复方双黄连制剂体外抗菌抗病毒活性研究

【目的】探究复方双黄连制剂体外抗菌抗病毒活性,为复方双黄连的深度开发及家禽、家畜合理选择用药提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘颗粒分别制成浸膏,再将药物浸膏及穿心莲颗粒按照比例制成穿心莲、双黄连（金银花：黄芩：连翘=1：1：2）和复方双黄连（金银花：黄芩：连翘：穿心莲=1：1：2：2）口服液,调节pH为7.0,生药浓度为100%。用大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的12个菌株进行细菌敏感性检测,采用牛津杯结合试管二倍稀释法筛选出敏感菌株,根据药物的最小抑菌浓度（MIC）探讨其体外抗菌活性;采用二倍稀释法稀释药物,培养恒河猴胚肾细胞（MA-104）、鸡胚成纤维细胞（DF-1）,用CCK-8法检测细胞活力,结合细胞病变（CPE）情况确定3种药物安全浓度,将最大药物安全浓度以二倍稀释法稀释3个梯度,用新城疫病毒、轮状病毒对MA-104和DF-1进行药物+病毒互作、先加药后攻毒和先攻毒后加药3种方式的处理,用CCK-8法检测细胞活力,并结合CPE探讨药物的体外抗病毒活性。【结果】复方双黄连的抗菌效果优于穿心莲和双黄连,其对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.20~1.56、0.20~1.56和0.78~1.56 mg/mL。CPE和细胞活力的测定结果表明,双黄连、穿心莲、复方双黄连对DF-1细胞的安全浓度范围分别为0~6.25、0~0.78和0~0.78 mg/mL,对MA-104细胞的安全浓度范围分别为0~3.13、0~0.78和0~0.78 mg/mL。新城疫病毒17E株对DF-1细胞的TCID₅₀为10^-6.19/100 μL;牦牛轮状病毒G6P[1]型SDA2株对MA-104细胞的TCID₅₀为10^-6.24/100 μL。复方双黄连通过直接灭活病毒（药物+病毒互作）、阻断病毒吸附（先加药后攻毒）及干扰病毒复制（先攻毒后加药）途径对新城疫病毒的有效抑制率分别为28.82%、55.92%、42.45%,对轮状病毒的有效抑制率分别为48.84%、26.52%、15.40%。【结论】复方双黄连的抗菌抗病毒作用均强于双黄连和穿心莲,且其对大肠杆菌、沙门氏菌的抗菌效果优于金黄色葡萄球菌,研究结果可为复方双黄连在兽医临床应用和深入开发提供科学依据。     

不同种类浒苔多糖的体外抗菌活性研究

为研究浒苔多糖粗提物、浒苔多糖硒的抑菌活性,本试验以硫酸黏杆菌素、林可霉素、黄芪多糖和酵母细胞壁多糖为对照品,采用药敏试验检测浒苔多糖粗提物、浒苔多糖硒对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果表明:10～100 mg/mL浓度的浒苔多糖粗提物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均未产生抑菌作用,浓度为20、50、100 mg/mL的浒苔多糖硒对金黄色葡萄球菌的抑菌圈和抑菌活性分别为6 mm(-)、8 mm(+)、18 mm(++),对大肠杆菌、沙门氏菌未产生抑菌作用。     

百里香酚和植酸对猪源致病菌的抑菌效果研究

研究旨在探究百里香酚和植酸对猪源大肠杆菌和沙门氏菌的抑制效果，为进一步改善猪舍环境和猪肠道功能研究提供参考。试验采用牛津杯法、二倍稀释法和平板涂布法，分别测定百里香酚和植酸对两种猪源致病菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的影响。结果表明：猪源大肠杆菌和沙门氏菌对50 mg/mL百里香酚表现为高度敏感，对17.5%植酸表现为极度敏感。百里香酚对猪源大肠杆菌MIC和MBC分别为1.56 mg/mL和3.12 mg/mL，对猪源沙门氏菌MIC和MBC均为1.56 mg/mL；植酸对猪源沙门氏菌的抑制效果强于猪源大肠杆菌，对猪源大肠杆菌MIC和MBC均为4.37%，对猪源沙门氏菌MIC和MBC均为2.18%。说明百里香酚和植酸对猪源大肠杆菌和沙门氏菌具有较好的抑菌效果，在抑菌活性物质筛选中具备较好的应用前景。     

苗药对3种常见致病菌体外抑菌效果研究

为研究板蓝根、五倍子、黄芪等20味苗药及其组方对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的体外抑菌效果，本试验通过水煎法、超声水提法、超声醇取法提取苗药及其组方的有效成分，采用二倍稀释法分别测定提取物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果显示，苗药不同提取方法对其抑菌效果影响不同，单味药效果：超声醇提法 > 超声水提法 > 水煎法。五倍子和仙鹤草超声醇提物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及大肠杆菌的MIC分别为0.18、0.71和1.43 mg/mL（五倍子）及1.56、3.13和3.13 mg/mL（仙鹤草）；南五味子、乌梅、刺梨、金银花、绵马贯众、杜仲的MIC值高于五倍子和仙鹤草，低于其他12种药，这6种单味苗药超声醇提物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及大肠杆菌的MIC分别为3.69~50.00、3.13~50.00及3.31~66.25 mg/mL。组方药效果结果显示，超声水提法 > 超声醇提法 > 水煎法。组方5超声水提物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及大肠杆菌的MIC最低，分别为0.34、2.75和2.75 mg/mL；组方1超声水提物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及大肠杆菌的MIC比组方2、3、4低，分别为2.88、5.75和5.75 mg/mL。结果表明，五倍子、仙鹤草及组方5对3种常见致病菌抑菌效果较强，南五味子、乌梅、刺梨、金银花、绵马贯众、杜仲和组方1有一定的抑菌作用，其他苗药的抑菌效果相对较弱。     

六羟基黄酮的抑菌及抗氧化性研究

为研究六羟基黄酮对金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌、大肠埃希氏菌及沙门氏菌的抑菌效果及其抗氧化性。本试验采用牛津杯法和微量肉汤稀释法,探讨六羟基黄酮对四种常见有害菌的抑菌能力|以维生素C（VC）为对照,应用水杨酸法和DPPH法,测定六羟基黄酮对羟基自由基（·OH）和DPPH的清除率,判断其抗氧化性能。结果表明：（1）六羟基黄酮对金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌、大肠埃希氏菌及沙门氏菌均具有较强的抑菌活性,浓度为100 mg/mL时抑菌效果最好|（2）六羟基黄酮对奇异变形杆菌的抑菌圈直径为23.30 mm,最低抑菌浓度为0.125 mg/mL|对大肠埃希氏菌抑菌圈直径为19.80 mm,最小抑菌浓度为0.625 mg/mL|对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为16.64 mm,最小抑菌浓度为0.25 mg/mL|对沙门氏菌抑菌圈直径为14.01 mm|最低抑菌浓度为2.5 mg/mL|（3）六羟基黄酮对·OH最高清除率为86.67%|对DPPH的最高清除率为96.69%。试验结果表明,六羟基黄酮对四种有害菌均有较强的抑制作用,且具有较好的抗氧化性,在饲料领域具有广阔的应用前景。 [关键词] 六羟基黄酮|奇异变形杆菌|大肠埃希氏菌|金黄色葡萄球菌|沙门氏菌|抑菌|抗氧化性     

不同植物精油对畜禽呼吸道致病菌的影响

试验旨在通过对17种具有良好抑菌效果植物精油的体外抑菌试验，筛选出对引起畜禽细菌性呼吸道感染常见致病菌（大肠杆菌、沙门氏菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌）有显著疗效的单一植物精油品种，再通过体外抑菌正交试验筛选出最佳的植物精油复配方案，最后通过人工攻毒建立动物感染模型，筛选出复配精油组合的最佳治疗剂量，为植物精油防治家禽细菌性呼吸道疾病奠定理论基础。结果表明：在17种植物精油中，抑菌效果最好的单一植物精油是肉桂醛和香芹酚，对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为0.391 mg/mL，对乙型溶血性链球菌的最小抑菌浓度均为0.781 mg/mL。抑菌效果最佳的植物精油组合为2∶1的肉桂醛∶牛至油和2∶1的肉桂醛∶百里香酚，2∶1的肉桂醛∶牛至油对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为0.195 mg/mL，对大肠杆菌、乙型溶血性链球菌的最小抑菌浓度均为0.391 mg/mL;2∶1的肉桂醛∶百里香酚对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为0.195 mg/mL，对乙型溶血性链球菌的最小抑菌浓度为0.391 mg/mL。在2∶1的肉桂醛∶百里香酚复合植物...     

不同蜜粉源植物蜂王浆抗菌作用的初步研究

采用抑菌圈实验方法测定不同蜜粉源植物蜂王浆对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑菌作用。试验用蜂王浆分别是产浆型意蜂和产蜜型意蜂所产的油菜蜂王浆和荆条蜂王浆;受试菌株包括革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性细菌(沙门氏菌和大肠杆菌)。研究结果显示:油菜蜂王浆对革兰氏阳性菌有明显的抗菌作用,且产浆型意蜂所产的油菜蜂王浆对受试细菌的抑菌效果优于产蜜型意蜂品系所产油菜蜂王浆,两种意大利蜂所产的油菜蜂王浆对金黄色葡萄球菌的抗菌作用优于枯草芽孢杆菌;油菜蜂王浆对革兰氏阴性菌的抑菌作用也较强,两种蜂王浆对沙门氏菌的抑菌效果优于大肠杆菌;产浆型意蜂所产的荆条蜂王浆对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌效果均高于产蜜型意蜂所产的荆条蜂王浆,然而,二者的抑菌效果弱于油菜蜂王浆。研究表明,不同蜜粉源植物的蜂王浆抗菌效果不同,油菜蜂王浆对受试革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抗菌效果均比荆条蜂王浆强,产浆型意蜂所产的蜂王浆对受试菌的抗菌效果优于产蜜型意蜂所产的蜂王浆。     

牛膝多糖体外抑菌效果的研究

试验旨在研究牛膝多糖(ABPS)体外抑菌的效果。试验将牛膝多糖溶液分为1.000、0.500、0.250、0.125及0 g/mL 5组,探究其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径的影响。结果表明,牛膝多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果与其剂量成正比,最低抑菌浓度为31.250 mg/mL,牛膝多糖在体外对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌剂量以1.000 g/mL剂量组效果最佳(P0.05)。由此可得,一定剂量的牛膝多糖在体外有抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的效果。     

地锦草总黄酮的体外抑菌试验

采用醇提法从地锦草中提取其主要有效成分黄酮类化合物,通过滤纸片法对3种浓度(0.4、0.8、1.6mg/ml)的地锦草黄酮提取液进行抑菌实验。结果表明,地锦草黄酮提取液对巴氏杆菌、沙门氏菌的体外抑菌作用较强,1.6mg/ml的黄酮提取液对巴氏杆菌、沙门氏菌的抑菌直径分别达到(22.0±1.0)mm、(26.0±2.0)mm,随着黄酮浓度的增加,其抑菌作用也增强。地锦草黄酮对巴氏杆菌、沙门氏菌的MIC分别为0.625mg/ml、1.25mg/ml,地锦草黄酮提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌也有一定的抑菌作用。     

二氢杨梅素和土霉素体外抑菌作用的比较试验

二氢杨梅素(dihydromyricetin，DMY)——3，5，7，3’，4’，5’-六羟基2，3双氢黄酮，为二氢黄酮醇类化合物。熊大胜等(2000)和熊皓平(2002)体外抑菌试验表明，DMY对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、青霉菌及黑曲霉菌等16种细菌均有一定抑菌作用。其中对大肠杆菌的MIC为0．125％；对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的MIC均为0．0625％。     

4种清热解毒复方中草药体外抑菌及抗PRRSV活性研究

【目的】 探索泻心汤、三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散4种清热解毒复方中草药体外抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的效果, 为临床应用提供参考。【方法】 采用传统水煎法对4种复方中草药进行提取, 通过二倍稀释法测定中药对大肠杆菌标准菌ATCC 259222和金黄色葡萄球菌标准菌ATCC 25923的体外抑菌活性; 在测定复方中草药对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上, 通过实时荧光定量PCR鉴定复方中草药对PRRSV的抑制作用。【结果】 泻心汤对大肠杆菌的体外抑菌活性最好, 其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)均为7.81 mg/mL; 三黄虎杖汤和黄连解毒汤次之, 其MIC和MBC为31.25~125 mg/mL; 清瘟败毒散抑制大肠杆菌效果较差: MIC和MBC均>250 mg/mL, 而金黄色葡萄球菌对泻心汤、黄连解毒汤和三黄虎杖汤非常敏感, 其MIC和MBC为0.24~0.98 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中, 泻心汤、三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散对Marc-145细胞最大安全浓度分别为0.49、0.49、3.90和1.95 mg/mL。4种复方中草药对PRRSV的抑制与直接灭活作用较好, 黄连解毒汤和清瘟败毒散均在0.98 mg/mL时对PRRSV有阻断作用, 泻心汤和三黄虎杖汤在0.24和0.12 mg/mL时对PRRSV有阻断效果。【结论】 4种复方中草药中泻心汤的体外抑菌及抗PRRSV的效果最好, 其次是三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散, 4种清热解毒复方均有一定的抑菌和抗病毒活性, 可以为临床应用提供参考依据。     

牛至油博落回口服液的研制及体外抑菌活性测定

【目的】 研制牛至油博落回口服液, 并测定其体外抑菌活性及其主要成分的联合抑菌效果, 为临床用药提供理论依据。【方法】 通过预试验和Box-Behnken响应面法优化处方; 采用高效液相色谱法测定口服液主要成分含量; 采用滤纸片法测定口服液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌的抑菌圈直径; 采用试管二倍稀释法测定口服液、5%牛至油溶液及1%博落回溶液对4种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC); 采用微量棋盘稀释法对5%牛至油溶液与1%博落回溶液进行体外联合药敏试验。【结果】 牛至油博落回口服液最优配方为: 5%牛至油, 1%博落回提取物, 25%增溶剂聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油, 0.02%抗氧化剂2, 6-二叔丁基对甲酚(BHT), 余量为水。口服液中香芹酚的含量为42.59 mg/mL, 血根碱含量为6.51 mg/mL。口服液对4种菌的抑菌圈直径分别为16.9、16.4、23.7和17.0 mm, MIC分别为3.125、3.125、1.5625和1.5625 μL/mL, MBC分别为12.5、6.25、3.125和3.125 μL/mL; 5%牛至油溶液对4种菌的MIC分别为25、12.5、6.25和100 μL/mL, MBC分别为100、50、25和>200 μL/mL; 1%博落回溶液对4种菌的MIC分别为6.25、12.5、3.125和6.25 μL/mL, MBC分别为50、25、6.25和25 μL/mL。联合药敏试验表明, 二者联合用药对大肠杆菌、沙门氏菌起相加作用, 对金黄色葡萄球菌无作用, 对粪链球菌为协同作用。【结论】 试验制备了牛至油博落回口服溶液剂, 该制剂对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌具有良好抑制作用。     

红茂草中精油成分分析及抑菌活性的研究

为红茂草药物的进一步开发和利用,本试验以甘肃平凉地区野生药用植物红茂草为研究对象,采用水蒸气提取、蒸馏萃取（SDE）提取、超临界CO₂萃取等3种方法,分别提取红茂草中的精油成分;以GC-MS对其精油进行化学成分分析,并将超临界CO₂萃取的红茂草精油采用平板菌落计数法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌进行抑菌活性测定。结果显示,三种提取方法中,水蒸气提取法和蒸馏萃取提取法所得精油为橙黄色,有浑浊,超临界CO₂萃取法所得精油为淡黄色,澄清液体。3种方法所得精油均含有24种共同成分,以超临界CO₂萃取法最优,其提取率为2.1220%,水蒸气提取法最低,提取率为1.7870%;将超临界CO₂萃取的红茂草精油作用于3种供试菌,测定其最小抑菌浓度（MIC）分别为：金黄色葡萄球菌0.2500 g/mL、大肠杆菌0.3000 g/mL,绿脓杆菌0.2600 g/mL,抑菌效果显著。研究结果表明,超临界CO₂萃取是提取红茂草精油的最佳方法,通过超临界CO₂萃取法提取的红茂草精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有良好的抑菌效果。     

内蒙古地区乳房炎奶样与环境中细菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】研究内蒙古地区部分奶牛养殖场乳房炎生鲜乳样本及环境样本致病菌种类和耐药性,为乳房炎的防控提供临床用药指导和参考。【方法】采用平板划线法对内蒙古地区4个规模化养殖场468份(乳房炎生鲜乳样本199份,乳房炎奶牛饲养环境样本269份)样本进行细菌分离培养,采用形态学观察、革兰氏染色镜检以及16S rDNA测序对分离出的细菌进行鉴定,且对引发乳房炎的主要致病菌进行药敏性试验。【结果】高盐甘露醇培养基上呈现出小、白且偏黄色的菌落,经16S rDNA测序比对,与金黄色葡萄球菌高度相似的菌株共56株,分离率为11.97%;在伊红-美蓝培养基上呈现出黑紫色泛有金属光泽的菌落,经16S rDNA测序比对,与大肠杆菌高度相似的菌株共44株,分离率为9.40%。在199份生鲜乳样本中,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的分离率最高,分别为21.11%和17.09%;在269份环境样本中,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的分离率分别为5.20%和3.72%。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌对青霉素、磺胺异噁唑、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药性相对较高,耐药率分别为90.63%、78.13%、75.00%、68.75%;对庆大霉素、环丙沙星、复方新诺明的敏感性较高。大肠杆菌对氨苄西林、头孢噻吩、磺胺异噁唑存在明显耐药性,耐药率分别为100%、94.29%、45.71%;对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素E、美罗培南、阿莫西林/克拉维酸以及利福昔明表现出较高敏感性。【结论】内蒙古地区引发奶牛乳房炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌;金黄色葡萄球菌对青霉素、磺胺异噁唑、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药性相对较高;大肠杆菌对氨苄西林、头孢噻吩、磺胺异噁唑存在明显的耐药性。     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

响应面法优化牛至粉发酵工艺及其抑菌能力研究

【目的】采用复合菌发酵牛至粉,以期提升其营养品质。【方法】以牛至粉、玉米粉和豆粕粉为底物,以抑菌能力作为评价指标,依次利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心复合试验等方法对复合益生菌固态发酵牛至粉的工艺条件进行优化,并测定发酵牛至粉的抑菌能力、pH、乳酸含量、抗氧化能力、蛋白含量和挥发油含量。【结果】发酵时间、发酵基质水分含量和乳酸菌接种量是影响发酵的主效应因素,优化后最佳发酵工艺为：发酵底物组成比例为牛至粉：玉米粉：豆粕粉=4：1：5,枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酵母菌接种量均为5×10⁶ CFU/g,乳酸菌接种量为1.87×10⁷ CFU/g,发酵温度为25℃,发酵时间为130 h,水分含量46.7%。在此条件下,发酵牛至粉组合物对大肠杆菌抑菌率达99.98%。较未发酵牛至粉而言,发酵组合物pH显著降低（P<0.05）,抗氧化能力显著提高（P<0.05）,水溶蛋白和酸溶蛋白均显著提高（P<0.05）,百里香酚和香芹酚的含量显著提高40%以上（P<0.05）。与未发酵牛至粉相比,发酵牛至粉对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和副溶血弧菌的抑菌能力均显著提高（P<0.05）。【结论】响应面法优化牛至粉发酵工艺后,其有效成分百里香酚和香芹酚的含量均显著提高40%以上,且抑菌能力和营养品质均显著提高。     

The Study of Isolation,Identification of S.cerevisiae from Dairy Feed and its Antibacterical Activity in the Fermentation Brothe in vitro

The aim of the study was to isolate and identify S.cerevisiae in the dairy feed and analyze antibacterial activity of S.cerevisiae fermentation brothe in vitro.5 forage samples and 5 feed samples were collected to isolate yeast by YPD solid medium.Biochemical identification and 26S rDNA sequence were used to identify the isolated strains.The antibacterial activity of S.cerevisiae strains was tested by cylinder plate method.A total of 12 yeast belonged to 4 species were isolated and identified, including 3 S.cerevisiae (Y1, Y7 and Y11), 4 Debaryomyces hansenii, 3 Cryptococcus flavescens and 2 Torulaspora debrueckii.The antibacterial activities of the 3 S.cerevisiae fermentation brothe to Staphylococcus aureus, E.coli and Streptococcus agalactiae were different.Y7 and Y11 fermentation brothe showed antibacterial activities to all the tested pathogens, while Y1 inhibit E.coli alone.This study laid the foundations for further research of probiotics containing S.cerevisiae with excellent performance.     

奶牛饲料中酿酒酵母菌的分离鉴定及其发酵液的体外抑菌活性研究

本试验旨在分离鉴定甘肃地区奶牛场饲料中的酿酒酵母菌,进而研究酿酒酵母菌发酵液的体外抑菌活性。通过YPD固体培养基对采集的5份饲草和5份饲料样品中的酵母菌进行分离,分别进行生化鉴定和26SrDNA测序鉴定,进而检测酿酒酵母发酵液的体外抑菌活性。结果表明,从样品中分离出4种共12株酵母菌,分别为3株酿酒酵母菌(Y1、Y7和Y11)、4株汉逊德巴利酵母菌、3株浅黄隐球酵母菌和2株戴尔有孢圆酵母菌;3株酿酒酵母菌的发酵液对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的抑菌活性存在差异,其中酵母菌Y7和Y11的发酵液对3种病原菌均具有抑菌活性,而Y1的发酵液只对大肠杆菌具有抑制作用。本试验为进一步筛选性能优异的酿酒酵母菌用于微生态制剂研发奠定了基础。     

高渗对多重耐药大肠杆菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响

为了探究高渗对多重耐药菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响,试验应用生长曲线和相对适应性测定,对比考察不同盐胁迫条件对多重耐药大肠杆菌QL15和敏感大肠杆菌ATCC 25922的生长差异,采用RT-PCR方法考察2种盐胁迫条件下外排泵与外膜孔道蛋白基因表达差异。结果表明,大肠杆菌QL15为高水平多重耐药菌,其中对大观霉素和恩诺沙星耐药最为严重,可达耐药标准MIC的32倍;独立培养时大肠杆菌QL15对NaCl胁迫的敏感性大于大肠杆菌ATCC 25922,并且在6.0% NaCl胁迫下,大肠杆菌QL15在10 h内生长缓慢,但是在24 h细菌峰值浓度更高;混合培养时大肠杆菌QL15在6.0% NaCl胁迫时具有更高的适应性,在体外培养中更具竞争优势。大肠杆菌QL15共携带5大类、15种耐药相关基因,其中含8种外排泵基因和3种外膜孔道蛋白基因;大肠杆菌ATCC 25922在6.0% NaCl浓度下的5种基因表达量较3.5% NaCl均出现约50%的显著下调（P<0.05）,大肠杆菌QL15在6.0% NaCl浓度下除acrB、ompF基因下调外,其余3种外排泵与外膜孔道蛋白基因的表达量则显著上调（P<0.05）。推测大肠杆菌QL15对盐胁迫具有更高的适应性的原因可能与细胞膜相关蛋白的表达相关。