春兰根状茎的增殖与分化条件优化

以春兰种子无菌萌发的根状茎为材料,采用正交设计方法,研究了春兰根状茎增殖与分化的适宜条件.结果表明,根状茎增殖适宜的培养基为1/2MS+3 mg·L-1BA+蔗糖3%+香蕉5%+琼脂0.8%,根状茎分化适宜的培养基为1/2MS+3.0mg·L-1BA+1.0mg·L-1NAA+0.8mg·L-1IBA+蔗糖3%+琼脂0.8%.使用100 g.L-1香蕉作为附加物,春兰根状茎在培养30d后重量可达初重的2.1倍.根状茎在固体培养过程中不发生褐变现象,添加活性炭能促使根状茎产生根毛类似物.     

春兰根状茎的增殖与分化的影响因素研究

以春兰品种绿云的根状茎为外植体,研究了多个因素对根状茎的增殖与分化的影响.结果表明,B5与1/2MS基本培养基的转换培养较单一培养基利于根状茎的增殖;细胞分裂秦BA、KT对根状茎的增殖有明显的促进作用,但KT浓度超过1.0 mg·L-1后根状茎易玻璃化;在0～3.0 mg·L-1范围内生长素浓度越高越利于伸长型根状茎的形成,IBA促进根状茎的生长较NAA效果好.1/2MS+BA 1.0 mg·L-1+IBA 1.0 mg·L-1培养基最有利于根状茎的分化,芽分化率达到37.3%.3种培养基附加物中,芋艿糊优于椰子汁和香蕉泥.根状茎分割以掰开方式较好,增殖团块带有3～5条根状茎较适宜.     

春兰根状茎增殖分化的组织细胞学研究

为了对春兰珍稀品种的组培繁育提供科学参考,对春兰组培产生的类原球茎、根状茎石蜡切片进行了观察,春兰类原球茎顶端分生组织不断分裂并延伸成为根状茎;根状茎节间的表皮或皮层细胞不断分裂形成侧生分生组织区,直接发育成芽或继续延伸成根状茎的侧枝.形成具多个分生组织区的丛生根状茎后再分化出芽.     

春兰根状茎增殖及其分化影响因子

以春兰无菌根状茎为材料,研究不同激素配比及接种极向对其增殖和分化的影响.结果表明:添加2 mg/LKT有利于春兰根状茎增殖;横向平放接种处理的春兰根状茎分化数量显著高于倒接和正接处理;添加ZT能显著促进春兰根状茎分化.     

春兰与大花蕙兰杂交后代根状茎增殖与分化条件

为了筛选适合根状茎增殖分化的条件,以春兰Cymbidium goeringii与大花蕙兰Cymbidium hybridum杂交后代的根状茎为材料进行培养,比较了不同基本培养基、植物生长调节物质和有机添加物等对根状茎增殖与分化的影响。结果表明:1/2MS(Murashige and Skoog)培养基对杂交根状茎增殖与分化效果最适宜;2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和激动素(KT)对杂交组合春兰与大花蕙兰‘梦境’‘Wanderland’的根状茎分化作用不显著,1/2MS培养基添加1.0mg·L-16-苄基腺嘌呤(6-BA)+1.0 mg·L-1萘乙酸(NAA)对春兰与大花蕙兰‘梦境’的杂交后代增殖分化效果最佳;使用有机添加物对根状茎增殖有显著影响,其中以椰汁增殖效果最好,其次为香蕉泥、土豆汁;添加100 g·L-1香蕉泥+50 mL·L-1椰汁最利于根状茎的增殖与分化。图1表4参16     

中透艺春兰根状茎的组培快繁及艺向培养研究

以中透艺春兰根状茎为材料,研究培养基和外源激素对根状茎增殖、分化的影响,同时探讨光照及不同根状茎材料对艺向稳定的影响。结果表明:3/4MS培养最适宜根状茎的增殖;TDZ 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的组合对根状茎的增殖效果较好;6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L的组合最有利于根状茎的分化,芽分化率达到97.7%。2 000 lx的光照强度最有利于中透艺春兰的根状茎的出苗率和出艺率;选取整条为淡黄色的根状茎作为材料,能较好地保证叶艺的走向。     

春兰杂交种子无菌萌发及根状茎增殖的研究

研究了杂交塑果的成熟度、植物激素、有机添加物及培养方式对春兰杂交种子无菌萌发和根状茎增殖的影响。结果表明：成熟度为五个月的春兰杂交蒴果萌发率最高,杂交种子高萌发率和中等萌发率的比例也比较高。1/2MS＋0.3 mg/L NAA＋20g/L蔗糖＋7.0g/L琼脂和1/2MS＋1.5 g/L蛋白胨＋20g/L蔗糖＋7.0g/L琼脂的培养基配方培养根状茎的增殖系数较高,根状茎生长优良;薄层液体培养有利于根状茎的增殖。     

不同有机添加物及柠檬酸钠组合对春兰根状茎增殖的影响

通过添加不同浓度猕猴桃汁、香蕉汁、梨汁、苹果汁、白萝卜汁、胡萝卜汁、土豆汁、红薯汁等8种有机物及柠檬酸钠组合,研究其对春兰根状茎增殖及抗褐化效果的影响。结果表明,单独添加猕猴桃汁100.0 g·L-1、梨汁100.0 g·L-1或柠檬酸钠1.0 g·L-1比对照能显著促进根状茎增殖,增殖中生长倍数分别为3.9、2.4和2.2,梨汁和猕猴桃汁处理中,根状茎中细胞分裂相关基因CgCki、CgCKS、CgClins、CgE2F和CgRb表达量显著提高。1/2MS+NAA5.0 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1+猕猴桃汁100.0 g·L-1+柠檬酸钠1.0 g·L-1组合对春兰根状茎增殖及抗褐化效果最好,根状茎增殖的生长倍数为4.2,细胞分裂相关基因CgCDKS、CgCki、CgCKS、CgClins、CgE2F和CgRb表达显著提高。因此,在春兰组培快繁过程中猕猴桃汁+柠檬酸钠组合可以有效地促进根状茎增殖,并防止根状茎褐化。     

植物生长调节物质及有机添加物对春兰根状茎增殖与分化的影响

以春兰‘宋梅’为试验材料,研究了植物生长调节物质及有机添加物对春兰根状茎的增殖与分化的影响,结果表明适合春兰根状茎增殖的培养基为:1/2MS+3~5 mg/L NAA+0.1 mg/L BA+10%椰子汁+30 g/L蔗糖+6.8 g/L琼脂;最适合根状茎芽分化的培养基为:1/2MS+0.5 mg/L NAA+3 mg/L BA+10%椰子汁+30 g/L蔗糖+6.8 g/L琼脂。     

春兰根状茎离体培养的研究

以春兰种子诱导出来的根状茎为材料,探讨培养方式、培养条件等因素对春兰组培快繁的影响.结果表明:春兰根状茎在液体振荡培养与固体培养的交替培养中不仅增殖率高,而且生长迅速.光照是根状茎分化成苗的必要条件;28℃时,根状茎的分化率可达62.5％,高温下(30℃)根状茎分化受抑制;另外,春兰不定芽基部保留适当长度的根状茎有利于其生根.     

春兰授粉和种胚无菌萌发研究

为提高春兰品种间授粉坐果率、缩短种子无菌萌发时间、提高萌发率,对春兰品种自交和杂交的适宜授粉时间、种子无菌萌发进行研究。结果显示最佳授粉时间为花后2~5 天。品种自交坐果率仅33.3%,品种杂交的坐果率达100%。蒴果的纵横径生长呈单“S”形曲线。成熟种子萌发时间为281~296天;授粉后130 天的未成熟种子萌发时间仅需96~99 天,萌发数量最多,为116 ~132 个/瓶。本研究使春兰从授粉到种子萌发的时间缩短8个月,且萌发率增加,节约了成本,提高了效率。     

春兰菌根真菌的筛选

地生兰组织培养存在移栽无菌苗成活率低、生长缓慢、开花迟缓、花小甚至不开花等问题,这些与缺少共生的菌根真菌有关。用分离自云南保山、大理等地野生春兰菌根中的内生真菌19个菌株接种春兰组培幼苗,经4.5个月的共生培养,兰苗叶色正常,根系生长良好。测定植物生长量,从长势有明显提高的接菌苗进行重分离及菌根的显微结构观察,确定春兰菌根的形成,并筛选出春兰的有效共生菌根真菌为CLB111,CLB113和MLX102。通过接种处理后春兰苗的鲜重增长率分别为70.6%、70.2%、68.6%,而不接菌的对照仅为45.6%,与对照差异达0.01极显著水平。结果表明这3个菌株均为春兰的菌根真菌的优良菌株.     

春兰ISSR-PCR反应体系的优化

以春兰为材料,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素如模板DNA、dNTPs、MgCl2、primer、TaqDNA聚合酶的浓度及引物退火温度、反应循环数进行了探讨,确立了适合春兰ISSR-PCR分析的最佳反应体系和PCR扩增参数:在15μL反应体系中含1×buffer,0.2 mmol/L dNTPs,2.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L引物,0.3 UTaqDNA聚合酶,20 ng模板DNA。PCR扩增程序:94℃预变性2.5 min;94℃变性45 s,48~58℃退火(退火温度随引物不同而定)45 s,72℃延伸2 min,35个循环;72℃延伸5 min。     

春兰菌根的显微结构观察

应用石蜡切片法,借助于光学显微镜观察春兰无菌组培苗、接菌组培苗的根及野生状态下的新生营养根、老根,结果表明:接菌组培苗的根及野生状态下的新生营养根、老根,其皮层组织细胞内有大量的菌丝结等兰科菌根的典型结构,而无菌组培苗的根则无菌丝、菌丝结等结构.菌根真菌自外皮层薄壁通道细胞侵入根的皮层细胞,春兰菌根是典型的地生兰菌根.     

春兰SRAP-PCR反应体系的建立和优化

摘 要：【研究目的】为获得春兰的 SRAP 标记图谱,对春兰SRAP-PCR 反应体系进行了初步研究【方法】通过正交试验设计,从Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物、模板5种因素4个水平对春兰SRAP-PCR反应体系进行优化。【结果】所建立的体系为：25μl反应体系中含有2.5mmol/L的Mg2+ ,2mmol/L的dNTP, 0.5U的Taq酶,1.2 μmol/L的引物,90 ng的模板。【结论】为春兰指纹图谱的构建奠定基础。     

春兰与4种菌根真菌共生产生的植物激素

为探明菌根真菌促进春兰生长发育的作用机制,从与4种菌根真菌(Rhizoctonia-like的CLB111,CLB113,MLX102及KW214菌株)的共生春兰菌根中提取植物激素,用高效液相色谱进行梯度洗脱,并对其进行分析鉴定。结果表明:4种共生体均能不同程度地产生赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(Z)和玉米素核苷(ZR)5种植物激素,其中CLB111共生体产生的GA3达306.875ng/mL;而MLX102共生体产生的IAA和ZR是4种共生体中最多的,分别达537.567ng/mL和69.32ng/mL;ABA和Z在KW214共生体中产生的量最多。菌根真菌与春兰共生后促进激素释放,从而促进春兰生长。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

春兰种子无菌播种萌发过程及其影响因素

 研究了不同化学试剂预处理和暗培养时间对春兰Cymbidium goeringii种子初始萌发时间及萌发率的影响,并从形态学角度观察了种子萌发的过程。无菌条件下,分别采用氢氧化钠和次氯酸钠对春兰种子进行预处理,将不同处理及未处理种子置于相同培养基上不同暗培养时间0,30,60,90,120,150,180 d下进行培养,暗培养后转入光照下继续培养。结果表明：暗培养以后进行光照培养是春兰种子萌发启动所必须的,全光照或全黑暗条件下种子均未萌发,暗培养30 d的种子在光照条件下培养约35 d时开始萌发,初始萌发所需时间最短;化学试剂预处理对种子萌发率的影响显著,氢氧化钠和次氯酸钠处理组种子萌发率均高于对照组。化学试剂预处理与暗培养时间对种子的萌发率存在交互作用,暗培养150 d的氢氧化钠预处理种子萌发率最高为79.2%。春兰种子萌发过程包括以下几个状态：未萌发状态种子、胚吸水膨胀、原球茎、根状茎。图3表1参16