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本研究根据莱克多巴胺(RAC)的结构特性,采用碳化二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)法将RAC与牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原(RAC-BSA),用合成的免疫抗原免疫小鼠获得了高效价的鼠源多克隆抗体,效价均达1:32 000以上。该研究方法和结果为动物源食品中RAC残留的检测奠定了基础。 相似文献
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合成红景天苷人工抗原,为进一步建立免疫学分析方法提供依据,采用高碘酸钠氧化法分别将红景天苷(Salidroside)、牛血清蛋白(BSA)与卵白蛋白(OVA)人工偶联成免疫抗原(SAL-BSA)和包被抗原(SAL-OVA),并利用紫外光谱法、SDS-PAGE法鉴定。用制备的人工免疫抗原免疫小鼠,用间接酶联免疫法测定抗体效价。结果成功制备了SAL-BSA、SAL-OVA两种抗原,SAL-BSA偶联比可达到7∶1,在免疫后的小鼠血清中检出了抗红景天苷的抗体,效价为1∶4 000。成功合成红景天苷人工抗原,为下一步单克隆抗体的制备及建立相应的免疫学分析方法奠定了基础。 相似文献
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莱克多巴胺单克隆抗体的研制 总被引:4,自引:1,他引:4
莱克多巴胺(Ractopamine)与戊二酸酐、氯甲酸异丁酯反应后,与牛血清白蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术获得2株稳定分泌抗莱克多巴胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水,间接ELISA方法测定腹水抗体效价为1∶3.2×107。该抗体与克仑特罗交叉反应率为0.3%,体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。获得的单克隆抗体可用于肉品中莱克多巴胺残留检测和莱克多巴胺残留检测试剂盒的开发。 相似文献
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【目的】合成并鉴定苦参碱人工抗原,以获取具有特异性和高亲和性的苦参碱多克隆抗体,为建立苦参碱的酶联免疫分析方法奠定基础。【方法】通过对槐果碱不饱和双键进行亲核加成、叠氮化、催化氢化合成苦参碱半抗原13氨基苦参碱(ST),并经MS、NMR法对其结构进行鉴定;采用戊二醛法将半抗原与载体蛋白偶联合成苦参碱的人工抗原(ST-BSA和ST-OVA),经紫外光谱扫描法、SDS-PAGE法、红外光谱扫描法对人工抗原进行鉴定;将制备的苦参碱人工抗原免疫健康新西兰大白兔获得苦参碱的多克隆抗体,通过间接非竞争ELISA方法测定其效价。【结果】成功合成了一种苦参碱半抗原13-氨基苦参碱(ST),与载体蛋白BSA、OVA偶联后得到了免疫原(ST-BSA)和包被原(ST-OVA),免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,效价达到128 000。【结论】成功合成了苦参碱人工抗原,为苦参碱免疫分析方法的研究提供了条件。 相似文献
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兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备 总被引:10,自引:1,他引:10
采用水溶性碳化二亚胺法(EDC),将MTP与牛血清蛋白(BSA)、人血清蛋白(HSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原MTP?BSA、MTP?HSA和包被抗原甲胺磷?鸡卵清蛋白(MTP?OVA),用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫,制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体(polyclonalantibody,PAB),效价分别为1∶15?000和1∶12?000. 相似文献
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【目的】合成巴氯芬(baclofen,BA)人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺(EDC)法将BA分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶256 00,半数抑制浓度(IC50)为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物(γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺)交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。 相似文献
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【目的】合成并鉴定斑蝥素人工抗原,为建立斑蝥素的酶联免疫分析方法提供依据。【方法】对斑蝥素进行化学修饰,引入羟基合成N-羟乙基斑蝥酰亚胺(BY),并经MS、NMR、IR法对其结构进行鉴定。进一步经琥珀酸酐法合成琥珀酸酯(BYS)并纯化,在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联,合成斑蝥素的人工抗原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA、BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),并经MS、IR法对人工抗原进行定性鉴定。免疫原免疫兔子获得抗斑蝥素多克隆抗体并测定其效价。【结果】成功合成了一种斑蝥素半抗原,与载体蛋白BSA、OVA偶联后得到免疫原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA)和包被原(BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,效价分别为8 000和16 000。【结论】初步合成并鉴定了斑蝥素人工抗原,在设计合成斑蝥素的半抗原时不能破坏其关键的环结构。 相似文献