中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记

以葡萄种间杂交组合88-110[毛葡萄83-4-96(♀)×欧洲葡萄粉红玫瑰]的F1群体为试材,运用RAPD技术,采用集群分离分析(bulked segregant analysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究.获得了与抗炭疽病基因相连锁的RAPD标记OPC15-1300,并在50株杂种后代、中国野生葡萄8种32个株系、14个欧洲葡萄品种中证明了该标记是可以遗传的.     

中国野生葡萄抗黑痘病基因特有的RAPD标记

 以中国野生葡萄种间杂交组合毛葡萄商 - 2 4×欧洲葡萄龙眼的 F1群体为试验材料 ,运用 RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulked segregant analysis,BSA)的方法进行中国野生葡萄抗黑痘病基因连锁的分子标记的研究。获得了与抗病基因相连锁的 RAPD标记 :OPJ1 3- 30 0 ,并在杂种后代、中国葡萄野生种、河岸葡萄和欧洲葡萄中进行了验证。这为抗病分子标记辅助选择和利用图谱克隆抗病基因及最终将抗病基因导入优良栽培品种奠定了良好的基础     

中国野生葡萄抗白粉病基因的RAPD标记

利用随机扩增多态性 DNA ( RAPD)技术 ,对抗病×感病的葡萄种间杂交组合白河 - 35 - 1×佳利酿的亲本及其 F1 代的 2 4株杂种进行了抗白粉病的遗传分析 ,从 196个随机引物中获得了 1个与中国野生葡萄抗白粉病基因连锁的 RAPD标记 OPV0 3- 1380 ,并在中国野生葡萄华东株系和欧洲葡萄品种中进行了分析验证。     

葡萄感白粉病基因的RAPD标记及其序列分析

【目的】为葡萄抗白粉病育种的辅助选择提供理论依据。【方法】以抗病的中国野生葡萄白河-35-1与感病的欧洲葡萄佳利酿杂交亲本及其F1、F2代为试材,通过对520个随机引物的筛选,从佳利酿中获得了葡萄感白粉病基因的RAPD标记OPV06-1100,并在欧洲葡萄、中国野生华东葡萄和美洲野生葡萄中进行了分析验证。【结果】经克隆、测序,RAPD标记OPV06-1100实际长度为1 016 bp。该标记与欧洲葡萄黄酮醇合成酶基因有92%的同源性,与13条欧洲葡萄叶片非生物胁迫数据库的EST序列有89%~97%的同源性;与3条来自欧洲葡萄感染葡萄皮尔斯病原菌后转录反应获得的EST序列有93%~95%的同源性;与拟南芥感白粉病基因PMR6序列有27.1%的同源性。【结论】OPV06-1100为葡萄属植物感白粉病基因的RAPD标记。该标记为认识葡萄感病基因和基因组以及标记辅助育种奠定基础。     

利用分子标记对无核抗病葡萄杂交后代的辅助选择

利用葡萄无核基因SCAR标记GSLP1-569,葡萄抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354和抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224,对欧洲葡萄无核品种×中国野生葡萄、无核品种自交共6个组合的127株胚挽救苗进行了无核、抗病的分子标记辅助选择。结果表明,在127株胚挽救苗中,检测出拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569的杂种27株,其中4株杂种同时拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569和抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354;拥有抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354的杂种28株,拥有抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224的杂种19株,其中10株杂种同时拥有OPS03-1354和S416-1224。获得的无核、抗病葡萄杂种将为进一步选育出新品系奠定基础。     

中国野生葡萄果实抗白腐病基因RAPD标记的克隆及序列分析

以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F1代及塘尾自交一代33个单株为试验材料,采用BSA法和RAPD技术,对155个随机引物进行筛选,从中获得了1个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD标记OPP09-760。用WizardDNAClean-upSystem试剂盒回收纯化RAPD遗传标记OPP09-760,连接于pGME-T-EasyWector上并克隆测序,得到OPP09-760的全序列,其长度为766bp。根据两端序列设计特异PCR扩增引物作为合成中国野生葡萄抗白腐病检测探针的基础,用于检测葡萄抗白腐病种质种和分子标记辅助育种。     

中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记的克隆及测序

用 Wizard DNA Clean- up System试剂盒将与中国野生葡萄抗黑痘病基因相连锁的 RAPD遗传标记 OPV0 2 - 6 0 0回收纯化 ,连接于 T- Easy Vector并克隆测序 ,得到了 OPV0 2 - 6 0 0的全序列 ,其长度为 6 16 bp。将两端序列设计特异 PCR扩增引物作为合成中国野生葡萄抗黑痘病检测探针的基础 ,用于检测葡萄抗黑痘病种质和标记辅助育种。     

中国野生葡萄及其F_1代抗白粉病的遗传表现

 通过田间自然鉴定的方法，研究了中国野生葡萄９个种３５个株系及其与欧洲葡萄品种种间杂交４个组合的杂种１７１株和自交后代１６株的抗白粉病遗传表现。结果表明，中国野生葡萄及其Ｆ１代在田间自然条件下抗白粉病的表现形式是丰富多样的。中国野生葡萄对白粉病的抗性属于多基因控制的显性独立遗传，在感病的中国野生葡萄中也存在着微效抗病基因。     

葡萄种间杂交F1代的RAPD分析

从260个随机引物中筛选出多态性丰富的25个引物进行中国野生葡萄商-24与欧洲葡萄龙眼种间杂交F1代的RAPD分析。据对219个RAPD标记的统计分析结果表明,不分离标记、按1∶1或3∶1比例正常分离的标记、偏离孟德尔分离比例的标记和异常分离的标记分别占49.8%,40.6%,7.3%和2.3%。双亲共有标记中75.0%不发生分离,是不分离标记的主体。单亲特有标记中55.4%～65.3%发生正常分离,是1∶1分离标记的主体。商-24特有标记中不分离标记占20.4%,而龙眼特有标记中不分离标记占36.9%,商-24基因组中纯合基因位点比例要低于龙眼基因组中纯合基因位点的比例。异常分离的标记是指非亲本RAPD标记,本研究出现了5个异常分离的标记。符合1∶1或者3∶1分离比例的特有RAPD标记,可分别用于构建商-24和龙眼的遗传连锁图谱,双亲共有标记可用于构建双亲的遗传连锁图谱。     

SSR和RAPD 2种分子标记对昆明西山野生蘡薁葡萄资源遗传多样性分析比较

本研究分别应用SSR和RAPD 2种分子标记技术对来自云南昆明西山5个近距离群体的41份野生蘡薁葡萄(Vitis bryoni-aegoliaBge)样品进行遗传结构分析,以比较2种方法评价同种野葡萄各群体间遗传多样性的差异。结果发现,2种分子标记得到的基因分化系数(Gst)均小于0.5,基因流较大(Nm1),表明在较小的地理范围内,同一物种不同群体间存在的遗传分化小,遗传变异发生在群体内的概率远大于在群体间。但RAPD分子标记能更灵敏的体现各个近距离群体间的差异,得到的遗传距离与实际群体间的物理距离呈正相关(r=0.981,P=0.0190.05)。对远距离的同种野生葡萄以及栽培葡萄进行研究后,发现SSR和RAPD标记均能有效地把不同品种的葡萄资源分开,表现为同种野生葡萄处于遗传距离较近的位置上,聚类为总的一枝,而人工栽培品种处于聚类树状图的另一分枝,遗传距离较远。     

葡萄杂交后代抗炭疽病筛选鉴定

探讨葡萄炭疽病的抗性鉴定方法,对杂交后代的抗性单株进行有效选择,可以服务于葡萄炭疽病抗性育种。选用对葡萄炭疽病具有较高抗性的中国野生刺葡萄‘黑珍珠’和对葡萄炭疽病敏感的欧亚种葡萄‘里扎马特’为亲本进行远缘杂交,获得杂交群体,分别用离体叶片、果实、果实浸提液3种材料,采用不同接种方法,对亲本材料和杂交后代单株的炭疽病抗性进行鉴定。结果表明,菌液接种法更适用于葡萄叶片和果实的抗性鉴定;φ=70%乙醇或丙酮均可作为浸提剂用于果实浸提液的抗性鉴定。后代群体中对葡萄炭疽病的高抗、抗、中抗、敏感以及高感单株的比例分别30.77%、35.90%、12.82%、15.38%、5.12%。     

葡萄属植物种质资源遗传多样性的RAPD分析

以起源于中国的野葡萄12个种23个株系、欧美杂种6个品种、河岸葡萄3份、15个欧洲葡萄品种共47份材料为试材,采用RAPD技术对葡萄属植物种质资源遗传多样性进行研究。从520个随机引物中获得16个多态性好的引物用于RAPD分析,共获得DNA条带258个,其中多态性条带186个,DNA条带大小介于100~3 500 bp之间。应用STATISTICA获得了47份葡萄材料树谱图,供试材料可分为6类。欧洲葡萄、欧美葡萄杂种、河岸葡萄与中国野葡萄亲缘关系较远。在中国野葡萄中,山葡萄与其他种亲缘关系较远,刺葡萄次之。     

葡萄花粉形态学研究

对原产中国的野生葡萄种和部分栽培品种共13个种30个株系(品种)的花粉形态进行观察研究。结果表明,除欧美杂交种巨峰葡萄花粉粒为四沟孔型外,其他野生葡萄、欧洲葡萄品种花粉粒均为三沟孔型。葡萄花粉符合埃尔特曼分类标准,中国野生葡萄正常花粉多为椭圆形或长球形,其大小为26.47~36.46μm×12.92~17.71μm。在中国野生葡萄中,秦岭葡萄、蘡薁葡萄、山葡萄极轴较大。雌能花种类的花粉无萌发沟孔存在。花粉电镜扫描结果表明花粉壁纹饰的差异可以作为区别葡萄种之间的一个重要依据。     

与苦丁茶炭疽病抗性基因连锁的RAPD标记

为了研发出与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的RAPD-SCAR特异标记,本研究中首先利用92条RAPD随机引物对苦丁茶冬青中已知对炭疽病高抗或高感的不同种质材料进行RAPD分析,并从中寻找到4个与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的RAPD特异标记特异性片段S69-300,S227-300,S227-2000和S247-400。后续的研究可对这些RAPD特异片段进行回收,扩增和测序,并将测序结果作为开发与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的SCAR标记的基础。     

橡胶树抗寒种质遗传多样性分析

应用RAPD和ISSR技术对20份橡胶树抗寒种质进行遗传多样性分析。结果表明,16个RAPD引物和12个ISSR引物分别扩增出条带113和101条,多态性条带指数(PPB)分别为61.1%和63.4%。据Nei-Li相似系数,ISSR标记在相似系数约0.74处,可将20份材料分为野生种质和栽培种质两大类;RAPD标记在相似系数约0.70处,也可将供试材料分为野生种质和栽培种质两类,但只有XJ002420为野生种质。对2种标记的分析结果进行相关分析,结果表明,RAPD和ISSR所检测的遗传相似系数呈极显著正相关,相关系数为0.672。以上结论表明,RAPD和ISSR标记可用于橡胶树种质资源的遗传多样性研究,但鉴于ISSR较RAPD有更强的多态性检出能力,ISSR技术应作为遗传多样性研究的首选单引物标记。     

葡萄山欧杂交后代果皮颜色的RAPD标记

以葡萄种间BC1杂交组合 79- 33、83- 15 [(山葡萄×红亚历山大 )×白香蕉 ]子代为试材 ,运用RAPD技术进行葡萄山欧杂交后代果皮颜色的分子标记研究发现 ,OPY0 2的扩增片段OPY0 2 - 75 0与白色果皮性状有一定的连锁关系 ,以OPY0 2扩增亲本、F1、BC1、F2 及 2个栽培葡萄品种发现 ,所有的白色果皮单株都扩增出OPY0 2 -75 0 ,但在 6个BC1、F2 黑色果皮单株中也具有该片段。     

RAPD分子标记在蜜蜂遗传育种中的应用

RAPD分子标记在蜜蜂遗传育种中得到较广泛应用 .利用 RAPD分子遗传标记 ,估测蜜蜂性别决定位点 (x)与低幼虫存活率位点的标记序列位置 (STS)之间的遗传距离为 1 .6c M;构建了蜜蜂 (Apismellifera)遗传连锁图 ,确定了蜜蜂性基因位点 (x)、黑色体色基因位点 (blk)、苹果酸脱氢酶 (Mdh-1 )位点分别位于第 3、6、1 8个连锁群 ;确定了影响蜜蜂采粉、报警信息素水平、螫刺行为和体长等数量性状的基因座位 ;筛选出 5种引物 ,这些引物所扩增的 RAPD标记可作为鉴别欧洲蜜蜂和非洲蜜蜂 (A. mellifera L.)的分子标记 .蜜蜂高产性状 RAPD标记的研究已取得一定进展     

中国葡萄属野生种叶片抗白粉病遗传研究

用原产我国野生葡萄6种13个株系和10个欧洲葡萄品种的杂交组合：抗病×抗病,抗病×感病和感病×感病三类,获一代杂种（F#-1）1565株;二代杂种（F#-2）246株和回交一代（BC#-1）105株。采用田间自然鉴定、田间人工接种鉴定和温室接种鉴定的方法研究了F#-1、F#-2和BC#-1抗白粉病的遗传。结果表明,中国葡萄属野生种抗白粉病属于一对基因控制的显性独立遗传。     

山西瘦肉型猪(SD-Ⅲ系)基因组DNA的AFLP和RAPD检测研究

用AFLP和RAPD两种分子标记对山西瘦肉型猪(SD Ⅲ系)进行纯度检测,旨在为评价该猪种的遗传稳定性提供相关参数,并对这两种方法应用于遗传距离、相似系数的估测进行了比较。AFLP实验用8条引物,对SD Ⅲ系14头猪进行了基因组DNA分析,共获得101个AFLP标记,单引物获得的标记数在3～15之间,群体相似系数为0 928(0 892～0 978);遗传距离为0 072(0 108～0 022)。RAPD实验用14条随机引物,共获得124个RAPD标记,单引物获得的标记数在4～11之间,群体相似系数为0 944(0 901～0 987);遗传距离为0 056(0 099～0 013)。结果表明:1AFLP和RAPD适宜于基因组DNA检测,但AFLP优于RAPD,2SD Ⅲ系猪纯度较高。     

应用RAPD分子标记鉴定野生茶树种质资源研究

 应用RAPD标记对原产于云南等地的 2 4份野生茶树资源进行分子鉴定研究。结果表明 ,RAPD标记在鉴定茶树种质资源方面非常有效。有 3种独立的方法可以用于茶树种质资源的分子鉴定 :特殊的标记 ;特异的谱带类型 ;不同引物提供谱带类型的组合。 16个特异标记的存在和 3个特异标记的缺失可以鉴定 14份资源 ;OPO 13扩增的 13种谱带类型可以鉴定 10份资源。利用最少数量引物获得最大鉴定能力 ,对种质资源的分子鉴定尤为重要。OPO 13、OPO 18、OPG 12和OPA 13等 4个引物带型的组合则可以鉴定所有 2 4份资源 ,包括形态和生化成分上几乎没有差异的 2株毗邻野生茶树