一种快速同步检测水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的方法

 水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒是近年来在水稻上危害日益严重的两种病毒,由于两者同属于呼肠孤病毒科斐济病毒属,在症状、粒体形状、传播介体及寄主等方面非常相似,由此也给诊断及鉴定造成了困难。针对这一问题,通过设计简并引物,并优化体系,建立了一种快速、简便、灵敏、特异的方法,为这两种病毒的检测及鉴别提供了方便。     

南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白的致病性分析

利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)异源病毒载体在本氏烟中分别和共同表达了南方水稻黑条矮缩病毒可能编码的6种非结构蛋白(Pns52、Pns6、Pns71、Pns72、Pns91和Pns92),采用实时荧光定量PCR技术分析了其表达水平。结果表明,与PVX空载体侵染的本氏烟相比,只有Pns92蛋白的表达能够表现出典型的花叶症状,6种蛋白共同表达时的症状与Pns92单独表达呈现的症状相似。推测Pns92可能与病毒的致病性有关。     

湖南省南方水稻黑条矮缩病发生情况及防治对策

介绍了南方水稻黑条矮缩病的发病症状及发生规律,分析了2009年以来南方水稻黑条矮缩病在中国及湖南省的发生情况,介绍了湖南省对该病已采取的防治措施,并提出了一系列综合防治措施,对2012年该病的发生趋势进行了预测,并提出了湖南省对该病的防治策略。     

坂面镇南方水稻黑条矮缩病的发生为害特点及防控措施

介绍了南方水稻黑条矮缩病在坂面镇的发生为害特点及田间发病症状和流行因素,并提出较有效的防控措施。     

南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白的亚细胞定位研究

病毒蛋白的亚细胞定位可以反映病毒的某种功能,是研究病毒功能的重要依据。借助农杆菌的介导,将南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV）可能编码的6种非结构蛋白分别在本氏烟细胞中表达,通过荧光共聚焦显微镜观察所表达的蛋白亚细胞定位情况。 结果表明：Pns52、Pns91定位相似,主要定位于细胞质,在细胞质中形成较大的颗粒状聚集体;Pns6、Pns71、Pns72和Pns92定位相似,分散于整个细胞,主要定位于细胞质中或膜上,均形成丝网状结构;WoLF PSORT对比分析显示它们可能都是膜内在蛋白（Integral membrane protein）,此外,Pns6在细胞质中还可以形成颗粒状的聚集体。     

水稻黑条矮缩病毒基因组片段S10的cDNA克隆及全序列分析

基于RT-PCR策略克隆了水稻黑条矮缩病毒（rice black streaked dwarf virus,RBSDV）浙江分离株基因组S10,并测定了它的全序列。结果表明,水稻黑条矮缩病毒浙江分离物（RBSDV-Zj）基因组片段S10全长1801 nt（EMBL登录号为AJ297433）,仅含有一个大的开放阅读框（open reading frame,ORF）,编码一个63.1 kD的多肽,与日本的水稻黑条矮缩病毒基因组片段S10在核苷酸和氨基酸水平上同源性分别为93.8%和96.2%;与意大利玉米粗缩病毒（maize rough dwarf virus,MRDV）的基因组片段S10在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为87.7%和92.0%,推测它们是同一病毒的不同地理小种。     

三明稻区南方水稻黑条矮缩病发生概况及防控技术探讨

简述了2005年至2012年南方水稻黑条矮缩病在三明稻区的发生情况及发生特点,并根据近年连续田间试验结果表明,用防虫网集中统一育秧切断毒源和加强本田期稻飞虱防治,可以有效减轻该病发生。     

湖南省南方水稻黑条矮缩病发病调查及其原因分析

2010—2011年对湖南省水稻大面积生产中南方水稻黑条矮缩病发生情况进行了调查,发现该病的发生在不同年份、地区及品种间存在明显差异,发病面积和程度均为湘南>湘中>湘北。发病时间以湘南早于湘中、湘北,2010年发病重于2011年。分析其发病差异的主要原因,可能与4—9月由西南暖湿气流引起带毒白背飞虱迁入湖南省的时间迟早、机会多少及是否采取有效防治措施和品种抗病性等有关。     

单季稻不同品种与不同播期南方水稻黑条矮缩病发生情况调查分析

通过单季稻不同品种与播期南方水稻黑条矮缩病发生情况进行调查,结合分析白背飞虱发生量监测与带毒率检测,掌握了不同单季稻品种对南方水稻黑条矮缩病抗（耐）病性差异以及不同播种期对南方水稻黑条矮缩病发生的影响。结果表明,单季稻不同品种抗（耐）病程度存在较大差异,以中浙优1号、中浙优8号、春优618、C两优369品种抗（耐）病性较好,品种问总体抗（耐）病性表现为杂交晚籼好于杂交晚粳;不同播种期是影响南方水稻黑条矮缩发生的主要因素之一,同时还受白背飞虱发生量与带毒率影响,在预测预报过程中应综合分析水稻播种移栽期、白背飞虱发生量与带毒率三者吻合情况,提高防治指导准确性。     

早稻南方水稻黑条矮缩病发病率预测模型的建立与应用

南方水稻黑条矮缩病是近年来在我国南方稻区重发的一种病毒性病害。为了明确生态因子与南方水稻黑条矮缩病发病率的关系,提高预测能力,避免严重损失,笔者利用化州市2007-2015年的生态因子数据与南方水稻黑条矮缩病田间实际发生数据,采用逐步回归和通径分析的方法研究了两者之间的相关性。结果表明,上年10月下旬温雨系数和上年晚稻黑条矮缩病发病率对早稻南方水稻黑条矮缩病发病率影响最大。笔者还建立了生态因子与早稻南方水稻黑条矮缩病发病率回归模型:Y=-2.7590+0.1895 X_1+0.1345 X_2+1.0495 X~3+0.0044 X_4,利用该回归方程对历史资料进行拟合,拟合程度较好,并对2015年进行预报,预报值与实际值相差较小,准确率较高。可见,该模型适宜于化州乃至粤西地区早稻南方水稻黑条矮缩病的预测预报。     

二穗短柄草被确定为水稻黑条矮缩病毒的新寄主

二穗短柄草(Brachypodium distachyon)是一种新兴的模式植物,在病毒-植物的互作研究中具有广阔的应用前景。水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是一种重要的植物病毒,明确该病毒是否能够侵染二穗短柄草,是进行病毒-寄主互作研究的前提。本研究利用传毒介体灰飞虱将RBSDV人工接种于二穗短柄草Bd21,观察RBSDV是否侵染短柄草,以及侵染后的症状发展过程,同时对病毒进行了PCR检测。结果显示,RBSDV可以侵染二穗短柄草;初期症状为节间缩短,随后表现植株矮缩、心叶扭曲、缺刻等症状;PCR检测有明显的目的条带。由此确定二穗短柄草是RBSDV的新寄主,可作为该病毒与寄主互作的研究材料。这为进行RBSDV抗病基因鉴定、基因组学研究以及农作物的抗病育种奠定了基础。     

Detection,Occurrence,and Survey of Rice Stripe and BlackStreaked Dwarf Diseases in Zhejiang Province,China

The major viral diseases that occur on rice plants in Zhejiang Province, eastern China, are stripe and rice black-streaked dwarf diseases. Rice stripe disease is only caused by rice stripe tenuivirus （RSV）, while rice black-streaked dwarf disease can be caused by rice black-streaked dwarf fijivirus （RBSDV） and/or southem rice black-streaked dwarf fijivirus （SRBSDV）. Here we review the characterization of these viruses, methods for their detection, and extensive surveys showing their occurrence and spread in the province.     

水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测

 水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列（EU111804）设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET 32a（+）和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。     

Transmission of Rice Black-Streaked Dwarf Virus from Frozen Infected Leaves to Healthy Rice Plants by Small Brown Planthopper (Laodelphax striatellus)

In order to preserve virus for identifying the resistance of rice varieties against rice black-streaked dwarf disease, a simple and reliable method was developed, through which virus-free small brown planthopper (SBPH) acquired rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) from frozen infected leaves and the virus was transmitted to healthy rice plants. The experimental results showed that SBPH could obtain RBSDV from frozen infected rice leaves and the virus could be transmitted to a susceptible rice variety. For the ability to acquire RBSDV and transmit the virus to healthy plants by SBPH, there was no significant difference between frozen infected leaves and in vitro infected leaves. The novel method could be applied to identification of rice variety resistance to rice black-streaked dwarf disease, facilitating the breeding process for rice black-streaked dwarf disease resistance.     

南方水稻黑条矮缩病抗性的遗传分析及主效QTL的精细定位

【目的】近年来由白背飞虱传播的南方水稻黑条矮缩病给水稻生产造成了巨大损失,开展该病的抗性遗传分析和基因精细定位,将为抗性育种提供材料和理论依据。【方法】分析了抗性材料D4对南方水稻黑条矮缩病的抗性特征,并通过广恢998/D4F2群体分析该病抗性的遗传规律,利用QTL-seq技术联合遗传连锁分析定位主效抗性QTL。【结果】D4对南方水稻黑条矮缩病的抗性表现为抗病毒性而非抗虫性,且受主效基因和微效基因共同控制。QTL-seq和连锁分析将南方水稻黑条矮缩病主效抗性QTL定位于第9染色体上,命名为qSRBSDV9。利用代换作图法进一步将qSRBSDV9定位在102.3kb的区间内,该区间包含21个预测基因,其中9个基因与赤霉素信号传导相关。【结论】揭示了D4对南方水稻黑条矮缩病的抗性特征及遗传规律,精细定位了南方水稻黑条矮缩病主效抗性QTL qSRBSDV9。这为该QTL的图位克隆及育种利用奠定了基础。