畜禽DNA分子标记及其研究进展（下）

３畜禽ＤＮＡ标记的研究进展畜禽ＤＮＡ标记的研究包括各畜种新的ＤＮＡ标记的发现，ＤＮＡ标记技术的改进及自动化技术的发展，畜禽ＤＮＡ标记按用途可分为：用于ＱＴＬ标记和ＭＡＳ标记、亲缘关系分析的标记等。继Ｊｅｆｒｅｙｓ之后，Ｂｕｒｋｅ和Ｂｒｕｆｏｒｄ（１９...     

家禽DNA指纹标记及其在遗传育种上应用的研究进展

家禽ＤＮＡ指纹标记及其在遗传育种上应用的研究进展顾志良，周勤宣（江苏省家禽科学研究所２２５００３）１９８０年，Ｗｙｍａｎ和Ｗｈｉｔｅ，发现人类基因组ＤＮＡ中含有高变区（ＨＶＲｓ），并证明了这些高变区是一系列的可变数目申状重复序列（ＶＮＴＲｓ），即小卫...     

HRP直接标记属特异性基因探针检测沙门氏菌的研究

以活化辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰ—ＰＢＱ—ＰＥＩ＋—ＮＨ３＋）直接标记沙门氏菌属特异性ＤＮＡ探针ｐＬＳ２和ｐＬＳ３，探针与靶ＤＮＡ杂交后催化发光底物，经增强型化学发光反应（ＥＣＬ），用普通Ｘ光胶片自显影（ＣＰＤ）检测沙门氏菌。经狭缝杂交（Ｓｌｏｔｂｌｏｔ），该法标记探针均可检测到０．１ｐｇ的纯质粒ＤＮＡ及１０３个未经培养的鼠伤寒沙门氏菌。Ｄｏｔ—ｂｌｏｔ杂交结果证明，ＨＲＰ标记的探针仅与沙门氏菌属细菌杂交，而与试验的其他肠道非沙门氏菌不杂交。本研究表明，ＨＲＰ直接标记基因探针化学发光自显影法检测沙门氏菌，安全、快速、简便，且有高度的敏感性和特异性，是一种有较大应用前景的非放射性标记探针杂交检测方法。     

应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

鸡的DNA指纹应用研究

鸡的ＤＮＡ指纹应用研究王金玉，龚允陈，陈国宏（扬州大学农学院２２５００１）陈宽维（江苏省家禽研究所２２５００３）鸡的ＤＮＡ指纹技术研究始于１９８８年，Ｒｙｓｋｏｖ等人证明用Ｍ１３噬菌体作为探针与ＢｓｐＲⅠ酶切的鸡ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，可产生...     

家禽基因组连锁图现状

１连锁群长度世界家禽基因组合作项目由８个国家的１３个实验室共同在进行。已有几个家禽基因组连锁图发表（Ｂｕｍｓｔｅａｄ等 ,１９９２ ;Ｌｅｖｉｎ等 ,１９９４ ;Ｃｒｏｏｉｊｍａｎｓ等 ,１９９６ ;Ｃｈｅｎｇ等 ,１９９７ ;Ｓｍｉｔｈ等 ,１９９７ ;Ｇｒｏｅｎｅｎ等 ,１９９８）。家禽第１个基因连锁图由Ｈｕｔｔ在１９３６年出版。第１个用ＤＮＡ标记构建成家禽基因组遗传连锁图由Ｂｕｍｓｔｅａｄ等（１９９２）发表 ,图上有１００个位点 ,其中以ＲＦＬＰ为主。Ｃｒｏｏｉｊｍａｎｓ等（１９９６）发表有１２８个微卫星标记的家禽…     

微卫星DNA及其在家禽遗传育种中的应用

微卫星ＤＮＡ（ＭｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅＤＮＡ）是８０年代末期发展起来的一种新型分子标记,与其它ＤＮＡ分子标记相比较,具有许多优点。     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中,ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点,在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ ＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验,分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株,进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察,进一步表明,我们培育的优     

2型犬腺病毒DNA不同酶酶切片段E3区定位研究

从２型犬腺病毒的ＭＤＣＫ细胞培养物中提取线状双链病毒基因组ＤＮＡ，利用限制性内切酶ＰｓｔＩ、ＢｇｌⅠ和ＨｉｎｄⅢ分别进行酶切，在１％琼脂糖凝胶上电泳，随后Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹到尼龙膜上，利用Ｄｉｇｏｘｉｎ标记的２型犬腺病毒Ｅ３区ＰＣＲ产物与膜上ＤＮＡ杂交，结果发现，Ｅ３区探针分别与病毒ＤＮＡ的ＰｓｔＩＢ片段、ＢｇｌＩＡｌ片段和ＨｉｎｄⅢＡ２、Ｂ２片段呈现阳性杂交反应，该结果为Ｅ３区的克隆及犬腺病毒     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中,ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点,在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＤｏｔＢｌｏｔＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验,分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株,进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察,进一步表明,我们培育的优良鸭肝炎弱毒株Ａ６６确系Ｉ型ＤＨＶ。     

在进口鸡中首次检出鸡大肝脾病抗体

在进口鸡中首次检出鸡大肝脾病抗体单松华邬宝官杜希豪胡永强刘学忠（上海动植物检疫局２０００３２）鸡大肝脾病（ＢｉｇＬｉｖｅｒａｎｄＳｐｌｅｅｎｄｉｓｅａｓｅ，ＢＬＳ）是由病毒引起的鸡的一种新的传染病。１９８０年在澳大利亚首先发现。感染鸡在性成熟后主要表...     

微卫星DNA标记及其在鸡的基因图谱构建中的应用

微卫星ＤＮＡ标记及其在鸡的基因图谱构建中的应用顾志良（江苏省家禽科学研究所扬州２２５００３）王志跃张军（扬州大学农学院扬州２２５００９）１９５３年，Ｗａｔｓｏｎ和Ｃｒｉｃｋ提出的ＤＮＡ分子结构的双螺旋模型圆满地解释了ＤＮＡ就是基因的有机化学实体，宣布...     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

抗鸡IgG,抗鸭IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究

抗鸡ＩｇＧ、抗鸭ＩｇＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究张春红伍惠卿杜伟贤黄忠（广东省农业科学院兽医研究所，广州５１０６４０）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ首次利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术生产单克隆抗体（ＭｃＡｂ）以来，为所有需要制备和使用抗...     

人肿瘤坏死因子α逆转录病毒表达载体的构建

应用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒构建了含人肿瘤坏死因子－α　ｃＤＮＡ的过渡性载体ｐＢＴ１和ｐＢＴ２。用限制性内切酶ＢａｍＨＩ与ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＴ１ＤＮＡ，分离出了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ基因片段，并在其平末端加入了ＢａｍＨＩ接头。进而将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＴＮＦ－αｃＤＮＡ克隆到了逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１５′－端长末端重复序列（ＬＴＲ）下游的ＢａｍＨＩ切点上，构建了重组质粒ｐＺＩＰＴＮＦ。该重组质粒经琼脂糖凝胶电泳，限制性内切酶消化和核酸杂交鉴定分析，证明ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１中插入了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ，并且方向正确。本研究为应用重组逆转录病毒介导ＴＮＦ－α基因转移与治疗奠定了基础。     

基因库（GenBank）的电子邮件检索

１９８２年，美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）、美国国立医学图书馆（ＮＬＭ）和美国国家生物技术信息中心（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ， ＮＣＢＩ）等机构开始建立ＤＮＡ序列数据库（ＧｅｎＢａｎｋ）。这些数据每１８个月增加一倍，由于大量的表达序列标识（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅｑｕｅｎｃｅ　Ｔａｇｓ，ＥＳＴ）收入基因库，现在基因库中的数据每１５个月就增加一倍，并且有加速的趋势。 基因库中的基因数据出自３００００多种不同的物种，现在每月有６００多种新的物种加…     

用digoxigenin标记DNA探针检测鸡贫血病病毒感染

用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记鸡贫血病病毒（ＣＡＶ）衣壳蛋白基因的重组质粒克隆作为探针对江苏、上海等不同地区随机采集的６０￣１２０日龄病鸡或死亡鸡的胸腺抽提ＤＮＡ，进行Ｄｏｔ ｂｌｏｔ检测ＣＡＶ感染情况。在被检测的８４只鸡胸腺病料中，有２４只鸡的病料显示阳性（阳性检出率为２８．６％），这一结果表明，ＣＡＶ感染在我国鸡群中已很普遍，且引起严重的二重感染。     

应用生物素标记的NDV－cDNA探针检测感染尿囊液中NDV－RNA的初步研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＮＤＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体──Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后,即成ＮＤＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＮＤＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ,而不与ＩＢＤｖ－ｄｓＲＮＡ、ＡＩＢｖ－ｓｓＲＮＡ、ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ－ｄｓＤＮＡ,ＦＰＶ－ｄｓＲＮＡ及ＡＩＬＶ－ｄｓＤＮＡ发生交叉杂交反应。试验结果表明：尽管该探钎含有编码Ｆｏ蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把ＮＤＶ的强、弱毒株区分开。这说明ＮＤＶ强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对ＮＤＶ来说具有特异性,这就为ＮＤＶ的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒高免血清IgG的制备与标记

抗鸡传染性法氏囊病病毒高免血清ＩｇＧ的制备与标记＊贺荣莲吴健敏韦志锋蒋冬福兰美益黄红梅（广西兽医研究所，南宁５３０００１）自从Ｍａｒｑｕａｒｄｔ等１９８０年将ＥＬＩＳＡ的方法应用于鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的抗体检测以来，经有关学者的不断改进，现已广...     

光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症（EDS）的研究

应用光敏生物素标记ＥＤＳＶ－ＤＮＡ与ｐＵＣ１９重组质粒ＤＮＡ做探针，检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便，蛋，输卵管样品，以新城疫病毒（ＮＤＶ），传染性病毒（ＩＢＤＶ），传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），包涵体肝炎病毒（ＩＢＨＶ）作对照。实验结果显示：探针能特异地检出ＥＤＳ病鸡粪便，输卵管，蛋清样品中的病毒，与ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＩＢＶ及ＩＢＨＶ均呈阴性反应。探针灵敏度达１０ｐｇＥＤＳＶ－ＤＮＡ。