBank中登录的ASFV、PCV2、PCV3相关基因保守序列,分别设计合成特异性引物,通过对引物浓度、退火温度、循环数等反应条件进行优化,建立了针对3种病原的三重PCR检测方法,并开展了敏感性、特异性及重复性试验。结果显示:引物最佳终浓度为0.375 pmol/μL,最佳退火温度为61℃,最佳循环数为35;该方法对ASFV、PCV2、PCV3的扩增目的条带分别为873、530和217 bp,对猪细小病毒和伪狂犬病病毒的扩增结果均为阴性;对ASFV、PCV2、PCV3重组质粒标准品的检出下限均为1×10⁴ copies/μL;相同条件下重复性试验获得均匀一致的结果。结果表明,本研究建立的三重PCR检测方法具有特异性强,敏感性及重复性好等优点,可用于ASFV、PCV2和PCV3感染的快速鉴别诊断及流行病学调查。     

非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)通用型高通量检测技术,利用高度保守的非结构DNA聚合酶G1211R基因,制备质粒标准品,建立实时荧光LAMP方法,出现典型的S形核酸扩增曲线,扩增产物具有特异的熔解曲线。G1211R基因质粒标准品在1.81×10~5拷贝数/μL~1.81×10~9拷贝数/μL对数值与Ct值之间的线性关系良好。以ASFV E70株病毒核酸为模板,LAMP检测灵敏度达到21pg,优于荧光定量PCR方法。重复性试验LAMP检测批内和批间变异系数均小于5%。LAMP方法检测ASFV特异性良好,与猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及昆虫核酸无交叉反应。以ASFV Arm 07株制备各种临床模拟样品,检出阳性率达到17.31%。检测方法的建立,可为非洲猪瘟防控提供新的技术手段,有利于不同基因型毒株检测和出入境快速筛查。