猪体外受精中多精子受精

多精子受精指多于一个的精子进入卵母细胞的胞质中,导致多倍体合子的形成、早期胚胎发育夭折或发育异常。哺乳动物在正常的体内受精中多精受精只占1％～2％,当猪卵母细胞在体外成熟和受精时,多精子受精率明显比体内成熟猪卵母细胞的高。多精子受精而发育的猪早期胚胎可发育至囊胚阶段甚至可以更进一步发育,但和两原核正常胚胎相比它们的囊胚内细胞团细胞数明显减少。     

披碱草胚和胚乳的发育

采用常规石蜡切片法,对披碱草(Elymus dahuricus Turcz.)胚和胚乳发育过程进行了观察。结果表明:披碱草花后6h卵细胞受精形成合子,合子休眠期长约6h。花后12h,合子进行第一次分裂。花后1d,形成了四细胞原胚,胚胎发生属紫菀型。花后第9d,在梨形原胚偏上一侧出现小凹沟,器官开始分化。花后第18d时,胚的结构基本发育成熟。披碱草有异常胚发生的现象。胚乳发育早,胚发育晚,胚乳的类型属于核型胚乳。     

哺乳动物卵母细胞及胚胎质量评价方法的探讨

虽然分裂程度和卵裂球形成是早期胚胎的重要标志,但是这些测定不能完整地确定合子能否着床,因此早期胚胎的有效形态学评价是至关重要的。有些胚胎也存在多核卵裂球(MNB)的现象,MNB被认为是异常的,因为其染色体异常率很高,所以对卵裂球核的评价也是必不可少的。经过查阅大量文献     

小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构早期端粒酶活性的测定

采用端粒酶重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-银染法,对小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及重构胚的各阶段端粒酶活性进行测定,对PCR产物的电泳条带进行灰度值分析,计算端粒酶总产品总量。结果表明:(1)体内受精胚胎及核移植重构胚各阶段的端粒酶活性随胚胎分裂呈上升趋势,囊胚期最高(P0.05);(2)体内受精胚胎的端粒酶活性高于体细胞核移植重构胚端粒酶活性。同时进行囊胚计数并测定单卵裂球相对端粒酶活性,结果表明:单卵裂球的端粒酶活性呈下降趋势,囊胚期端粒酶活性最低(P0.05)。以上结果说明小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构胚端粒酶活性变化与细胞发育水平及细胞发育全能性有关。     

牛胚胎移植——第七讲 牛胚胎移植研究课题及其进展(下)

六、胚胎分割动物的早期胚胎,如果因某种原因使其分裂球相互脱离,脱离了的分裂球仍各具有发育成为新个体的能力,这种情况在自然界也偶有发生,称为一卵双生。由于双生的两个个体具有完全相同的遗传物质基础,因而是科研工作中的重要材料。胚胎分割就是用人     

小鼠胚胎母源基因转向合子基因组的转换起始点

为研究母、父源基因以及合子基因在动物胚胎早期发育中发挥功能的重要时间节点,本实验利用转增强型荧光蛋白(EGFP)基因小鼠(♀/♂),分别与野生型小鼠进行交配,收集受精后的胚胎于倒置荧光显微镜下观察,寻找EGFP基因在不同胚胎发育阶段时间节点表达的特征,作为直观判断母源基因向合子基因的转换时间起始点的生物标志。结果发现:从EGFP转基因母鼠获得的5枚卵母细胞/原核胚中表达了EGFP基因,在荧光显微镜下表现出绿色荧光;而从野生型母鼠获得的20枚胚胎到2-细胞(2-cell)期后开始表现出绿色荧光,随着胚胎的发育,出现荧光的胚胎数量逐渐增多,达到5枚。综上,EGFP基因可以作为小鼠胚胎发育过程中合子基因的标志物,小鼠胚胎发育过程中母源基因向合子基因转换的时机在胚胎发育的2-cell期。     

奶牛妊娠期及分娩后的管理技术

妊娠是哺乳动物的胚胎和胎儿在母体子宫内发育成长的时期,妊娠起始于受精、终止于分娩.妊娠期一般可分为胚胎早期、胚胎期和胎儿期.胚胎早期为受精后12～15d.胚胎期为受精后的第15～33d.胎儿期到受精后的第34d至分娩.胎儿发育成熟,妊娠期满,母体将胎儿及其附属物从子宫排出体外的生理过程就是分娩.     

牛妊娠的生理过程

<正> 1 胚胎的发育与附植受精卵形成合子后,卵裂球不断时行分裂增殖,先后经过桑椹胚、囊胚、扩张囊胚等阶段,最后从透时带中孵出,形成了泡状透明的胚泡。初期的胚泡在子宫内的活动受到限制,在子宫中的位置逐渐固定下来。并开始与子宫内膜发生组织上的联系,逐渐附植着床在子宫黏膜上。牛受精后一般20～30天开始着床,着床紧密的时间约为受精后60～75天。胚泡由2部分细胞组成,一部分在胚泡的顶端聚集成团,将发育成为胚体,另一部分构成胚泡壁,覆盖上述部分,成为胚泡的外膜,将形成胎膜和胎儿胎盘。     

哺乳动物胚胎基因组表达起始的调控

哺乳动物受精后 ,早期胚胎缺乏转录活性 ,早期发育由母源性的转录产物所调节。合子基因组激活的时期因物种而异。合子基因组激活可分为 2个时期 :起始阶段低水平的表达和第 2阶段爆发式的表达。在小鼠 1 细胞期胚 ,雌原核无转录活性 ,但雄原核出现基因转录。在 2 细胞早、中期之前 ,小鼠特异性基因的表达不需要增强子的作用 ,其启动子没有受到抑制 ,但由于基本转录因子的浓度较低 ,基因转录活性不高。基因高水平的转录发生在小鼠 2 细胞后期 ,此时转录抑制建立 ,特异性基因的转录依赖于增强子的作用。     

早期胚胎体外培养相关细胞因子研究进展

在体外培养哺乳动物和人类早期胚胎时，早期胚胎往往不能完成从受精卵到囊胚的发育全过程，而停留在某个发育时期，该现象被称为“发育阻滞”。研究表明动物早期胚胎发育是由贮存在受精卵内的母型mRNAs和蛋白质控制的。母型基因指导受精卵最初的数次卵裂，合子型基因在随后的胚胎发育中起调控作用。而在体外培养过程中，合子型基因开启受阻是导致早期胚胎发育阻滞的直接原因m。推测输卵管上皮细胞分泌的某些蛋白可能激活合子型基因开启圆，虽然这些信号分子的结构和作用机制尚不清楚，但不能排除其中含有某些已知细胞因子的可能性。因此，本文就影响体外早期胚胎发育的5种细胞因子作一简要综述。     

核移植兔研究进展

哺乳动物胚胎细胞核移植(NuclearTransplantation,NT)是指将动物早期胚胎卵裂球以显微手术和细胞融合的方法移植入去核的卵母细胞,并使其能正常分裂、发育成为新个体的技术。核移植技术对于研究动物繁殖和胚胎在发育过程中的核质互作有重要意义。尽管核移植在多种动物都已...     

热激损伤对牛孤雌激活胚胎后续发育的影响

为了研究早期胚胎核与胞质对热激的应激反应,以及产生应激后二者之间的相互作用对胚胎体外发育、合子期激活基因的表达及胚胎细胞凋亡的影响。本研究将孤雌激活胚随机分为2组分别于38.5或41℃培养7h;随后将二者核进行置换,使用正常培养的胚胎与热激胚胎进行核置换,分别构建热激核-正常胞质重构胚以及热激胞质-正常核重构胚,检测了核质置换胚胎的体外发育率、合子激活基因的表达和胚胎凋亡情况。结果,当正常核移入41℃热激的卵胞质,重构胚的发育率显著下降;热激后的核质置换胚胎中存在合子基因激活不完全的现象,这种情况主要存在于热激胞质-正常核重构胚中;热激能诱导胚胎发生细胞凋亡,早期胚胎的胞质对热激更敏感,并在后期的诱导凋亡中起到主导作用。这些结果表明,虽然热激对核和胞质都有损伤,但胞质对热激损伤更为敏感。早期胚胎受到热激后导致发育能力降低的易感性主要是由胞质所引起的;早期胚胎受到热激可能会损伤到卵胞质中的母源因子,即使与正常核构成重构胚也依然会导致合子基因表达异常;并且胞质受到热激损伤会在热激诱导的凋亡机制中起到比核更大的作用。     

牛妊娠的生理过程

1胚胎的发育与附植 受精卵形成合子后,卵裂球不断时行分裂增殖,先后经过桑椹胚、囊胚、扩张囊胚等阶段,最后从透时带中孵出,形成了泡状透明的胚泡。初期的胚泡在子宫内的活动受到限制,在子宫中的位置逐渐固定下来。并开始与子宫内膜发生组织上的联系,逐渐附植着床在子宫黏膜上。     

导致妊娠母牛胚胎早期死亡的三大原因

正早期胚胎死亡主要是指胚胎在附植前后发生的死亡,为屡配不孕的主要原因之一。奶牛的受精率一般能够达到90%,受精后胚胎损失可达29%~39%,占牛繁殖失败的5%~10%。胚胎损失发生的主要时间段在受精后43 d以内,大多数早期胚胎死亡发生在配种后8~19 d,占胚胎损失的25%~30%。发生在受精后15 d内的胚胎损失,往往是由于发生了排卵延迟、受精异常、胚胎染色体畸形等,造成胚胎发育能力较差、不能够正常发育而引     

精子不同处理和胰岛素不同浓度对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精的影响

探讨了分别使用新鲜、冷冻和超声波断尾精子以及在胚胎培养液中分别添加不同浓度胰岛素对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精(ICSI)胚胎早期发育的影响.结果:(1)使用冷冻解冻精子与新鲜精子相比对猪卵母细胞ICSI后的卵裂率和囊胚率均无显著影响(P＞0.05);2)精子断尾与否对猪卵母细胞ICSI后的分裂率和囊胚率没有显著影响(P＞0.05);3)在胚胎培养液中添加5 mg/L胰岛素与对照组相比可显著提高猪ICSI胚胎的囊胚发育率(18.22% vs 3.60%,P＜0.05).     

鸡胚胎的发育及孵化期的注意事项

1胚胎发育过程及其条件要求胚胎发育即从卵巢上排出的卵子被输卵管漏斗部接纳后,与精子相遇受精开始。由于母鸡体温高达41.5℃,卵子受精不久即开始发育。到蛋产出体外为止,受精卵约经24小时不断分裂而形成的1个多细胞的胚胎。     

以骡鸭为宿主的PGCs转染途径制备转基因家禽

转基因技术在基础理论研究和生产实际中都展示出良好的应用前景。目前,哺乳类与鱼类的转基因技术已相当成熟,并获极大成功,而家禽的转基因技术还十分落后。家禽为体内受精,受精后在卵子周围形成卵白、壳膜及蛋壳,同时受精卵发生快速分裂。受精约20h后产出体外时,胚胎已发育到6000个细胞。因此,对家禽进行早期遗传操作十分困难。尽管如此,国外仍在努力探讨克服家禽胚胎遗传操作的难题,并取得一定的进展。据报道,到目前为止国外实验室已研究的家禽转基因技术主要有:1逆转录病毒感染技术,2DNA显微注射技术3精子介导法[1,2]。其中逆转录病毒感…     

用受精鸡蛋保存牛胚胎

受精鸡蛋有利于牛早期胚胎的发育。美国的Blakewood等报道,用受精鸡蛋培养的胚胎多数能继续发展,移植后产下了羔羊或犊牛。这种程序很简单:在蛋壳上打一个孔,放进胚胎,然后封口。在液氮中冷冻运输牛胚胎,妊娠率降低。如果将胚胎放在鸡蛋里保存,就可以进行长途运输,而取代成本较高的在液氮中冷冻保存的方法。动物学家考虑用鸡蛋作哺乳动物胚胎的中     

ZAR1基因的研究进展

研究证实,胚胎的早期发育不是由细胞核控制的,而是由储存在卵质中或由卵源基因表达的一些因子所控制,这些基因即被称作母性效应基因。合子阻滞因子1(ZAR1)基因作为第一个被发现的具有卵母细胞特异性的母源性基因,在母型合子转换中起重要作用并影响胚胎早期发育。近年来随着深入研究,人们发现ZAR1基因还与家畜的繁殖性状、多种肿瘤疾病的发生及基因的转录调节有着重要的关系。文章综述了ZAR1基因的结构与组织表达分布,同时概述了其对胚胎早期发育、繁殖、癌症发生及调节基因转录的作用,并对其生物功能进行展望,以期为更深层次地研究和提高胚胎早期发育、繁殖性状、治疗不孕、攻克肿瘤疾病难题提供研究基础和方向。     

YWHAZ在小鼠早期胚胎发育过程中的作用

为了探究YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的表达、定位和作用,本试验利用RT-PCR和Western blot方法检测Ywhaz基因及其编码蛋白在小鼠早期胚胎发育中的表达;利用免疫荧光技术检测YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的定位;使用特异性的siRNA沉默合子中的Ywhaz,在胚胎发育的1.5,2.5,3.0,3.5,4.5,5.0 dpc分别观察2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率,阐明在合子中沉默Ywhaz基因对小鼠早期胚胎发育的影响。结果显示,Ywhaz mRNA及其编码蛋白在小鼠1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚中均有表达,YWHAZ蛋白定位在小鼠早期胚胎的细胞质和细胞核中。Ywhaz沉默组的2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率均极显著低于对照组(P<0.01),沉默组5.0 dpc囊胚率显著高于其4.5 dpc囊胚率(P<0.05)。结果表明,Ywhaz mRNA及其编码的蛋白在小鼠早期胚胎中有表达,其蛋白主要定位在早期胚胎的细胞核和细胞质中;在合子中沉默Ywhaz基因可导致小鼠早期胚胎发育率降低且存在明显...