三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究

草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的DNA片段,用CTAB试剂盒提取的DNA质量最高,改良SDS法提取的DNA质量较低。将不同方法提取的DNA经过PCR反应特异性检测SVBV后,将与目的片段大小一致的PCR扩增产物经序列测定及分析,证明与SVBV的序列相吻合,证明了方法的可靠性,其质量能够满足PCR特异性检测需要。     

藏茴香总DNA提取方法探究

本试验取藏茴香叶片制成干样、鲜样,采用SDS法、CTAB法、改良SDS法、改良CTAB法、试剂盒法五种提取方法对其总DNA进行提取,比较DNA样品的纯度、得率、完整度等指标,以期获得优质高效的藏茴香总DNA的提取方法。试验结果如下:材料选用藏茴香叶片干样所提取的总DNA效果好。用试剂盒法和改良CTAB法提取的藏茴香总DNA样品质量优良、完整性好、纯度高,明显优于其他方法;使用改良CTAB法和试剂盒法所提取的藏茴香DNA进行PCR检测,获得了明亮清晰的扩增图谱;从成本方面考察,试剂盒法远高于其他方法。因此,改良CTAB法提取藏茴香干样总DNA效果最佳。     

崂山奶山羊瘤胃微生物总DNA提取方法的优化

对瘤胃微生物总DNA提取方法进行了改进,将冻融法和CATB法相结合,可以将细菌、真菌和古细菌在内的各种微生物的细胞壁充分的粉碎,且DNA提取效果稳定,可以获得足够大的DNA片段(23 kb),可以满足后续试验的需要.     

崂山奶山羊瘤胃微生物总DNA的提取方法优化

本试验对对瘤胃微生物总DNA提取方法进行了改进,将冻融法和CATB法相结合,可以将细菌、真菌和古细菌在内的各种微生物的细胞壁充分的粉碎,且DNA提取效果稳定,可以获得足够大的DNA片段（23kb）,可以满足后续试验的需要     

适于转基因苹果种子和果肉总DNA提取的方法

为探求适宜的转基因苹果种子和果肉DNA提取方法,以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）嘎拉（Gala）苹果果实为试材,采用改良CTAB法、SDS法与高盐低pH值SDS法对苹果种子和果肉进行基因组总DNA提取。结果表明,在提取种子基因组DNA时,供试3种提取方法均可获得纯度较高的DNA,但不同方法所获得的DNA产量差异较大,以改良CTAB法获得的DNA产量最高,为0.221 mg?g-1鲜重,SDS法和高盐低pH值SDS法所获得DNA产量偏低,分别为0.053 mg?g-1鲜重和0.034 mg?g-1鲜重;在提取果肉基因组DNA时,SDS法在纯度和产量上效果最好,DNA的A260/ A280 值为1.808,产量为0.012 mg?g-1鲜重,而其它两种方法提取质量较差。考虑到质量和得率的综合因素,认为改良CTAB法适宜提取转基因苹果种子DNA,SDS法适宜提取转基因苹果果肉DNA。     

香蕉不同组织的基因组DNA制备方法的比较

本研究以香蕉的叶、假茎、根、果皮、果肉为材料,比较了CTAB常规法及其3种改良法、SDS法、SDS结合蛋白酶裂解法、改良尿素法、氯化苄法等方法提取基因组DNA的效果,以期筛选出通用性高、操作简便的基因组DNA制备方法。结果表明:氯化苄法不仅能够有效地从叶片、假茎、根系和果肉中提取到高质量的基因组DNA,也适合从果皮中提取少量DNA,其中提取液中添加600μL氯化苄的浓度处理效果最好;尽管CTAB常规法及其改良法能有效地从叶片中提取DNA,但对其他组织部位的提取效果较氯化苄法差;SDS法、SDS结合蛋白酶裂解法和改良尿素法的提取叶片DNA的效果较CTAB法差,也不能从根系和果皮、果肉中提取到高质量DNA。此外,PCR扩增试验结果表明,氯化苄法能满足后续的基于ITS的分子标记鉴定研究。     

石油污染土壤总DNA的提取

寻找一种可获得高浓度、大片段的石油污染土壤微生物总DNA的提取方法。分别采用SDS的细胞裂解法、溶菌酶和SDS裂解法、实验室改进法、试剂盒法提取石油污染土壤总DNA。研究结果表明4种方法都可获得石油污染土壤微生物总DNA,但每种方法在提取量和纯度上有一定差异;实验室改进法提取的DNA产率是最高的,试剂盒法提取DNA纯度最高。实验室改进法获得的微生物总DNA,稀释20倍可直接用于PCR扩增。土壤样品经过一定的预处理后提取的DNA片段大小在23100 bp,实验室改进法提取土壤微生物总DNA产率、纯度较好,不经过纯化可直接用于PCR扩增及其他分子生物学实验的操作。     

一种快速提取小麦基因组DNA的改良CTAB方法

旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。以小麦幼叶为材料,用改良CTAB法、改良SDS法、沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。改良CTAB法提取小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。     

太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测

比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试。结果表明：常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280比值在1.8左右。以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果。因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求。     

黄山市几种资源植物基因组总DNA提取方法的初探

为了能在分子生物学基础上进行资源保护和提高综合开发利用价值,对黄山市几种资源植物进行了初步的分子生物学研究。通过3种不同方法（普通CTAB法、改良CTAB法和SDS法）对黄山贡菊、艾草、玉叶金花、柳叶蜡梅和秤锤树这5种黄山市资源植物,进行叶片基因组总DNA提取方法的研究,并用紫外分光光度法和1%琼脂糖凝胶电泳法分别检测所得产物DNA的纯度和完整性。结果表明：对于黄山贡菊、艾草和玉叶金花基因组总DNA的提取采用改良CTAB法所得提取效果最佳;对于柳叶蜡梅以普通CTAB法提取效果最佳;对于秤锤树以SDS法提取效果最佳。琼脂糖凝胶电泳结果显示完整度较好,能够用于进一步的分子生物学研究。     

余甘子SRAP反应体系的优化

本文报道通过正交设计和单因素优化实验建立余甘子SRAP-PCR优化体系。实验表明PCR反应各因素（模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物）对扩增结果均有不同的影响。采用50 ng模板DNA,2.0 mmol?L-1 Mg2+, 0.4 mmol?L-1 dNTPs, 0.3 μmol?L-1 引物的20 μL反应体系可扩增出最清晰丰富的多样性条带。使用该优化体系检测12份余甘子种质资源样品,结果稳定可信,适用于分子遗传研究。     

纳米磁珠联合PCR检测甘蔗杆状病毒方法的建立和初步应用

本研究通过对DNA提取裂解液的成分和用量以及裂解时间等因素进行系统优化,建立了一种高通量的磁珠法提取甘蔗总DNA,再进行PCR检测甘蔗杆状病毒(SCBV)的方法。采用核酸自动提取仪,应用纳米磁珠提取甘蔗总DNA,经PCR检测甘蔗杆状病毒,并与以试剂盒提取DNA为模板的PCR检测结果进行比较。结果显示,经优化的裂解液成分为EDTA·Na20.08 mol/L、NaCl 0.8 mol/L、SDS 2%和Tris-HCl0.10 mol/L,裂解时间为20 min,可用于纳米磁珠提取甘蔗总DNA进行SCBV检测。所建立的方法通量高、成本低、耗时短,可用于SCBV的批量检测。     

碱解法快速提取菠菜基因组DNA方法的优化

为了优化碱解法提取菠菜基因组DNA的方法,并为大批量育种材料的分子标记筛选奠定基础,本试验以菠菜幼嫩叶片为试材,以PCR扩增效果为主要依据,研究NaOH浓度、水浴温度与方法、吐温20浓度对菠菜DNA提取质量的影响。结果表明：以0.4 mol/L NaOH为提取液研磨后沸水浴1 min提取的菠菜DNA的PCR扩增效果明显好于常温处理。样品不经研磨、可直接用PCR扩增仪99℃、4 min代替沸水浴加温并省去离心步骤,此时以0.4 mol/L NaOH+0.5%吐温20为提取液时PCR扩增效果最佳。提取DNA的A₂₆₀/A₂₃₀比值较高时PCR扩增效果较好,因此A₂₆₀/A₂₃₀比值是评价提取DNA质量的最优指标。本试验优化了碱解法简便快速提取菠菜DNA的技术规程,达到了理想的PCR扩增效果。     

改良冷冻法测定梨果实的石细胞含量

为了提高梨石细胞的提取效率,以黄金梨和茌梨的果实为试材,在冷冻提取方法的基础上,通过设置不同的冷冻时间和冻融次数来研究其对梨石细胞提取效果的影响。结果表明：所有处理中以处理（1）(3 h+3 h+3 h)反复冻融处理的提取效果最好,石细胞提取的量随着冻融次数的增加而增加,说明增加冻融次数有利于梨果实石细胞的提取;在冻融次数相同时,每次冷冻时间满足3 h后,再增加冷冻时间对提取效果影响不大。冷冻法提取石细胞效果与冻融次数密切相关,在满足基本的冷冻时间后,增加冻融次数可以显著提高梨石细胞的提取率。     

普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法研究

本研究的目的是建立提取普洱茶发酵样品中微生物DNA的方法。首先比较了3种发酵样品中菌体收集方法,其次改进了omega小量植物DNA提取试剂盒的提取方法,以DNA的纯度、提取率和细菌16S rDNA、真菌?-微管蛋白基因PCR扩增为指标,评价提取DNA质量。实验发现茶样（5 g）加Tween-NaCl缓冲液（50 mL）,静置30 min,超声波振荡10 min,离心（10 min,12000 r/min）的菌体收集方法和在omega小量植物DNA提取试剂盒中引入液氮研磨、溶菌酶和破壁酶联合裂解细胞的方法提取的DNA纯度好,可以分别扩增出细菌16SrDNA和真菌?-微管蛋白基因。建立了普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法,为开展普洱茶固态发酵过程微生物多样性的分子生物学研究奠定了基础。     

利用分子标记快速鉴定甜菜育性的研究

试验旨在优化分子标记鉴定甜菜育性的整个鉴定过程,为分子标记鉴定甜菜育性真正应用于实际育种工作打下基础。以随机抽取的10份糖甜菜和5份甜菜多胚种质资源嫩叶为试材,采用两种甜菜DNA提取方法、双重PCR以及两种电泳方式对甜菜育性进行鉴定。结果表明,裂解液法在提取甜菜DNA上更加高效便捷,1 h就可以提取100份甜菜DNA,效率远远高于CTAB法;采用双重PCR的方式进行甜菜育性鉴定完全可行,使甜菜育性鉴定时间减半。对两种电泳方式进行对比发现,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出的结果不能满足实验要求,而1%琼脂糖凝胶电泳跑出的结果完全满足实验要求。通过对用分子标记鉴定甜菜育性的整个鉴定体系进行优化,得出用裂解液法进行甜菜DNA的提取、双重PCR进行甜菜育性的鉴定、电泳方式选用1%琼脂糖凝胶电泳可以达到快速鉴定甜菜育性的目的。     

海南龙血树基因组DNA提取方法比较

摘 要：为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNA A260/A280在1.7-1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。     

SSR分子标记在棉花遗传育种中的应用及进展

SSR（Simple Sequence Repeat）是在PCR（Polymerase Chain Reaction）基础上发展起来的一种新的分子标记技术,具有高度多态、共显性、保守性、且仅需少量的DNA、操作简便、重复性好、稳定可靠等优点,在动物、植物、微生物等研究领域中得到了广泛应用。简述了SSR分子标记技术在棉花上的DNA提取方法、引物开发、PCR反应体系、扩增后检测方法优化上的进展及其在棉花遗传育种中的遗传图谱的构建、遗传多样性的鉴定、功能基因和QTLs的定位、标记辅助育种和品种、杂种、突变体、亲缘关系的鉴定及种子纯度的检测方面的应用情况,从而为相关工作者在这方面的研究提供参考。