野生猕猴桃DNA的提取及RAPD分析体系的建立

采用3种不同的方法,即经典CTAB法、改良CTAB法和氯化苄法提取野生猕猴桃基因组DNA,效果均较好,其中改良CTAB法提取的DNA质量最高,DNA降解少,杂质含量少。通过对循环次数、DNA模板用量、DNA聚合酶的种类和浓度等因素的研究,建立了野生猕猴桃RAPD分析体系,从PCR扩增程序和反应体系两个方面对野生猕猴桃RAPD分析体系进行了优化,并验证了优化后的体系,扩增谱带清晰、多态性强,稳定性好。     

三叶崖爬藤DNA提取及RAPD引物筛选

采用CTAB法提取三叶崖爬藤基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳进行纯度检测,选择条带清晰的模板进行RAPD试验.设计PCR扩增程序,构建RAPD反应体系,在PCR仪上进行扩增反应,通过琼脂糖凝胶电泳检测筛选出4条具有多态性的RAPD引物.     

菜心DNA质量对RAPD反应的影响

采用改进的CTAB法,探讨了菜心DNA的提取质量及其对RAPD扩增效果的影响,结果表明,CTAB浓度为2%和EDTA浓度为15 mmol/L时提取的DNA质量以及DNA模板量范围在20～30 ng之间的RAPD扩增效果最好.     

女贞不同种质材料基因组 DNA 的提取及 RAPD 引物筛选

[目的]提取女贞不同种质材料的基因组DNA,并筛选RAPD引物。[方法]采用改良CTAB法提取女贞基因组DNA,并以此种方法提取的女贞基因组DNA为模板,对RAPD引物进行PCR扩增,筛选有效引物。[结果]筛选出21个多态性丰富、条带清晰且重复性好的有效引物,经检测所获得的基因组DNA条带清晰,且OD260／DD280在1．8左右。用筛选出的21个有效引物对126份女贞种质材料进行RAPD—PCR扩增,均可获得带型丰富且清晰可辨的DNA指纹图谱。[结论]该方法为快速和准确地应用RAPD方法分析女贞种质材料的遗传多样性提供了依据。     

适于核桃的RAPD-PCR反应体系的建立

采用CTAB法和改进的CTAB法,从叶片中提取核桃基因组DNA,比较其分离效果.结果表明,改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染.并以此为模板进行RAPD反应, 对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合于核桃的RAPD-PCR 反应体系,以进行该树种的分子标记研究.     

烟叶基因组DNA提取方法研究

为探索适宜烟草叶片DNA提取的方法,对提取植物DNA的CTAB法和SDS法进行了优化,主要是在提取液的种类和浓度上做改进.以烟草叶片为材料,采用4种方法从烟草叶片中提取基因组DNA.结果发现,采用1%CTAB法可从烟草叶片中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23 kb,以此方法提取的DNA为模板进行随机引物的PCR扩增,可获得清晰的RAPD条带,该研究初步建立了适合烟草叶片的RAPD技术体系.     

绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

水稻DNA快速提取及RAPD分析体系的优化

以水稻幼苗为材料,比较了3种不同DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的DNA的简便、快速提取方法,并对RAPD反应体系进行了优化。结果表明,改良CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD分析的要求。通过对DNA模板、Mg2+、dNPT、Taq DNA聚合酶浓度等因素的试验,对水稻RAPD分析体系进行了优化。新建的分析体系扩增谱带清晰、多态性强,稳定性好。     

人参基因组DNA的提取及RAPD—PCR反应条件的优化

探讨了人参基因组DNA提取方法及RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,用改良的CTAB方法提取的DNA均达到了RAPD—PCR分析的要求;优化的RAPD—PCR反应条件为：在25μLRAPD—PCR反应体系中,模板DNA20ng,dNTP200μmol／L,MgCl2 1．5mmol／L,10×Buffer2．5μL,引物浓度0．4pmol／L,TaqDNA聚合酶1．0U,其余以ddH20定容至25μL．PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃45S,40℃退火1min,72℃1min,共40个循环;最后在72℃延伸5min．     

DNA-AFLP分析用辣椒基因组DNA提取方法的优化

采用SDS法、CTAB-1法和CTAB-2法提取辣椒(Capsicu mannuum)叶片DNA,通过紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳检测,证明CTAB-2法所提取DNA的质量和纯度较高;以此DNA为模板进行DNA-AFLP分析,特征条带清晰、基本无脱尾,适用于DNA-AFLP等分子生物学研究。     

安徽桑树品种全基因组DNA提取方法研究

旨在获得一种高效、稳定、廉价的DNA提取方法。以安徽桑树品种嫩叶为材料,以CTAB法提取其基因组DNA,并用紫外分光光度计、凝胶电泳、PCR 扩增等方法进行鉴定。研究结果表明：提取的DNAA260/A280比值在1.80~1.90 之间,DNA得率约为0.187~0.275 μg/mg,以提取的DNA为模版,PCR能够获得清晰的目的条带。证明CTAB法提取的DNA质量较好,能满足后续分子生物学操作的需要。     

金花梨基因组DNA提取及其RAPD分析

以金花梨嫩芽为试材 ,通过在磨样时添加不同量的抗氧化剂Vc ,对CTAB法作了一定的改进 ,比较了不同处理的提取效果 ,再分别以成熟叶片、新梢和嫩芽为材料 ,采用改进的CTAB法提取基因组DNA ,进一步比较了不同材料的提取效果 ,并以金花梨及其 18个变异单系的基因组DNA为模板 ,4 0个随机引物进行RAPD分析。结果表明 :以嫩芽为试材 ,在磨样时每克鲜样添加 0 10g的Vc ,能够提取到高质量的基因组DNA ;采用改进的CTAB法 ,用成熟叶片、新梢和嫩芽均能提取到可直接用于RAPD分析的基因组DNA ;大部分引物可以在不同模板上扩增出条带 ,但仅有 5个引物可以同时在金花梨及其 18个变异单系基因组DNA上扩增出条带 ;用RAPD结果对金花梨及其 18个变异单系进行聚类分析     

几种微量提取盐芥DNA方法的比较

[目的]探讨一种提取盐芥高质量DNA的方法。[方法]分别采用简化SDS法、改良CTAB法、CTAB法和改良尿素法提取盐芥DNA,测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并进行电泳和酶切检测,并对其结果进行比较。[结果]改良CTAB法提取的DNA纯度高、质量好,没有糖类、酚类及蛋白质的污染,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切。CTAB法提取的DNA没有蛋白质的污染,但有酚类物质的污染,可作为PCR扩增的模板。SDS法以及尿素法提取的DNA质量较差,不能满足分子生物学研究的要求。[结论]改良CTAB法比其他方法更适合分子生物学分析和研究。     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

乌头DNA的改良CTAB提取和ISSR检测

采用改良的CTAB法与常规CTAB法对23种不同来源的乌头基因组进行提取,通过紫外、电泳、PCR-ISSR等检测方法进行比较.结果表明,改良的CTAB方法得到的DNA浓度和纯度较高,无蛋白质和多糖等杂质影响,并且可以很好地应用于ISSR分子标记分析.     

红掌基因组DNA提取方法的优化

[目的]采用改良的SDS法提取红掌基因组DNA。[方法]以4种不同花色的红掌品种为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取红掌基因组DNA,用紫外分光光度计测定英DNA在A260nm和A280nm下的吸光值,根据A260nm/A280nm的比值检测DNA的纯度和浓度。[结果]用改良SDS方法提取的DNA透明且无杂质,A260nm/A280nm比值在1．6—2．0,DNA纯度较高,可满足红掌分子生物学试验的要求;用CTAB法提取的DNA呈褐色或淡黄色,A260nm/A280nm,比值小于1．6,DNA纯度较低并且浓度低,舍有大量蛋白,此方法不适于提取红掌基因组DNA。[结论J采用改良SDS法可以提取到高质量的红掌基因组DNA,所提取的DNA的纯度和浓度可以满足红掌分子生物学研究的要求。     

RAPD分子标记技术在甜高梁基因组研究中的应用

[目的]应用RAPD技术对甜高粱丝黑穗病基因进行分子标记研究。[方法]以抗病亲本7050B与感病亲本TX622B杂交后的F2代以及抗病甜高粱品种8113和感病甜高粱品种8101为试材,用CrAB法提取DNA,用RAPD分子标记技术对其DNA进行多态性扩增与初步分析,同时对琼脂糖凝胶电泳检测体系进行优化。[结果]CTAB法适宜提取DNA。在对抗病亲本7050B与感病亲本TX622B杂交后的F1代进行RAPD标记时,用60个引物进行筛选,其中27个引物扩增出了多态性谱带;应用20个具有多态性扩增谱带的引物对抗病甜高粱品种8113和感病甜高粱品种8101进行RAID分析时,共有7个引物扩增出了差异谱带,分别为S56、S66、S67、S70、S72、S75、S78。[结论]该研究为甜高粱优良品种的培育提供科学基础。     

光皮桦基因组DNA 提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13