检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。     

斑点金标免疫渗滤新技术检测家畜血吸虫病的效果试验

斑点金标免疫渗滤新技术(简称金标法)检测家畜血吸虫病抗体,在本省进行了特异性、敏感性、符合率等试验.金标法能检出人工感染犬血吸虫14 d后的血吸虫病抗体,检出率为100%,可用于血吸虫病早期诊断.粪孵100头份血吸虫病阳性的牛血纸,用金标法检测全部为阳性,阳性符合率为100%;在非疫区的2个县分别采牛血纸100份,用金标法进行检测,未查出血吸虫病阳性牛,阴性符合率为100%.在金标法检测4 000份牛血纸,检出阳性牛为129头,再对这129头牛采粪孵化,有血吸虫毛蚴的牛128头,金标法与病原学检查法阳性符合率为99.2%(99%～100%).在本省54个血防疫区县推广应用,取得了显著的社会经济效益.     

牛奶中恩诺沙星和环丙沙星检测试纸的研制及性能测定

应用胶体金免疫层析技术建立了恩诺沙星和环丙沙星快速检测试纸,并对试纸条的检测限、特异性和稳定性等参数进行了确定。结果表明,该试纸条对牛奶样本的检测限为50μg/L,能够特异性地检测恩诺沙星和环丙沙星,与液相色谱-串联质谱方法检测的阴性样本符合率为97．8％。该试纸条在2℃～8℃或室温可保存12个月,可应用于恩诺沙星在牛奶中的快速筛查现场检测。     

一种检测奶样中布鲁氏菌抗体免疫层析方法的建立

通过制备脂多糖(LPS)并将其作为检测抗原,建立了一种检测奶样中布鲁氏菌抗体的酶联免疫层析方法。通过对处理方法和反应条件的优化,制备出敏感性高、特异性强的布鲁氏菌抗体检测试纸条。该试纸条敏感性为98.0%,抗体滴度为1:2~1:8,特异性为96.0%,且与其他常见病原无交叉反应,批内、批间重复性良好。保存期加速试验显示,该试纸条在2~30℃下可保存12个月;符合率验证显示,该方法与标准奶样的符合率达94.9%。上述结果表明,该检测方法具有敏感性高、特异性强以及方便、快捷等优点,适用于现场大批量检测,因而可应用于奶牛场布鲁氏菌病的快速诊断。     

布鲁氏菌抗体检测试纸条的研制和初步比较

本试验利用胶体金免疫层析技术原理,研制了布鲁氏菌抗体检测试纸条,并以布鲁氏菌阳性血清国家标准品进行了敏感性试验,确定了最低检出量,同时与有可能存在交叉反应的血清和阴性血清进行了特异性试验;然后将保存不同时间的试纸条在进行了敏感性和特异性试验,证明其稳定期可以达到15个月。选择临床牛羊血清30份,利用该试纸条与布鲁氏菌病虎红平板试验抗原进行同步检测,发现两种试剂的检测符合率为98%。试验证明,所研制的布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性高、特异性强、稳定期长。     

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。     

牛羊血吸虫病抗体检测试纸条的推广应用

<正>血吸虫病是严重危害人类和家畜健康的人畜共患寄生虫病。为了解决适用于基层的快速诊断方法,本研究应用乳胶微球免疫层析法研制的牛羊血吸虫病抗体检测试纸条在四川、湖北和云南省部分疫区县、市进行推广应用,共计检测116万份血纸样品,并与传统方法进行符合率和检测效率对比试验,     

非洲猪瘟病毒抗原检测试纸条检测方法的建立及初步评价

分别以非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白特异性单克隆抗体3E1株和7A7株作为检测抗体和捕获抗体,建立了ASFV抗原试纸条检测方法。该方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;对ASFV P72重组蛋白的最低检测量为2.50μg/L;稳定性试验结果表明,试纸条可在2～8℃条件下保存15个月。对100份临床样品的检测结果显示,该方法与荧光定量PCR的符合率为85%。本研究建立的ASFV抗原检测试纸条特异性强、灵敏度高,可用于临床样品中ASFV抗原的检测。     

猪圆环病毒2型胶体金抗体检测方法的建立

为建立检测猪圆环病毒2型(PCV2)胶体金检测方法,本研究对SPA蛋白进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以重组PCV2 ORF2蛋白和猪IgG作为检测线和质控线,制作PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸条。检测结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可以判定结果,对PCV2免疫血清具有高度特异性,与猪其它病毒免疫血清无交叉反应,检测灵敏度与ELISA相近。试纸条在室温保存6个月,其特异性及灵敏度无明显变化。对临床采集的324份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒总符合率为98.77%。表明本研究建立的PCV2抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于PCV2抗体的现场检测。     

牛布鲁菌荧光标记免疫层析试纸条快速检测方法的建立

为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。